王東輝 田小海 李冬梅

(1長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，吉林 長(zhǎng)春 130000；2長(zhǎng)春大學(xué)特殊教育學(xué)院)

阿爾茨海默病(AD)又稱老年性癡呆癥，是隱匿的腦部神經(jīng)退行性疾病，其特點(diǎn)是進(jìn)行性發(fā)展趨勢(shì)一旦出現(xiàn)，AD癥狀將無有效藥物逆轉(zhuǎn)。隨著世界人口老齡化的趨勢(shì)患病率逐年上升，患者臨床表現(xiàn)多為記憶力、智力障礙，甚至出現(xiàn)行動(dòng)困難、大小便失禁，嚴(yán)重影響患者和家屬的生活質(zhì)量〔1～4〕。目前AD患者尚無有效治療藥物，本研究旨在探討石菖蒲聯(lián)合奧拉西坦對(duì)AD大鼠的治療效果。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 SPF級(jí)Wistar雄性大鼠60只，體重(230±20)g，購(gòu)于長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。隨機(jī)分為空白對(duì)照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(50只)；實(shí)驗(yàn)組均為通過Morris水迷宮篩選的造模成功的AD大鼠，分為模型組、單純奧拉西坦組、低劑量聯(lián)合組、中劑量聯(lián)合組和高劑量聯(lián)合組，每組10只。

1.2實(shí)驗(yàn)藥品、試劑與設(shè)備 中藥石菖蒲購(gòu)于毫州市佰林堂藥業(yè)有限公司，自行研磨細(xì)粉使用；奧拉西坦膠囊由石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司提供(國(guó)藥準(zhǔn)字H20031033)；D-半乳糖購(gòu)于長(zhǎng)春市南關(guān)區(qū)金萊博生物實(shí)驗(yàn)服務(wù)部(美國(guó)，invitrogen)；大鼠β-淀粉樣蛋白(Aβ)、微管相關(guān)蛋白(tau)、磷酸化管tau(P-tau)及炎性因子腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1β和IL-6蛋白含量檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程公司。Morris水迷宮和Epoch酶標(biāo)儀由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院提供。

1.3模型制備和給藥方法 實(shí)驗(yàn)組50只大鼠每日腹腔注射D-半乳糖(100 mg/kg)，連續(xù)6 w。空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組同時(shí)在造模成功后每日灌胃給藥5 w，其中空白對(duì)照組每日生理鹽水灌胃5 ml/kg，實(shí)驗(yàn)組分別給予奧拉西坦40 mg/kg、石菖蒲0.5 g/kg+奧拉西坦40 mg/kg、石菖蒲1.0 g/kg+奧拉西坦40 mg/kg和石菖蒲高劑量2.0 g/kg+奧拉西坦40 mg/kg。

1.4樣本制備 實(shí)驗(yàn)結(jié)束次日10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉后，眼球取血，3 000 r/min離心10 min，留血清4℃待檢測(cè)，分離腦組織海馬區(qū)-80℃保存待檢測(cè)。

1.5各組血清和腦組織海馬區(qū)神經(jīng)相關(guān)蛋白Aβ、tau、P-tau的檢測(cè) 操作嚴(yán)格遵守酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒步驟，腦組織海馬區(qū)需要4℃超聲勻漿為0.01%的組織懸液。

1.6各組血清和腦組織海馬區(qū)炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的檢測(cè) 操作嚴(yán)格遵守酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒步驟，腦組織海馬區(qū)需要4℃超聲勻漿為0.01%的組織懸液。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組血清和腦組織海馬區(qū)Aβ、tau、P-tau的蛋白含量比較 與空白對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組各組血清和腦組織海馬區(qū)Aβ、tau、P-tau的蛋白含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，各給藥組血清和腦組織海馬區(qū)aβ、tau、P-tau的蛋白含量均下降且石菖蒲呈劑量依賴性，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。

表1 各組血清和腦組織海馬區(qū)Aβ、tau、P-tau的蛋白含量比較

2.2各組血清和腦組織海馬區(qū)炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量比較 與空白對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組各組血清和腦組織海馬區(qū)炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，各給藥組血清和腦組織海馬區(qū)炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量均下降且石菖蒲呈劑量依賴性，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見表2。

表2 各組血清和腦組織海馬區(qū)炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量比較

3 討 論

AD發(fā)病隱匿，是世界老年人的第三大死因；隨著世界人口老齡化的趨勢(shì)發(fā)病日益增多，探究AD的治療方案勢(shì)在必行〔5〕。以往研究發(fā)現(xiàn)〔6〕，AD發(fā)病與Aβ、tau和P-tau的大量沉積有關(guān)，而這三者又能引發(fā)小膠質(zhì)細(xì)胞表型的活化且促進(jìn)炎性因子表達(dá)，因此提示AD發(fā)病與炎癥密切相關(guān)〔7～9〕。

近年來臨床用藥發(fā)現(xiàn)西藥治療AD作用有限，靶點(diǎn)單一且容易導(dǎo)致肝腎功能損傷和出現(xiàn)耐藥性，奧拉西坦作用于AD患者，能疏通血管、改善神經(jīng)功能和認(rèn)知功能，屬于促智類藥物對(duì)腦組織有很好的修復(fù)功能〔10～13〕。在中藥治療AD的眾多方劑中石菖蒲的使用率較高，石菖蒲明確能入心腎經(jīng)，是芳香開竅代表藥物，能輕身、不忘、不迷和延年，具有抗氧化、抗衰老、強(qiáng)心、降壓、改善記憶及抑制炎性因子表達(dá)的作用〔14，15〕。

AD發(fā)病時(shí)由于Aβ、tau、P-tau蛋白大量聚集形成，他激活腦組織內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放大量炎性因子如TNF-α、IL-1β及IL-6等，這些炎性因子進(jìn)一步產(chǎn)生炎癥反應(yīng)從而損傷機(jī)體神經(jīng)細(xì)胞〔16，17〕。本研究基于奧拉西坦能提高患者認(rèn)知能力，石菖蒲具有抗氧化、抗衰老、改善記憶及抑制炎性因子表達(dá)的作用將兩者聯(lián)合用藥，探究聯(lián)合用藥的功效。

本研究結(jié)果提示，中藥石菖蒲聯(lián)合奧拉西坦治療效果優(yōu)于單純奧拉西坦，可能與降低大鼠血清和腦組織海馬區(qū)神經(jīng)相關(guān)蛋白和炎性因子有關(guān)，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步探討。