任彥紅 張凌云 趙少聰 張廣超 孫曉敏

哮喘是一種以中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥狀態(tài)，隨病程的延長(zhǎng)可產(chǎn)生氣道不可逆性縮窄和氣道重塑，嚴(yán)重影響患者的健康[1]，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA, lncRNA)在人類生理與病理中發(fā)揮重要作用，與多種疾病密切相關(guān)[2]。其中，調(diào)節(jié)lncRNA TUG1能緩解缺血-再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞炎癥和凋亡[3]，減輕子宮內(nèi)膜纖維化和炎癥[4]，抑制大鼠脊髓缺血再灌注后的炎癥損傷[5]。此外，基于前期lncRNA TUG1通過(guò)海綿miR-590-5p/FGF1促進(jìn)哮喘患者氣道平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移的研究[6]，提示干擾長(zhǎng)鏈非編碼RNA TUG1對(duì)治療哮喘有巨大的潛力及重要的意義。因此，本實(shí)驗(yàn)探討干擾長(zhǎng)鏈非編碼RNA TUG1對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)的哮喘小鼠肺功能損傷、纖維化以及免疫紊亂的影響，以期為哮喘的臨床治療提供數(shù)據(jù)參考。

資料與方法

一、材料與儀器

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)Wistar小鼠，四周齡，雄性，體質(zhì)量25～30 g,動(dòng)物購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0011。

2 藥物與試劑 卵清蛋白，美國(guó)Sigma-Aldrich公司；PCR試劑盒、SDS-PAGE蛋白凝膠、細(xì)胞裂解液、Trizol試劑，北京索萊寶科技有限公司；總蛋白提取試劑盒、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、羥脯氨酸(HYP)試劑盒、英國(guó)Abcam公司；PBS磷酸緩沖液、生理鹽水、多聚甲醛，北京萬(wàn)佳首化生物科技有限公司；Masson膠原染色試劑、蘇木精-伊紅染色試劑、瑞氏-吉姆薩染色，北京雷根生物技術(shù)有限公司；α-SMA、FN、TGF-β1相關(guān)抗體，賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司；IFN-γ、IL-4等引物，引物設(shè)計(jì)參考序列均來(lái)源于NCBI及Ensembl數(shù)據(jù)庫(kù)，合肥知恩生物技術(shù)有限公司；誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)試劑盒、γ干擾素(IFN-γ)試劑盒、白介素-4(IL-4)試劑盒、白介素-10(IL-10)試劑盒，武漢默沙克生物科技有限公司；AKT等相關(guān)抗體，上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

3 主要儀器 Rt2100c酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTeK公司；430c霧化吸入器，上海魚(yú)躍醫(yī)療設(shè)備有限公司；C100自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，深圳市瑞沃德生命科技有限公司；KL-B2型石蠟包埋機(jī)、S700A石蠟切片機(jī)，湖北康龍電子科技有限責(zé)任公司；ICX41倒置顯微鏡，舜宇光學(xué)科技有限公司；Microfuge 20低溫高速離心機(jī)，美國(guó)BECKMAN公司；HS1800H-U/W超凈工作臺(tái)，成都市蘇凈科學(xué)器材有限公司；AniRes2005動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)，北京貝蘭博科技公司；SY00992大小鼠體描箱，雙玉儀器設(shè)備有限公司。

二、方法

1 動(dòng)物與處理 將小鼠隨機(jī)分為四組，正常對(duì)照組(Control)、模型組(OVA)、陰性對(duì)照組(OVA+shRNA-NC)、干擾組(OVA+sh-TUG1)。參考文獻(xiàn)建模[7]，除正常組注射及霧化吸入相同體積生理鹽水外，各組小鼠分腹腔注射0.2mL 1% OVA致敏液, 1周/次，共3次；致敏完成后進(jìn)行激發(fā)，將小鼠置于密閉容器中，5 mL 5% OVA溶液霧化吸入30 min/d，共7 d，建立哮喘動(dòng)物模型，其中陰性對(duì)照組及干擾組小鼠每次在激發(fā)前分別腹腔給予2.5 mg/kg shRNA-NC及sh-TUG1，正常對(duì)照組及模型組給予相應(yīng)體積生理鹽水。

2 肺功能指標(biāo)檢測(cè) 各組小鼠在麻醉狀態(tài)下進(jìn)行氣管插管，在體描箱內(nèi)記錄靜息狀態(tài)下呼吸通氣量，并檢測(cè)氣道阻力改變、肺容積變換指標(biāo)。

3 支氣管肺泡灌洗液、血清、肺組織的收集 各組小鼠在麻醉狀態(tài)下，用1 mL注射器將預(yù)冷的PBS緩沖液通過(guò)氣管插管緩慢的灌注至雙肺，反復(fù)沖洗3次，保證灌洗液回吸收率在90%以上。將收集的支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar fluid，BALF)進(jìn)行離心(4 ℃、1200 r/mim、10 min)并凍存；眼球取血，離心收集上清液；及時(shí)解剖，取肺組織，一部分進(jìn)行蠟塊包埋，用于病理形態(tài)學(xué)觀察，剩余部分凍存，用于后續(xù)組織蛋白的提取。

4 HE染色觀察肺組織 取出包埋處理的組織，用刀片修蠟，組織切片機(jī)切片。經(jīng)水浴展平、將蠟帶貼在載玻片上進(jìn)行烘干。二甲苯脫蠟后，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，封片后在顯微鏡下觀察結(jié)果。

5 Masson染色觀察肺纖維化 取出包埋處理的組織，進(jìn)行組織切片，二甲苯脫蠟，高濃度到低濃度酒精脫水，Masson膠原染色試劑染色，二甲苯浸泡5 min，封片后在顯微鏡下觀察結(jié)果。

6 WB檢測(cè)肺纖維化指標(biāo)水平 剩余肝組織制備成勻漿，提取總蛋白。BCA試劑盒進(jìn)行總蛋白定量，電泳、轉(zhuǎn)膜、脫脂奶粉封閉，加入一抗，4℃孵育過(guò)夜，TBST沖洗，加入二抗，TBST沖洗3次，ECL顯影后分析灰度值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

7 試劑盒檢測(cè)肺組織中HYP含量 取小鼠肝組織剪碎，加入提取液在110℃烘箱內(nèi)消化6 h ,離心過(guò)濾后調(diào)節(jié)PH為7左右，將標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，按照HYP含量檢測(cè)試劑盒進(jìn)行操作，混勻后水浴20 min，再靜置至室溫，取溶液在96孔板中，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)560nm，酶標(biāo)儀檢測(cè)。

8 哮喘小鼠肺組織炎癥評(píng)分 炎癥評(píng)分表評(píng)估肺組織的炎癥程度，參考Underwood標(biāo)準(zhǔn)[8]。

9 檢測(cè)BALF液中炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)情況 BALF液離心后，用PBS重懸。采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板檢測(cè)總的炎癥細(xì)胞，取重懸液滴于防脫載玻片上根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)采用瑞氏-吉姆薩染色來(lái)分類，計(jì)算各細(xì)胞數(shù)量。

10 ELISA檢測(cè)BALF液中炎癥因子含量 分別按照iNOS 、IFN-γ 、IL-4 、IL-10試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。

11 RT-PCR檢測(cè)BALF液中炎癥因子水平 BALF液離心后，用PBS重懸后，用Trizol法提取總的RNA，并測(cè)定濃度，按照PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis kit 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行操作，加入相應(yīng)引物及樣品，每組設(shè)置三個(gè)復(fù)孔。用2-△△Ct法計(jì)算iNOS mRNA、IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA、IL-10 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

12 WB檢測(cè)肺組織中AKT/NF-κB通路的相關(guān)蛋白表達(dá) 采用AKT、p65等相關(guān)一抗，根據(jù)2.6的操作進(jìn)行。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠肺功能損傷的影響

與Control組相比，OVA模型組小鼠的肺容積、靜息通氣量、氣道阻力均顯著降低(P<0.05，見(jiàn)圖1)；與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠的肺容積、靜息通氣量、氣道阻力均顯著升高(P<0.05，見(jiàn)圖1)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能緩解OVA小鼠肺功能損傷。

圖1 各組對(duì)OVA小鼠肺功能損傷的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

二、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠肺組織HE染色的影響

Control組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)病理形態(tài)變化，支氣管壁膠原層較?。籓VA模型組肺組織結(jié)構(gòu)明顯破壞，肺泡壁結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡間隔增厚，肺泡腔縮小，炎性浸潤(rùn)明顯；OVA+shRNA-NC組的病理程度與OVA模型組接近；OVA+sh-TUG1組對(duì)上述病理狀態(tài)有一定的緩解，小鼠的肺組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域較少，肺組織結(jié)構(gòu)完整(見(jiàn)圖2)。結(jié)果提示：干擾lncRNA TUG1能改善OVA小鼠肺組織的病變程度，緩解OVA小鼠肺部損傷，與3.1結(jié)果吻合。

圖2 各組對(duì)OVA小鼠肺組織HE染色的影響(×100)

三、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠肺纖維化的影響

Control組小鼠肺組織僅有少量膠原，肺泡結(jié)構(gòu)完整，無(wú)肺泡內(nèi)出血；OVA模型組小鼠肺泡內(nèi)肺泡結(jié)構(gòu)消失，膠原蛋白圍繞氣管和肺泡大量增殖，導(dǎo)致正常肺泡結(jié)構(gòu)消失或黏連；OVA+shRNA-NC組的纖維化程度與OVA模型組接近；OVA+sh-TUG1組對(duì)上述膠原蛋白異常增殖狀態(tài)有一定的緩解(見(jiàn)圖3A)。

與Control組相比，OVA模型組小鼠的α-SMA、FN、TGF-β1蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05，見(jiàn)圖3B-C)；與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠的α-SMA、FN、TGF-β1蛋白表達(dá)均顯著降低，P<0.05。(見(jiàn)圖3B-C)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能降低OVA小鼠肺纖維化程度。

圖3 各組對(duì)OVA小鼠肺纖維化的影響(×100)與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

四、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠肺組織羥脯氨酸(HYP)含量的影響

HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，其含量反映膠原組織代謝及纖維化程度。與Control組相比，OVA模型組小鼠的HYP含量顯著升高，P<0.05(見(jiàn)圖4)；與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠的HYP含量均顯著降低(P<0.05)(見(jiàn)圖4)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能減少HYP代謝，降低OVA小鼠肺纖維化程度，與3.3結(jié)果吻合。

圖4 各組對(duì)OVA小鼠肺組織HYP含量的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

五、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠肺組織炎癥評(píng)分的影響

與Control組相比，OVA模型組小鼠的肺組織炎癥評(píng)分顯著升高(P<0.05)(見(jiàn)圖5)。與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠肺組織炎癥評(píng)分顯著降低(P<0.05，見(jiàn)圖5)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能明顯緩解OVA小鼠的炎癥損傷。

圖5 各組對(duì)OVA小鼠肺組織炎癥評(píng)分的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

六、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠BALF液中各項(xiàng)細(xì)胞指標(biāo)計(jì)數(shù)情況

與Control組相比，OVA模型組小鼠的炎癥細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目顯著增加(P<0.05)(見(jiàn)圖6)。與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠以上各項(xiàng)炎癥細(xì)胞數(shù)目均顯著減少(P<0.05)(見(jiàn)圖6)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能明顯緩解OVA小鼠的炎癥損傷，與3.5結(jié)果吻合。

圖6 各組對(duì)OVA小鼠BALF液中各項(xiàng)細(xì)胞指標(biāo)計(jì)數(shù)的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

七、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠BALF液中炎癥指標(biāo)含量的影響

與Control組相比，OVA模型組小鼠的iNOS、IFN-γ、IL-4、IL-10含量均顯著升高(P<0.05)(見(jiàn)圖7)。與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠的促炎因子iNOS 、IFN-γ含量均顯著降低(P<0.05)(見(jiàn)圖7A)。抗炎因子IL-4、IL-10含量均顯著升高(P<0.05)(見(jiàn)圖7B)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能明顯改善OVA小鼠的炎癥程度，與3.5、3.6結(jié)果吻合。

圖7 各組對(duì)OVA小鼠BALF液中炎癥指標(biāo)含量的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

八、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠BALF液中炎癥指標(biāo)mRNA表達(dá)的影響

與Control組相比，OVA模型組小鼠的iNOS mRNA、IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA、IL-10 mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.05)(見(jiàn)圖8)。與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠的促炎因子iNOS mRNA、IFN-γ mRNA表達(dá)均顯著降低(P<0.05)(見(jiàn)圖8A)?？寡滓蜃覫L-4 mRNA、IL-10 mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.05)(見(jiàn)圖8B)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能明顯改善OVA小鼠的炎癥程度，與3.5、3.6、3.7結(jié)果吻合。

圖8 各組對(duì)OVA小鼠BALF液中炎癥指標(biāo)mRNA表達(dá)的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

九、干擾lncRNA TUG1對(duì)OVA小鼠肝臟中AKT/NF-κB通路相關(guān)蛋白的影響

與Control組相比，OVA模型組小鼠的p-AKT/AKT、p-P65/P65相對(duì)蛋白的表達(dá)顯著升高；與OVA模型組相比，OVA+shRNA-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OVA+sh-TUG1組小鼠p-AKT/AKT、p-P65/P65相對(duì)蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.05)(見(jiàn)圖9)。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能降低OVA小鼠肺纖維化程度，其機(jī)制可能與調(diào)控AKT/NF-κB通路的相關(guān)蛋白有關(guān)。

圖9 各組對(duì)OVA小鼠肝臟中AKT/NF-κB通路相關(guān)蛋白的影響與Control組比較，*P<0.05；與OVA組比較，#P<0.05

討 論

近年來(lái)研究顯示，lncRNA是研究呼吸系統(tǒng)疾病中的熱門方向，具有參與基因調(diào)控，阻斷或促進(jìn)疾病發(fā)展的潛力，其中l(wèi)ncRNA與哮喘的研究密切相關(guān)[9]，可作為臨床判斷、評(píng)估預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)以及后期治療的靶點(diǎn)[10]。Fan等[11]發(fā)現(xiàn)lncRNA TCF7通過(guò)靶向TIMMDC1/Akt參與哮喘氣道平滑肌細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移；Zhang等[12]的研究表明干擾lncRNA-AK149641的會(huì)緩解OVA誘發(fā)的哮喘小鼠模型中的氣道炎癥反應(yīng)，這可能與NF-κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)有關(guān)。此外，基于前期lncRNA TUG1對(duì)哮喘患者氣道平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移的研究。本實(shí)驗(yàn)探討干擾長(zhǎng)鏈非編碼RNA TUG1對(duì)卵清蛋白誘導(dǎo)的哮喘小鼠肺功能損傷、纖維化以及免疫紊亂的影響。

肺功能檢查是呼吸系統(tǒng)疾病的不可或缺的檢查，廣泛用于疾病診斷、病情分級(jí)、疾病發(fā)展、預(yù)后評(píng)估、治療方案選擇、療效評(píng)估等，具有重要的臨床意義[13]。HE染色是觀察肺組織細(xì)胞成分與病變形態(tài)結(jié)構(gòu)的常用方法。Zhang等[14]指出干擾lncRNA BCYRN1增加了OVA大鼠的肺容積、靜息通氣量，緩解肺組織的病變程度，減輕了哮喘對(duì)肺的損害。Hu等[15]發(fā)現(xiàn)LncRNA TUG1逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)肺損傷，HE檢測(cè)顯示肺組織的病理程度減輕。本實(shí)驗(yàn)顯示，OVA+sh-TUG1組小鼠的肺容積、靜息通氣量、氣道阻力均顯著升高，小鼠炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域較少，肺組織的病變程度減輕，提示干擾lncRNA TUG1能緩解OVA小鼠肺功能損傷，與上述研究一致。

哮喘常見(jiàn)的肺部免疫介導(dǎo)性疾病。具有氣道高反應(yīng)性、嗜酸性粒細(xì)胞增多、炎性因子增強(qiáng)、細(xì)胞浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞及黏液增加等特征。長(zhǎng)期反復(fù)慢性哮喘會(huì)導(dǎo)致皮下肺纖維化[16]。大量研究已證明，香草素受體4型瞬時(shí)感受器電位通道(transient receptor potential vanilloid 4 channel, TRPV4)的相關(guān)蛋白會(huì)誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞生成，即α-平滑肌動(dòng)蛋白(Smooth muscle actin,α-SMA)、纖維粘連蛋白(fibronectin, FN)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)等促進(jìn)肺纖維化的發(fā)生發(fā)展[17]。Huang等[18]指出lncRNA FENDRR主要通過(guò)下調(diào)TGF-β1表達(dá)，抑制肺成纖維細(xì)胞活化，從而減少肺纖維化，改善肺功能。Zhang等[19]的報(bào)道，顯示干擾lncRNA NEAT1可增強(qiáng)E-鈣粘蛋白的表達(dá)，并降低TGF-β1、p-Smad2、α-SMA的表達(dá)，通過(guò)調(diào)節(jié)miR-9-5p和TGF-β信號(hào)來(lái)抑制上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而緩解肺纖維化。HYP是機(jī)體膠原蛋白主要成分之一，目前測(cè)定肺臟羥脯氨酸的含量是評(píng)價(jià)肺纖維化程度的常用方法，是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)[20]。Qu等[21]研究表明肺纖維化程度與HYP含量呈負(fù)相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)顯示，OVA+sh-TUG1組小鼠的α-SMA、FN、TGF-β1蛋白表達(dá)均顯著降低、HYP含量顯著減少，提示，干擾lncRNA TUG1能降低OVA小鼠肺纖維化程度，與上述研究一致。

統(tǒng)計(jì)肺泡灌洗液(BALF)中淋巴細(xì)胞(lymphocyte,LYM)、中性粒細(xì)胞 (Neutrophils, NEU) 、 嗜酸性粒細(xì)胞(Eosinophils, EOS)等免疫細(xì)胞數(shù)目是檢查呼吸系統(tǒng)疾病的常用方法。其中，Wang等[22]指出肺組織中的免疫細(xì)胞(NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等)可以反映疾病的嚴(yán)重程度并參與肺纖維化的發(fā)展。Zhang等[12]的研究表明OVA小鼠的總細(xì)胞數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)顯著增加，而lncRNA AK149641的下調(diào)顯著降低了炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。Nakagome等[23]研究顯示體內(nèi)IL-10基因傳遞通過(guò)抑制肺中TGF-β的生成和激活，減弱博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化。Liu等[24]指出LncRNA-CASC7通過(guò)靶向miR-21抑制PI3K/AKT信號(hào)通路，抑制相關(guān)炎性因子表達(dá)，緩解哮喘的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)顯示，OVA+sh-TUG1組小鼠肺組織炎癥評(píng)分降低、各項(xiàng)炎癥細(xì)胞數(shù)目減少、促炎因子表達(dá)降低、抗炎因子表達(dá)升高。結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能明顯緩解OVA小鼠的免疫紊亂，與上述研究一致。

哮喘的特征在于氣道的炎癥反應(yīng)。山奈酚通過(guò)抑制p65、IκB、AKT的磷酸化以及HO-1的表達(dá)，調(diào)節(jié) AKT/NF-κB信號(hào)通路，在哮喘中發(fā)揮抗炎作用的分子機(jī)制[25]。本實(shí)驗(yàn)顯示OVA+sh-TUG1組小鼠p-AKT/AKT、p-P65/P65相對(duì)蛋白表達(dá)均顯著降低。與上述研究一致，結(jié)果提示，干擾lncRNA TUG1能降低OVA小鼠肺纖維化程度，其機(jī)制可能與調(diào)控AKT/NF-κB通路有關(guān)。

綜上，干擾lncRNA TUG1能緩解OVA小鼠肺功能損傷、肺纖維化程度及免疫紊亂，具有靶向治療哮喘的潛力，其機(jī)制可能與調(diào)控AKT/NF-κB通路的相關(guān)蛋白有關(guān)。