蔣麗，盧悅，買迪娜木·阿布力米提，商雪珂，許賀志祥，楊曉君，3*

（1.國藥集團新疆新特藥業(yè)有限公司，新疆 烏魯木齊 830000）（2.新疆農(nóng)業(yè)大學食品科學與藥學學院，新疆 烏魯木齊 830052）（3.新疆果品采后科學與技術重點實驗室，新疆 烏魯木齊 830052）

山杏仁（Semen armeniacaeAmanrum）又名苦杏仁，是薔薇科杏屬植物，廣泛分布在世界各地，在我國主要產(chǎn)于遼寧、內蒙古、陜西、甘肅、新疆等干旱和半干旱地區(qū)，資源豐富[1，2]。野山杏在新疆的伊犁和哈密地區(qū)分布廣泛，且因山杏樹耐寒、耐旱、耐貧瘠且適應性強，具有良好的防風固沙作用，加之國家政策的大力支持，使得山杏樹在新疆的栽培面積不斷擴大。杏仁是我國傳統(tǒng)中藥，不僅具有治風寒、定喘潤肺、止咳祛痰等藥效作用[3]，還具有豐富的營養(yǎng)價值，是一種藥食兼用的材料，杏仁中含有油脂、蛋白質、糖類、粗纖維以及維生素E等多種維生素。

目前我國對山杏的研究主要集中在果肉以及杏仁油上，隨著杏仁油加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，產(chǎn)生了大量杏仁粕，杏仁粕中含有約34%的果仁粗蛋白[4]，伊吾縣野山杏中杏仁粕蛋白可達47.8%，而杏仁粕僅作為動物飼料處理，造成資源的浪費，因此開發(fā)利用新疆野山杏特色資源具有十分重要的意義[5-7]。

近年來，食物蛋白質酶解物中的水解產(chǎn)物被稱為食源性生物活性肽，生物活性肽（Bioactive peptides）是一種特殊的蛋白質片段，與蛋白質相比，生物活性肽不僅易于吸收，而且具有廣泛的生物活性[8，9]，例如：提高抗氧化性、降血壓、降血脂、抗血栓、抑菌、免疫調節(jié)等作用受到廣泛關注[10-12]。其中抗氧化肽是重要的生物活性肽之一，按來源可分為天然抗氧化肽、蛋白降解抗氧化肽和人工合成抗氧化肽三種，其中以蛋白降解多肽為主，主要從動植物中提取蛋白而得。研究表明，抗氧化肽可以預防與癌癥和動脈粥樣硬化等眾多退行性疾病相關的氧化應激[13]。與其他制備方法相比，酶解法因價格低廉、操作簡單、反應溫和，可保護產(chǎn)物蛋白質營養(yǎng)價值等優(yōu)點廣泛使用[14]。

本研究以野山杏仁作為原料，在磁力攪拌方式下采用酶解法從杏仁中提取杏仁多肽，確定最佳提取條件，通過單因素實驗與正交實驗確定木瓜蛋白酶酶解的最優(yōu)工藝指標，同時針對野山杏多肽的體內抗氧化活性進行研究，探討伊吾縣野山杏多肽的體內抗氧化作用，為伊吾縣野山杏多肽的生物活性機制研究提供一定的理論基礎。

1 試驗材料

1.1 材料與儀器

1.1.1 原料

新疆伊吾縣野山杏仁，由新疆伊吾天葦生物科技公司提供。

1.1.2 儀器設備和試劑

1.1.2.1 主要試劑

鹽酸（分析純），南京建成生物工程研究所；氨基酸水解分析標準樣品，德國塞卡姆Sykam；三羥甲基氨基甲烷（分析純），Gentihold；甲醛溶液（分析純），天津市致遠化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純），天津市致遠化學試劑有限公司；雙蒸水（自制）；丙二醛（MDA）測試盒，南京建成生物試劑研究所；總超氧化物歧化酶（T-SOD）測試盒，南京建成生物試劑研究所；谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）測試盒，南京建成生物試劑研究所；抗壞血酸，天津市致遠化學試劑有限公司；木瓜蛋白酶，北京奧博星生物有限公司。

1.1.2.2 主要儀器

XMT-DA數(shù)顯恒溫水浴鍋，余姚市亞星儀器儀表有限公司；80-2離心沉淀器，金壇市醫(yī)療儀器廠；PHS-2C型精密酸度計，上海大普儀器有限公司；85-2控溫磁力攪拌器，江蘇金怡儀器科技有限公司；S-433D全自動氨基酸分析儀，德國塞卡姆 Sykam；X-Mark酶標儀，伯樂生命醫(yī)學產(chǎn)品上海有限公司；Neofuge 13R臺式高速冷凍離心機，力康生物科技有限控股公司；XHF-DY高速分散器，寧波新芝生物科技股份有限公司；LGJ-10型冷凍干燥機，北京松源華興科技發(fā)展有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 野山杏多肽的提取工藝優(yōu)化

1.2.1.1 野山杏處理方法

野山杏仁置于燒杯中，在 60 ℃的水浴中浸泡10～20 min，即可去皮，外皮自然陰干保存，去皮后的杏仁于60 ℃干燥箱烘干2～4 h，將烘干的野山杏仁粉碎過60目篩，經(jīng)正己烷回流2 h后取沉淀，為杏仁粕，將脫油后的杏仁粕于45 ℃鼓風干燥2 h，粉碎過80目篩，即為酶解粕原料。

1.2.1.2 粗蛋白檢測標準曲線的繪制

氨氮標準儲備溶液（以氮計）（1.0 g/L）：稱取105 ℃干燥2 h的硫酸銨0.4720 g，加水溶解后轉于100 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，混勻，此溶液每毫升相當于1.0 mg氮。

氨氮標準使用溶液（0.1 g/L）：用移液管吸取10.00 mL氨氮標準儲備液于100 mL容量瓶內，加水定容至刻度，混勻，此溶液每毫升相當于0.1 mg氮。

粗蛋白按GB 5009.5-2016分光光度法測定[15]，吸取0.00、0.05、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL氨氮標準使用溶液，分別置于10 mL比色管中，加4.0 mL乙酸鈉-乙酸緩沖溶液及4.0 mL顯色劑，加水稀釋至刻度，混勻。置于100 ℃水浴中加熱15 min。取出用水冷卻至室溫后，移入1 cm比色杯內，以零管為參比，波長400 nm處測量吸光度值，根據(jù)標準各點吸光度值繪制標準曲線并計算線性回歸方程。

以氨氮標準液濃度C（mg/mL）為橫坐標，吸光度值 A為縱坐標，線性擬合，線性回歸方程為：A=0.9899C-0.0567（r=0.9980），在 0.00～1.00 mg/mL范圍內呈良好的線性關系，故可以用此方法來快速檢測提取溶液中蛋白質的含量。粗蛋白檢測標準曲線見圖1。

1.2.1.3 木瓜蛋白酶水解條件的單因素試驗設計

經(jīng)前期試驗證明，野山杏多肽在磁力攪拌酶解方式下利用木瓜蛋白酶水解度最高，多肽水解度為：35.02%[16]。因此在磁力攪拌酶解方式下考察酶底物比、料液比、酶解時間、pH值和酶解溫度對野山杏多肽水解度的影響。

（1）酶底物比對野山杏多肽水解度的影響

設定酶底物比分別為1%、2%、3%、4%、5%，料液比1:20，pH為7.0，反應溫度為60 ℃條件下，酶解120 min。

（2）料液比對野山杏多肽水解度的影響

根據(jù)（1）篩選出的酶底物比，料液比分別為1:10、1:15、1:20、1:25、1:30，pH為7.0，反應溫度為60 ℃條件下，酶解120 min。

（3）酶解時間對野山杏多肽水解度的影響

根據(jù)1篩選出的酶底物比，（2）篩選出的料液比，pH為7.0，反應溫度為60 ℃條件下，將酶解時間分別設定為30、60、120、180、240 min。

（4）pH值對野山杏多肽水解度的影響

根據(jù)（1）篩選出的酶底物比，（2）篩選出的料液比（3）篩選出的酶解時間，設定pH值為4、5、6、7、8，反應溫度為60 ℃條件下進行酶解。

（5）酶解溫度對野山杏多肽水解度的影響

根據(jù)（1）篩選出的酶底物比，（2）篩選出的料液比，（3）篩選出的酶解時間，（4）篩選出的 pH值，設定反應溫度分別為 50、55、60、65、70 ℃條件下進行酶解。

1.2.1.4 木瓜蛋白酶水解條件的優(yōu)化試驗

在單因素試驗的基礎上，選取酶底物比、時間、pH值和酶解溫度為試驗因素，以多肽水解度為試驗指標，進行四因素三水平的正交試驗。

1.2.1.5 野山杏仁粕水解度（DH）的測定

利用甲醛滴定法測定酶解液中的氨基氮[17]。原理：甲醛與氨基酸中的氨基作用，可消除其堿性，使羥基顯示出酸性，用氫氧化鈉標準溶液滴定，以酸度計指示終點，即可對氨基酸進行定量[18]。

吸取5 mL上清液，置于200 mL燒杯中，加入45 mL蒸餾水，用0.05 mol/L NaOH標準溶液滴定至pH為8.2，記錄使用NaOH標準溶液的體積；再加入10 mL甲醛溶液并混勻，繼續(xù)用NaOH標準溶液滴定至pH為9.2，記錄使用體積，同時做空白試驗。

（1）氨基酸態(tài)氮計算公式[19]

（2）總氮量測定計算公式

采用凱氏定氮法[20]測定：

（3）水解度公式[21]

1.2.1.6 野山杏多肽得率計算

1.2.2 野山杏多肽對衰老模型小鼠的抗氧化作用

1.2.2.1 試驗原料的制備

野山杏多肽為1.2.1.3中優(yōu)化試驗后木瓜蛋白酶磁力加熱攪拌所得野山杏仁酶解液，經(jīng)過冷凍干燥得野山杏多肽粉，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2.2 試驗動物及飼料

健康昆明種S級小鼠，雄性，體重18±4 g，由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供（動物生產(chǎn)許可證號：SCXK[新]2017-0004）。滅菌全價顆粒飼料，由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供。

1.2.2.3 分組與造模

選取健康的雄性小鼠72只，適應性喂養(yǎng)7 d，隨機分為六組，每組12只。選取五組小鼠以D-半乳糖100 mg/kg·bw·d頸后皮下注射，每天一次，連續(xù)30 d，制備衰老模型。五組分別為：野山杏多肽低劑量組（后文簡稱低劑量組）、野山杏多肽中劑量組（后文簡稱中劑量組）、野山杏多肽高劑量組（后文簡稱高劑量組）、衰老模型組（后文簡稱模型組）、Vc陽性對照組（后文簡稱陽性對照組），另取一組為空白對照組。同時進行野山杏多肽按低、中、高劑量每天一次灌胃給藥，陽性對照組灌胃給予Vc，空白對照組和模型組用等劑量生理鹽水代替。持續(xù)喂養(yǎng)30 d，試驗過程中小鼠每周稱取體重1次調整給予劑量，自由進食，進水。末次給藥后禁食24 h，不禁水，處死前稱量體重。

1.2.2.4 劑量設計

在體外抗氧化的基礎上，以體外抗氧化清除自由基能力最佳劑量結合文獻資料，設置高、中、低劑量進行體內抗氧化預實驗，根據(jù)預實驗結果確定的實驗劑量分別為50、75、100 mg/kg，詳見表1所示。

表1 各組給藥劑量Table 1 Dosage of each group

1.2.2.5 樣品制備

各組小鼠眼眶取血，4 ℃條件下3000 r/min離心15 min，取上清（即血清）備用。小鼠取血后脫臼處死，快速取出肝組織及腦組織，0 ℃～2 ℃生理鹽水洗去淤血。精密稱取肝組織0.5 g，加入0 ℃生理鹽水4.5 mL，迅速研磨制成組織勻漿，4 ℃條件下4000 r/min離心10 min，取上清，備用。

1.2.3 MDA、T-SOD及GSH-Px含量測定

1.2.3.1 腦組織、肝組織蛋白測定[22]

取腦組織、肝組織勻漿上清用生理鹽水稀釋，取樣50 μL測定?；靹?，將配置好的溶液靜置10 min，于595 nm波長，1 cm光徑，蒸餾水調零，測定各管吸光度值。計算方法見公式（5）。

1.2.3.2 MDA含量測定[23]

（1）小鼠血清MDA測定：直接取血清0.05 mL進行測定。將配置好的混勻，塑料薄膜封口，剌一小孔，95 ℃水浴40 min，取出后流水冷卻，3500 r/min，離心10 min，取上清，于532 nm處，1 cm光徑4 mm內徑，蒸餾水調零，測各管吸光度值。計算方法見公式（6）。

（2）小鼠肝組織、腦組織MDA測定：取上清組織勻漿待測，將配置好的試劑旋渦混勻器混勻，用保鮮薄膜封口，刺一小孔，沸水浴40 min，取出后流水冷卻，然后3500 r/min，離心10 min，取上清，于532 nm處，1 cm光徑4 mm內徑，蒸餾水調零，測各管吸光度值。計算方法為見公式（7）。

1.2.3.3 T-SOD含量測定[24]

（1）小鼠血清T-SOD測定：將小鼠血清稀釋2倍，取50 μL測定。將溶液混勻，室溫靜置10 min，550 nm，1 cm光徑，蒸餾水調零，測各管吸光度值。計算方法見公式（8）。

（2）小鼠肝組織、腦組織T-SOD測定：取腦組織、肝組織勻漿上清用生理鹽水稀釋，取樣50 μL測定。將試劑混勻，室溫放置10 min，于波長550 nm處，1 cm光徑比色杯，蒸餾水調零，比色。計算方法見公式（9）。

1.2.3.4 GSH-Px含量測定[25]

（1）小鼠血清GSH-Px測定：將小鼠血清2倍稀釋，取100 μL測定。將各試劑與待測樣品混勻，4000 r/min，離心10 min，取酶促反應上清液1 mL，將試劑與待測樣品溶混勻，15 min后，412 nm處，1 cm光徑比色杯，蒸餾水調零，測各管吸光度值。計算方法見公式（10）。

（2）小鼠肝組織、腦組織GSH-Px測定：取腦組織、肝組織勻漿上清取樣200μL測定。操作同小鼠血清GSH-Px測定。計算方法見公式（11）。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

采用Origin Pro 2018軟件進行圖形繪制，SPSS 24.0版統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。

2 結果與討論

2.1 酶解法提取野山杏多肽的單因素試驗

2.1.1 酶底物比對野山杏多肽水解度的影響

當酶底物比分別為1%、2%、3%、4%、5%，料液比1:20，pH為7.0，60 ℃酶解120 min時，水解度見圖2。

由圖2可知，水解度隨酶底物比的增加而上升，酶底物比為3%時野山杏仁水解度為29.23%；當酶底物比大于 3%時，水解度趨于平穩(wěn)，根據(jù)酶動力學原理，酶的用量過少不利于水解，過多不僅水解效果差，還會造成一定程度上的資源浪費[26]。因此，綜合考慮選擇酶底物比 3%作為野山杏多肽水解度最適酶底物比。

2.1.2 料液比對野山杏多肽水解度的影響

當酶底物比為3%，料液比分別為1:10、1:15、1:20、1:25、1:30，pH為7.0，60 ℃酶解120 min時，水解度見圖3。

由圖3可知，料液比對于水解度影響不大，野山杏多肽水解度在料液比為1:10時最低為21.66%，料液比1:25時水解度最大為27.07%，因此料液比為1:25時為最適料液比。

2.1.3 酶解時間對野山杏多肽水解度的影響

當酶底物比為3%，料液比為1:25，pH為7.0，60 ℃酶解30、60、120、180、240 min時，水解度見圖4。

由圖4可知，酶解時間對野山杏多肽水解度影響較大。酶解120 min時水解度最大為27.07%。水解時間180 min和240 min時，水解度降低。因此，水解時間不宜過長，以120 min為中點，取60、120、180 min做正交試驗條件。

2.1.4 pH對野山杏多肽水解度的影響

當酶底物比為3%，料液比為1:25，60 ℃酶解120 min時，設定pH為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0酶解，水解度見圖5。

由圖5可以看出，當pH值為4.0時，溶液呈酸性，野山杏多肽水解度為10.83%，為最低，可以看出酶解溶液呈酸性可抑制酶解，木瓜蛋白酶在酸性條件下可部分失活，酶解能力下降。當pH值為7.0時，為木瓜蛋白酶的酶解最適pH，水解度為25.99%。因此，正交試驗選取pH為6.0、7.0、8.0三個梯度。

2.1.5 酶解溫度對野山杏多肽水解度的影響

當酶底物比為3%，料液比為1:25，pH為7.0，酶解120 min時，不同溫度50、55、60、65、70 ℃條件下，水解度見圖6。

由圖6可以看出，55 ℃時野山杏多肽水解度亦最大，為24.90%。隨著溫度的升高，水解度下降，說明溫度越高，酶解能力越弱。由于溫度過高會使木瓜蛋白酶失活，酶解能力下降。由于木瓜蛋白酶在水解過程中，最適pH值溫度在55 ℃～65 ℃之間[27]，因此選用55、60、65 ℃為正交試驗條件。

2.2 正交試驗結果與分析

在單因素試驗結果與分析的基礎上，對影響野山杏多肽水解度的四個因素進行L9（34）正交試驗設計，試驗因素水平表見表2，正交試驗結果見表3，方差分析見表4。

表2 正交試驗因素和水平設計表Table 2 Factors and levels of orthogonal experiment

表3 正交試驗結果Table 3 The result and analysis of orthogonal experiment

從表2～表4正交試驗結果可以看出，以野山杏多肽水解度為評價指標，各個因素影響極差R大小的主次順序依次為：C＞D＞B＞A，即溫度＞pH值＞酶解時間＞酶底物比。因此，野山杏多肽提取最佳工藝組合為A2B2C3D3，即酶底物比為4%，酶解時間120 min，pH值為8.0，酶解溫度為65 ℃。

從方差分析表4可以看出，pH值、酶解時間、酶解溫度對野山杏多肽水解度影響差異極其顯著（p＜0.001），酶底物比對野山杏多肽水解度影響差異不顯著（p＞0.05）。

表4 方差分析結果Table 4 Results of analysis of variance

綜上所述，酶解法提取野山杏多肽的最佳工藝為酶底物比為4%，酶解時間120 min，pH值為8，酶解溫度為65 ℃。

2.3 驗證試驗

稱取10 g野山杏仁粕放置于500 mL燒杯中，按1:25料液比加入250 mL去離子水，以酶底物比為4%加入木瓜蛋白酶，pH值為8，65 ℃水浴酶解120 min后，離心，分離上清液，測定多肽水解度。該試驗過程平行進行三組。

通過驗證試驗可以得知：在此工藝條件下野山杏多肽水解度為35.73%，多肽液經(jīng)過酸沉、洗脫、冷凍干燥，得白色粉末，得率為7.22%。

酶解法通常采用一種或多種蛋白酶，王琳等人[28]以杏仁粕為原料，通過脫脂和提取蛋白處理后，以木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶作為復合酶解制備杏仁肽，以水解度為指標，最終杏仁蛋白水解度為23.60%；趙換霞等[29]通過響應面分析法研究并優(yōu)化了扁杏仁抗氧化肽的酶解制備工藝，同時研究其體外抗氧化活性，以堿性蛋白酶-風味蛋白酶的復合酶制備的扁杏仁抗氧化活性肽水解度為 20.87%，本試驗多肽水解度為35.73%，與上述文獻進行比較，分別高出 12.13%和14.86%，由此可見本試驗優(yōu)化后的多肽提取工藝較優(yōu)于對方。

2.4 野山杏多肽對衰老模型小鼠的抗氧化作用

2.4.1 試驗前后小鼠的體重變化

試驗數(shù)據(jù)以（ˉX±SD）表示，采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件分析試驗數(shù)據(jù)。

通過表5可以看出，各組小鼠試驗前后體重差別不明顯（p＞0.05），各組間試驗小鼠體重無顯著差異（p＞0.05）。模型組小鼠注射D-半乳糖，30 d后體重略有下降，其余各組小鼠體重稍微增加。

表5 試驗中總體動物體重變化Table 5 The overall animal body weight change in the experiment (ˉX±SD， n=12)

2.4.2 野山杏多肽對小鼠血清T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的影響

試驗數(shù)據(jù)以（ˉX±SD）表示，采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件分析，組間比較方差分析和t檢驗。試驗結果見表6。

表6 野山杏多肽對小鼠血清T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的影響Table 6 Effects of Noama Kyoto polypeptide on T-SOD， GSH-Px activity and MDA content in serum of mice (ˉX±SD， n=10)

由表6可知，與空白對照組比，模型組小鼠血清T-SOD、GSH-Px活性極顯著下降（p＜0.001、p＜0.01），MDA含量極顯著升高（p＜0.001），表明衰老模型小鼠造模成功。

MDA是體內含氧自由基與細胞膜表面脂質過氧化反應的產(chǎn)物，其含量反映體內脂質氧化損傷程度[30]。GSH-Px可以催化還原型谷胱甘肽（GSH）過氧化氫反應生成對機體無害的水和氧化型谷胱甘肽，從而保護細胞免受氧化脅迫和細胞損傷[31]。SOD幾乎存在于所有生物細胞中，能夠催化超氧化物轉化，T-SOD活力的高低代表著機體清除氧自由基的能力大小[32]。

與模型組比，陽性對照組及低、中、高劑量組小鼠血清中T-SOD、GSH-Px活性顯著升高（p＜0.01或p＜0.05 或p＜0.001），MDA活性均極顯著降低（p＜0.001或p＜0.01）。其中低劑量組GSH-Px活性達到271.99 U/mL，高劑量組T-SOD活力達到177.24 U/mL，與空白對照組結果相近；低、中、高劑量組小鼠T-SOD活性隨著野山杏多肽給藥量的增加而增加，具有劑量依賴性。說明不同劑量的野山杏多肽均能對小鼠血清中的MDA含量值以及T-SOD、GSH-Px活力產(chǎn)生顯著影響。

2.4.3 野山杏多肽對小鼠肝組織 T-SOD、GSH-Px活性、以及MDA含量的影響

試驗數(shù)據(jù)以（ˉX±SD）表示，采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件分析，組間比較才有方差分析和t檢驗。試驗結果見表7。

表7 野山杏多肽對小鼠肝組織T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的影響Table 7 Effects of apricot kernel polypeptide on T-SOD， GSH-Pxactivity and MDA content in liver tissues of mice (ˉX±SD， n=10)

由表7可知，與空白對照組比，模型組小鼠肝組織 T-SOD、GSH-Px活力極顯著下降（p＜0.001或p＜0.01），MDA 含量極顯著升高（p＜0.001）；與模型組相比，陽性對照組及各劑量組MDA含量不同程度的降低（p＜0.05或p＜0.001），T-SOD、GSH-Px活性均有不同程度的增加（p＜0.01或p＜0.05或p＜0.001），其中T-SOD活性隨著野山杏多肽劑量的增加而增加，具有劑量依賴性。說明不同劑量的野山杏多肽均能對小鼠肝組織中的 T-SOD、GSH-Px活性、以及MDA含量值產(chǎn)生影響。

2.4.4 野山杏多肽對小鼠腦組織 T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的影響

試驗結果以（ˉX±SD）表示，采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件分析試驗數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)如表8所示。

表8 野山杏多肽對小鼠腦組織T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的影響Table 8 Effect of Noama Kyoto polypeptide on T-SOD， GSH-Px activity and MDA content in the brain of mice (ˉX±SD， n=10)

由表8可知，與模型組相比，中、高劑量組均可顯著提高衰老小鼠腦組織中 T-SOD、GSH-Px活性（p＜0.01），降低MDA含量（p＜0.05或p＜0.01），其中高劑量組MDA含量為1.84 nmol/mL，與空白對照組腦組織中MDA含量接近，表明當野山杏多肽給藥劑量為100 mg/kg，給藥周期30 d后，可使衰老模型小鼠腦組織中MDA含量顯著降低并基本恢復至造模前水平。與低劑量組相比，中、高劑量組T-SOD及MDA數(shù)據(jù)差異較大，中高劑量組明顯好于小劑量組，且數(shù)據(jù)更接近于陽性對照組。綜上，中、高劑量組野山杏多肽均能對小鼠肝組織中的T-SOD、GSH-Px活性以及MDA含量值產(chǎn)生顯著影響。

綜上所述，本試驗通過野山杏多肽各劑量組研究其對衰老模型小鼠的體內抗氧化作用，與模型組相比，各劑量組可以不同程度地增加小鼠體內 GSH-PX及T-SOD活力，降低MDA含量，其中以中、高劑量組效果較為明顯，具有統(tǒng)計學意義。但野山杏多肽的不同劑量組的各項數(shù)據(jù)并未呈現(xiàn)出完全一致的變化趨勢，可能是由于機體存在不同的抗氧化調節(jié)機制而導致的，其他研究也表明SOD和GSH-Px在某些狀態(tài)下呈現(xiàn)出一定范圍內的動態(tài)變化，而非絕對的同時增加，即當其中一種機制被激活時，另一種會呈現(xiàn)出有所抑制的狀態(tài)[33]。

3 結論

本試驗通過研究得到酶解法提取野山杏多肽的最佳工藝：酶底物比為4%，酶解時間120 min，pH值為8，酶解溫度為65 ℃。并進行驗證試驗，得知：在此工藝條件下野山杏多肽水解度為35.73%，多肽液經(jīng)過酸沉、洗脫、冷凍干燥，得白色粉末，得率為7.22%。通過上述工藝得到的野山杏多肽給予 D-半乳糖誘導的小鼠衰老模型，發(fā)現(xiàn)中、高劑量的野山杏多肽皆能提高衰老小鼠血清、肝組織以及腦組織勻漿中的T-SOD、GSH-Px活性，同時降低MDA含量，抑制血清及組織中的脂質過氧化。綜上所述，本試驗優(yōu)化后提取的野山杏多肽對衰老小鼠具有良好的體內抗氧化作用。