張曼曼

（江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 211100）

引言

鹽酸雷尼替丁膠囊對于治療潰瘍病和胃酸高分泌病具有十分重要的作用，尤其在治療十二指腸潰瘍時十分有效。在鹽酸雷尼替丁的實際應(yīng)用過程中，臨床上主要使用膠囊劑，而在美國和英國藥典以及日本藥局方當中均未對膠囊劑進行收載。我國在2000 版藥典當中針對鹽酸雷尼替丁膠囊的原料和制劑，采用TCL 法對相關(guān)物質(zhì)進行了控制，但發(fā)現(xiàn)用碘蒸氣方法顯色不夠穩(wěn)定，而且重現(xiàn)性相對較差。對此，本文結(jié)合原料含量測定方法開展了具體的實驗研究，并運用HPCL 法對鹽酸雷尼替丁膠囊的相關(guān)物質(zhì)進行分析，通過自身對照法來進行計算。通過具體實驗可以發(fā)現(xiàn)，運用HPTC 法可以有效分離鹽酸雷尼替丁和相關(guān)物質(zhì)峰，并能夠限量分析相關(guān)物質(zhì)，操作十分簡便和快速，準確性相對較高。

1 鹽酸雷尼替丁膠囊概述

鹽酸雷尼替丁的化學(xué)名稱為N’-甲基-N-[2-[[[5-[（二甲氨基）甲基]-2-呋喃基]-甲基]硫代]乙基]-2-硝基-1，1-乙烯二胺鹽酸鹽，主要用于治療反流性食管炎、胃潰瘍以及其他高胃酸分泌疾病等。其藥理作用主要包括以下兩方面，一是，藥理雷尼替丁具有競爭性阻滯組胺與H2受體結(jié)合的作用。抑制胃酸作用，以摩爾計為西咪替丁的5 倍～12 倍，因此為強效的H2受體阻滯劑。具體來說，鹽酸雷尼替丁膠囊是一種選擇性的H2受體阻滯劑，通過作用于胃壁細胞上的H2受體，抑制胃酸的基礎(chǔ)分泌和進食后的分泌，從而降低胃酶的活性。目前主要用于胃炎、胃糜爛、胃潰瘍、十二指腸潰瘍的治療，此外，對幽門螺旋桿菌感染也有抑制和殺滅作用。治療的療程跟所治療的疾病有關(guān)系，治療胃炎、胃糜爛，雷尼替丁療程為2 周左右[1]。治療胃潰瘍、十二指腸潰瘍，療程在4 周～8 周。伴有幽門螺旋桿菌感染時，需要先聯(lián)合使用其他3 種藥物，將幽門螺旋桿菌先根治，然后再治療胃炎、胃糜爛、胃潰瘍、十二指腸潰瘍等。二是，毒理小鼠口服的LD50 1440 mg/kg～1 750 mg/kg。連續(xù)口服5 周的每天最大無毒劑量，大鼠（雄）為500 mg/kg，大鼠（雌）為250 mg/kg，犬為40 mg/kg。連續(xù)26 周的每天最大無毒劑量，大鼠為100 mg/kg，犬為40 mg/kg。小鼠口服100 mg/kg～200 mg/kg 達114 周，大鼠口服100 mg/kg～2 000 mg/kg 達129 周，均未見致癌作用[2]。

2 HPCL 法分析鹽酸雷尼替丁膠囊中有關(guān)物質(zhì)

2.1 儀器和試劑

本次實驗需要采用的儀器包括高效液相色譜儀和二極管陣列檢測器等，試藥則由我國藥品生物制品檢定廠提供的鹽酸雷尼替丁，樣品則為我國8 個省市廠家所生產(chǎn)的市售藥品，甲醇選用色譜純，其余為分析純。

2.2 實驗方法和結(jié)果

2.2.1 色譜條件

色譜柱的柱溫為25℃，流動相主要為0.1 mol·L-1醋酸銨-甲醇，其體積比為64∶36，流速則設(shè)定為1.0 mol/min-1，檢測波長度為320 nm，進樣量則達到10 μL。

2.2.2 檢測波長和流動相，確定樣品濃度

在本次實驗當中，原料藥含量的測定波長主要采用320 nm。上述流動相不僅能夠保證峰形，而且還具有比較適中的保留時間。兩倍時間主要是指在12 min 內(nèi)完成具體的分析工作，并要確保鹽酸雷尼替丁和相關(guān)物質(zhì)能夠得到有效分離，滿足具體的要求。樣品質(zhì)量濃度主要選擇0.15 mg/mL，這樣不僅能夠稀釋100 倍，而且還能夠與對照液響應(yīng)相適中，確保檢出量能夠滿足具體要求，具有合適的信噪比，能夠與藥典當中含量測定濃度保持一致[3-4]。這樣在色譜條件相同時，不僅可以進行定量分析，而且還能夠檢查相關(guān)物質(zhì)[5]。

2.2.3 空白實驗

相關(guān)實驗人員需要采用流動相制成相應(yīng)的空白溶液，并按照“有關(guān)物質(zhì)檢查法”進樣，但其色譜圖上并沒有任何色譜峰，對照品和供試品都選用鹽酸鹽，在一定時間內(nèi)，自身對照的稀溶液仍然存在，而且量保持不變。在同等色譜條件下使用稀鹽酸進行進樣，可以證實為氯離子峰。

2.2.4 線性實驗

對適量的鹽酸雷尼替丁對照品進行精密稱取，在加入流動相后進行定量稀釋，從而制成相應(yīng)濃度的溶液。之后，相關(guān)實驗人員需要按照“有關(guān)物質(zhì)檢查法”的相關(guān)方法進一步開展實驗，從而得到進樣量和峰面積回歸方程，其中，進樣量需要控制在0.3μg/μL～3 μg/μL 范圍以內(nèi)，且要具有良好線性[6]。

2.2.5 專屬性實驗

相關(guān)實驗人員在采用HPLC 法開展實驗時，需要確保分離度能夠滿足具體要求，而通過回收率實驗，可以對HPLC 法的準確程度進行驗證，具有較強的專屬性。

2.2.6 重復(fù)性實驗

相關(guān)實驗人員需要連續(xù)取同一批樣品進行3 次相關(guān)物質(zhì)分析，各雜質(zhì)峰面積和與自身對照主峰面積比保持相同，其中n=6，RSD=0.28%。相關(guān)實驗人員還需要連續(xù)對同一樣品溶液進行5 次取樣，各雜質(zhì)峰面積和與自身對照主峰面積間的比保持相同，其中n 為5，RSD 為0.28%。

2.2.7 穩(wěn)定性實驗和耐用性實驗

實驗人員需要分別取供試品溶液在0、4、8、24h進行進樣，并要對雜質(zhì)峰總面積和對照液比較進行測定，可以發(fā)現(xiàn)，其比例基本保持不變。通過對不同型號的C18 柱進行使用，對同一份樣品進行測定，可以發(fā)現(xiàn)只是在保留時間方面存在一定的差異，而各雜質(zhì)峰面積和對照液峰面積之間相比，比例基本保持不變。

2.2.8 有關(guān)物質(zhì)檢查法

實驗人員需要將適量鹽酸雷尼替丁膠囊內(nèi)容量取出，然后進行精密稱定，在加入流動相溶解之后，可以制成0.15 mg/mL的溶液，將其進行過濾處理，將初濾液棄去，以續(xù)濾液作為供試品溶液，并要精密吸取1 mL，在100 mL量瓶當中放置。之后，需要加入流動相進行稀釋，一直達到刻度值，然后搖勻處理，最后得到0.001 5 mg/mL 的對照溶液。相關(guān)實驗人員需要取10 μL 對照溶液注入液相色譜儀，并對儀器靈敏度進行調(diào)整，確保主成分色譜峰高度可以達到量程的20%～25%。然后，需要取10 μL供試品溶液，將其注入液相色譜儀中，對色譜圖進行記錄，一直到供試品溶液主成分峰的保留時間的2 倍。對供試品溶液色譜圖進行分析，例如顯雜質(zhì)峰，各雜質(zhì)峰的面積總和應(yīng)該小于對照品溶液主峰面積的4 倍[7]。

2.2.9 樣品中相關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

根據(jù)擬定方法對鹽酸雷尼替丁膠囊相關(guān)物質(zhì)進行分析，并與TLC 法進行對比，可以得到如表1 結(jié)果。

表1 10 批樣品有關(guān)物質(zhì)HPLC 分析結(jié)果及與TLC 對比

3 結(jié)果討論

首先，根據(jù)上述實驗和結(jié)果可知，通過對HPLC法進行使用，可以對鹽酸雷尼替丁膠囊樣品中相關(guān)物質(zhì)總量進行準確檢查，并能夠?qū)Σ煌瑯悠冯s質(zhì)情況進行區(qū)別。例如，9 號樣品采用HPLC 測定，可以發(fā)現(xiàn)其具有3 個雜質(zhì)峰，而運用TLC 方法則只出現(xiàn)了一個雜質(zhì)斑點，且只是對比其他樣品顏色相對深一些，由此可以看出，HPLC 的分離效果相對較好。

其次，選用自身對照法來分析相關(guān)物質(zhì)，該方法當中所規(guī)定的供試品溶液各雜質(zhì)峰面積和應(yīng)該低于自身對照溶液主峰面積的4 倍，這與我國藥典的現(xiàn)行方法相符合。

最后，該方法的色譜條件可以同時測定鹽酸雷尼替丁膠囊含量，其加樣回收率可以達到100.8%，而RSD 則可以達到0.91%，其中n 為6。在相同色譜條件下，不僅可以進行定量分析，而且還能夠檢查相關(guān)物質(zhì)，采用此方法同時測定10 批樣品含量，其結(jié)果符合原標準方法。

4 結(jié)語

綜上所述，通過采用HPLC 法，可以有效分析鹽酸雷尼替丁膠囊的有關(guān)物質(zhì)，而且此種方法相對TLC 方法具有更為明顯的優(yōu)勢，不僅操作簡單方便，而且影響因素相對較少，可以有效實現(xiàn)鹽酸雷尼替丁和其他雜質(zhì)之間的完全分離，限量檢查相關(guān)物質(zhì)，而且還可以在同一色譜條件下檢查有關(guān)物質(zhì)和進行含量測定，因此應(yīng)用價值較高，應(yīng)得到進一步推廣和應(yīng)用。