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        m6A甲基化酶METTL3和WTAP在牦牛組織及脂肪細(xì)胞中的表達(dá)

        2022-03-05 06:47:04張永峰顧亞榮馬蘭花
        草業(yè)科學(xué) 2022年1期

        張永峰 ,顧亞榮,馬蘭花,閻 萍

        (1.蘭州大學(xué)草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院,甘肅 蘭州 730020;2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,甘肅 蘭州 730000)

        作為青藏高原的主體畜種,牦牛(Bos grunniens)對生活在高海拔地區(qū)的藏民族具有重要意義,不僅提供了肉、奶、燃料等基本生活資料,而且是藏傳佛教和藏文化傳承的重要載體[1]。在傳統(tǒng)放牧條件下,青藏高原漫長、寒冷的冷季(10月 -次年5月)牧草短缺,牦牛飼草不足,導(dǎo)致季節(jié)性體重變化較大,形成了“夏肥、秋壯、冬瘦、春乏”的惡性循環(huán)[2,3]。青藏高原暖季(6月 -9月)飼草相對充沛,牦牛機(jī)體儲(chǔ)存了大量的脂肪。作為潛在的能量供應(yīng)器官,脂肪組織在冷季里維持了牦牛機(jī)體的基本能量需求和抵抗外界的嚴(yán)寒[4]。牦牛為適應(yīng)青藏高原獨(dú)特的生活環(huán)境,其脂肪的合成、代謝和調(diào)節(jié)具有明顯的物種和組織特異性[5]。在高寒環(huán)境下,脂肪對調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體的能量平衡起著至關(guān)重要的作用。由于青藏高原環(huán)境和生物要素的異質(zhì)性,牦牛在長期草場營養(yǎng)匱乏等生態(tài)逆境的選擇壓力下,可能形成了一種有效的脂肪發(fā)育和調(diào)節(jié)適應(yīng)機(jī)制[6]。

        N6-甲基腺苷(m6A)作為RNA 上可逆的化學(xué)修飾是一種新興的轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控方式,是真核生物mRNA 上最豐富的內(nèi)部修飾,參與脂質(zhì)積累、能量代謝等多種生物學(xué)過程[7]。研究者利用MeRIP-Seq(一種基于m6A 抗體免疫沉淀并結(jié)合新一代高通量測序技術(shù)的方法)在豬脂肪組織中鑒定到2 826 個(gè)甲基化修飾位點(diǎn),主要分布于基因CDs 區(qū)、終止密碼子和3’UTR 區(qū)域[8]。對高脂和低脂肉雞的脂肪組織MeRIP-Seq 測序發(fā)現(xiàn)高甲基化基因主要與脂肪酸生物合成和脂肪酸代謝相關(guān),而低甲基化基因主要參與脂肪發(fā)育的相關(guān)過程[9]。這些研究表明m6A 修飾在家畜動(dòng)物脂肪發(fā)育過程中扮演著重要的角色。目前關(guān)于m6A 修飾對牦牛脂肪發(fā)育的研究尚未有報(bào)道。一些酶類可以動(dòng)態(tài)調(diào)控RNA m6A 甲基化修飾,包括甲基轉(zhuǎn)移酶(METTL3、METTL14 和WTAP[10]和去甲基化酶(ALKBH5 和FTO)[11],及甲基化閱讀蛋白(YTHDF1-3)[12]。

        METTL3 和METTL14 的異構(gòu)體聯(lián)合亞單位蛋白WTAP 催化哺乳動(dòng)物mRNA 上m6A 的形成。甲基轉(zhuǎn)移酶的核心亞單位METTL3 已被證實(shí)能夠調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育[13]、細(xì)胞重編程[14]和精子發(fā)生[15],而其在小鼠體內(nèi)的缺失會(huì)導(dǎo)致早期胚胎致死[16]。小鼠精原細(xì)胞分化過程中,METTL3 介導(dǎo)的m6A 修飾通過影響精子發(fā)生的功能基因調(diào)節(jié)精原細(xì)胞的分化[15]。CRISPR-Cas9 敲除METTL3 導(dǎo)致小鼠胚胎干細(xì)胞分化受損[17]。此外,METTL3 介導(dǎo)的m6A 修飾通過維持Myod mRNA 水平調(diào)節(jié)骨骼肌細(xì)胞的分化[18]。WTAP是一種廣泛表達(dá)的核蛋白,細(xì)胞中調(diào)控某些基因的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后事件[19]。WTAP與METTL3 和METTL14相互作用,調(diào)節(jié)RNA 轉(zhuǎn)錄本上的m6A 水平[20]。WTAP有助于將METTL3 和METTL14 招募到它們的靶mRNA 上,且對METTL3 的核斑點(diǎn)定位具有重要作用,敲除WTAP對胚胎有致死作用[21],這說明其在脊椎動(dòng)物發(fā)育中具有重要的生物學(xué)特性。此外,WTAP參與眾多細(xì)胞進(jìn)程事件,如可變剪接[22]、X-染色體失活[23]和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)[21]。敲除WTAP會(huì)導(dǎo)致HeLa和293FT 細(xì)胞中m6A 總體水平的下降[10]。另有研究發(fā)現(xiàn),METTL3 高表達(dá)于豬脂肪組織及與肥胖型的金華豬相比METTL3高表達(dá)于瘦肉型的長白豬[24]。敲除METTL3 和WTAP 可抑制小鼠3T3-L1 前脂肪細(xì)胞的分化[25]。以上研究表明,METTL3 和WTAP對機(jī)體發(fā)育及細(xì)胞分化具有重要的調(diào)控作用。因此,闡明METTL3 和WTAP 在家畜動(dòng)物重要組織及細(xì)胞中的表達(dá)規(guī)律顯得尤為重要。

        綜上,METTL3 和WTAP 與動(dòng)物機(jī)體發(fā)育相關(guān),可能調(diào)控動(dòng)物脂肪組織的發(fā)育,但其分子調(diào)控機(jī)制尚不明確。牦牛脂肪組織及前體脂肪細(xì)胞分化過程中二者的表達(dá)模式尚未見報(bào)道。因此,本試驗(yàn)以世界上人工培育的第一個(gè)牦牛品種大通牦牛為試驗(yàn)對象,通過qPCR 檢測了m6A 甲基化轉(zhuǎn)移酶METTL3和WTAP在各組織和前體細(xì)胞增殖分化階段的表達(dá)水平,檢測了牦牛前體脂肪細(xì)胞分化階段(0、4、8 和12 d)細(xì)胞m6A 甲基化水平,初步探究牦牛各組織及前體脂肪增殖細(xì)胞分化過程中METTL3和WTAP的表達(dá)變化規(guī)律,以期為闡釋METTL3和WTAP對動(dòng)物脂肪發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)制提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及組織

        本試驗(yàn)動(dòng)物由青海省大通種牛場提供。采集18 和30月齡3 頭大通母牦牛心、肝、脾、肺、腎、皮下脂肪和背最長肌樣品,快速置于液氮罐中備用。

        1.2 牦牛原代前體脂肪細(xì)胞的分離培養(yǎng)

        3日齡大通牦牛選取于青海省大通種牛場,頸動(dòng)脈放血處死后帶入細(xì)胞室采樣間采集用于細(xì)胞分離的腎周和皮下脂肪組織。在無菌環(huán)境下,盡可能的去除表皮、血管和結(jié)締組織。剩余的組織用含1%抗生素的PBS 洗滌數(shù)次,無菌環(huán)境下切成約1 mm3的小塊。用1%的I 型膠原蛋白酶(美國GIBCO 公司)在37 ℃下不斷攪拌消化60~90 min。將消化后的組織用40 μm 尼龍網(wǎng)篩過濾,濾液在1 400×g 離心5 min。隨后,在室溫下用紅細(xì)胞裂解緩沖液(0.154 mol·L-1NH4Cl,10 mmol·L-1KHCO3,0.1 mmol·L-1EDTA)孵育10 min,然后用200 μm 尼龍網(wǎng)篩過濾和無血清培養(yǎng)基洗滌兩次,1 400×g 離心5 min 吸去上清然后加含10%胎牛血清的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至25 cm2培養(yǎng)瓶中,至37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

        1.3 牦牛前體脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及油紅O 染色

        牦牛前體脂肪細(xì)胞以1×104個(gè)·皿-1的密度培養(yǎng)于35 mm 培養(yǎng)皿,細(xì)胞達(dá)到融合狀態(tài)后進(jìn)行誘導(dǎo)分化。完全培養(yǎng)基中添加3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(0.5 mmol·L-1)、地塞米松(1 μmol·L-1)、羅格列酮(0.5 mmol·L-1)和胰島素(10 μg·mL-1)誘導(dǎo)培養(yǎng)細(xì)胞2 d。間隔2~3 d 更換培養(yǎng)基一次,添加胰島素(10 μg·mL-1)的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞至12 d。

        室溫下將分化的脂肪細(xì)胞用4%的多聚甲醛固定30 min,之后用過濾的60% (W/V)的油紅O 溶液染色30 min。然后用蒸餾水洗滌細(xì)胞2~3 次,在光學(xué)顯微鏡(Leica,德國)下進(jìn)行觀察和拍照。

        1.4 細(xì)胞總RNA 的提取

        牦牛組織和脂肪細(xì)胞中總RNA 參照TRIZOL Reagent (Invitrogen,美國)試劑說明書提取。核酸蛋白檢測儀(Thermo,美國)檢測RNA 濃度和質(zhì)量,之后使用PrimeScripTMRT reagent Kit (TaKaRa,大 連)進(jìn)行總RNA 的反轉(zhuǎn)錄。

        1.5 牦牛前體脂肪細(xì)胞分化階段m6A 甲基化水平的測定

        將細(xì)胞總RNA 濃度稀釋到100~300 ng·μL-1,采用比色法m6A RNA 甲基化定量檢測試劑盒(Epigentek,美國)測定細(xì)胞中總RNA 的m6A 甲基化水平。

        1.6 PPARγ、C/EBPα、FABP4、WTAP 和METTL3實(shí)時(shí)熒光定量PCR 檢測

        依據(jù)NCBI 牦牛PPARγ、CEBP/α、FABP4、WTAP和METTL3的序列,利用Primer Premier 5.0 設(shè)計(jì)各基因?qū)崟r(shí)熒光定量引物(表1)。以β-actin為內(nèi)參基因來確定目標(biāo)基因的相對表達(dá)量。qRT-PCR 的總體積為10 μL,5 μL 2×SYBR Premix Ex Taq II (TaKaRa,大連);0.4 μL 上下游引物(10 μmol·L-1)和0.8 μL 稀釋的cDNA。qPCR 反應(yīng)程序如下:95 ℃下預(yù)變性30 s;95 ℃變性5 s;引物特異Tm 30 s;39 個(gè)循環(huán),以加熱速率為0.5 ℃·10 s-1從65 到95 ℃創(chuàng)建溶解曲線。Bio-Rad CFX96 熒光定量PCR 儀上進(jìn)行上述試驗(yàn)過程。

        表1 熒光定量PCR 引物Table 1 Sequence-specific primers used for real-time fluorescence quantitative PCR

        1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

        各基因的熒光定量Ct 檢測值通過Bio-RadManager 軟件獲得,運(yùn)用2-ΔΔCt法和β-actin為內(nèi)參計(jì)算各目的基因的相對表達(dá)量。SPSS 25 進(jìn)行各組數(shù)據(jù)差異顯著性分析,Duncan 法進(jìn)行多重比較,P<0.05表示差異顯著。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 牦牛不同組織及不同年齡階段皮下脂肪組織中METTL3 和WTAP 的表達(dá)模式

        選取30月齡母牦牛3 只,采用熒光定量PCR檢測METTL3和WTAPmRNA 在各組織中的表達(dá),METTL3和WTAP廣泛表達(dá)于牦牛心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、背最長肌和皮下脂肪組織(圖1A 和B)。肝臟中METTL3的表達(dá)最高(P<0.05),其次是腎臟,表達(dá)量最低的是皮下脂肪組織;皮下脂肪組織中WTAP的表達(dá)最為豐富,其次是心臟,脾臟中WTAP的表達(dá)量最低。皮下脂肪組織中METTL3的表達(dá)量30月齡高于18月齡但未達(dá)到顯著水平(P>0.05),30月齡WTAP的表達(dá)量顯著高于18月齡(P<0.01) (圖1C 和D)。

        圖1 METTL3 和WTAP 在牦牛不同組織不同時(shí)期皮下脂肪組織的相對表達(dá)量Figure 1 Relative expression of METTL3 and WTAP in different tissues and subcutaneous adipose tissue of yak at different stages

        2.2 牦牛原代前體脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)特征

        采集牦牛皮下脂肪和腎周脂肪組織,I 型膠原酶消化法培養(yǎng)獲取牦牛前體脂肪細(xì)胞(圖2A-D)。剛消化的前體脂肪細(xì)胞呈圓球形懸浮于培養(yǎng)基中(圖2A),培養(yǎng)24 h 之后部分細(xì)胞貼壁生長(圖2B),培養(yǎng)5 d 之后細(xì)胞全部貼壁生長且細(xì)胞呈三角形及短梭形(圖2C),細(xì)胞培養(yǎng)至9 d,形態(tài)變?yōu)殚L梭形呈現(xiàn)出成纖維細(xì)胞的形態(tài)特征并基本達(dá)到融合狀態(tài)(圖2D)。

        圖2 牦牛前脂肪細(xì)胞不同階段的形態(tài)特征Figure 2 Morphologic characteristics of yak preadipocytes at different stages

        2.3 牦牛前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型的建立

        牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程如圖3 所示。細(xì)胞生長接觸抑制時(shí)進(jìn)行誘導(dǎo)分化,此時(shí)為誘導(dǎo)0 d,細(xì)胞中出現(xiàn)少量的小脂滴(圖3A)。分化第4 天,牦牛前體脂肪細(xì)胞內(nèi)可見脂滴數(shù)明顯增加(圖3B)。第8 天時(shí),細(xì)胞中的小脂滴聚集且出現(xiàn)了許多大脂滴及少量的脂環(huán)(圖3C)。大多數(shù)細(xì)胞在第12 天完全分化,細(xì)胞中生成多而密的脂環(huán)(圖3D)。脂肪細(xì)胞分化特異性標(biāo)志基因的結(jié)果顯示(圖3E),與分化的早期階段(0 d)相比,PPARγ的表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢,在第12 天的表達(dá)量顯著高于第0 天(P<0.05)。C/EBPα 和FABP4的表達(dá)量在細(xì)胞分化第8 天時(shí)表達(dá)量最高(P<0.05),分化12 d 時(shí)表達(dá)量略有下降但顯著高于0 d 和4 d (P<0.05) (圖3F 和G)。這表明,在本試驗(yàn)條件下,前體脂肪細(xì)胞完全分化為脂肪細(xì)胞。

        圖3 牦牛前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化及PPARγ、C/EBPα 和FABP4 誘導(dǎo)分化過程中的表達(dá)模式Figure 3 Induced differentiation of yak preadipocytes and expression patterns of PPARγ,C/EBPα,and FABP4 during yak preadipocyte differentiation

        2.4 METTL3 和WTAP 在牦牛前體脂肪細(xì)胞增殖過程中的表達(dá)

        為了探究METTL3和WTAP在牦牛脂肪發(fā)育過程中的潛在功能,本研究檢測了METTL3和WTAP在細(xì)胞增殖3 個(gè)時(shí)期(24、48 和72 h)的表達(dá)水平(圖4)。從細(xì)胞接種到培養(yǎng)72 h,細(xì)胞密度越來越大,72 h 時(shí)到達(dá)接觸生長的狀態(tài)(圖4A)。METTL3和WTAP基因表達(dá)結(jié)果顯示(圖4B),METTL3和WTAP的表達(dá)量在細(xì)胞增殖階段呈現(xiàn)下降-上升的表達(dá)趨勢(P<0.05)。

        圖4 牦牛前體脂肪細(xì)胞增殖過程形態(tài)變化及METTL3 和WTAP 的表達(dá)Figure 4 Morphological changes of yak preadipocytes during proliferation,and expression of METTL3 and WTAP

        2.5 METTL3 和WTAP 在牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中的表達(dá)模式

        進(jìn)一步檢測METTL3和WTAP在牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,選取細(xì)胞分化的4 個(gè)時(shí)間點(diǎn)(0、4、8 和12 d) (圖5)。METTL3mRNA表達(dá)量呈現(xiàn)上升-下降-上升的趨勢,4、8 和12 d 的表達(dá)量顯著高于0 d (P<0.05)。WTAPmRNA 表達(dá)量呈現(xiàn)上升-下降的趨勢,4 d 的表達(dá)量高于0 d (P>0.05);8 和12 d 的表達(dá)量顯著低于0 d (P<0.05)。

        圖5 牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中METTL3 和WTAP 的表達(dá)Figure 5 Expression of METTL3 and WTAP during yak preadipocytes differentiation

        2.6 牦牛前體脂肪細(xì)胞分化各階段mRNA 的m6A甲基化水平

        為了進(jìn)一步明確牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中mRNA m6A 含量的變化規(guī)律,對細(xì)胞分化過程中的4 個(gè)階段RNA (0、4、8 和12 d)進(jìn)行m6A 水平檢測(圖6)。牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中m6A水平的變化呈現(xiàn)出逐漸上升的趨勢。在12 d 時(shí)細(xì)胞內(nèi)RNA 的m6A 豐度最高。

        圖6 牦牛前體脂肪細(xì)胞分化過程中m6A 甲基化水平的定量檢測Figure 6 Quantitative determination of m6A methylation level during yak preadipocyte differentiation

        3 討論

        m6A RNA 甲基化是繼非編碼RNAs、組蛋白修飾和DNA 甲基化之后,表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域的又一研究熱點(diǎn),其廣泛存在于動(dòng)植物的各類組織器官,是真核生物mRNA 中含量最為豐富的甲基化修飾方式。研究發(fā)現(xiàn),m6A RNA 甲基化修飾在生物機(jī)體代謝中發(fā)揮著重要的作用,如控制晝夜節(jié)律[26-27]脂質(zhì)沉積[28]和成脂分化[29-30]。WTAP 和METTL3 是m6A去甲基化酶的重要組分[7]。本研究基因的組織表達(dá)結(jié)果顯示,WTAPmRNA 表達(dá)量在皮下脂肪組織高于其他組織,這與豬各組織中的研究結(jié)果相一致[24]。WTAP 可引導(dǎo)METTL3 進(jìn)入核斑點(diǎn)從而使目標(biāo)RNA發(fā)生甲基化[20],敲除WTAP 導(dǎo)致METTL3 的降解并顯著降低了m6A 的水平[10]。因此,可以推測WTAP對牦牛脂肪組織的發(fā)育具有重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)METTL3在肝臟組織中的表達(dá)高于其他組織,皮下脂肪組織表達(dá)量最低。Wang 等[31]發(fā)現(xiàn)METTL3高表達(dá)于肩胛部棕色脂肪組織,是肩胛部棕色脂肪發(fā)育必不可少的調(diào)節(jié)因子,通過調(diào)控m6A 甲基化修飾水平的變化和Prdm16、Pparg 和Ucp1 的轉(zhuǎn)錄表達(dá)從而促進(jìn)小鼠出生后肩胛部棕色脂肪的發(fā)育。表明METTL3的表達(dá)具有組織特異性。與正常組織相比,METTL3顯著高表達(dá)于肝癌組織,這與本研究結(jié)果具有相似之處[32]。肝臟是糖、脂合成、代謝、儲(chǔ)存和再分配的中樞器官[33],通過內(nèi)分泌途徑調(diào)節(jié)能量平衡、繁殖和免疫反應(yīng)等生物學(xué)過程[34]。這些結(jié)果表明,牦牛肝臟中產(chǎn)生的METTL3可能通過內(nèi)分泌的方式調(diào)節(jié)牦牛脂肪及其他組織的發(fā)育。

        胚胎干細(xì)胞中(embryonic stem cells,ESC) METTL3的遺傳失活或耗竭,導(dǎo)致m6A 在選定靶基因上的去除和細(xì)胞分化時(shí)Nanog表達(dá)的延長,及體內(nèi)外ESC從自我更新向分化成多個(gè)細(xì)胞系退出的受損。因此,m6A 甲基化修飾可作為一種轉(zhuǎn)錄水平的標(biāo)記物來調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞分化和決定細(xì)胞命運(yùn)[17]。小鼠胚胎干細(xì)胞的相關(guān)研究表明,METTL3 影響小鼠胚胎干細(xì)胞的維持和分化[35]。小鼠胚胎成纖維細(xì)胞甲基化位點(diǎn)的發(fā)生主要依賴于WTAP 的修飾[36]。因此可以推測METTL3 和WTAP 在細(xì)胞分化過程中發(fā)揮著重要的作用。WTAP在牦牛脂肪細(xì)胞增殖階段呈現(xiàn)下降-上升的趨勢,在誘導(dǎo)分化階段呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢。METTL3在細(xì)胞增殖階段的表達(dá)呈現(xiàn)下降-上升趨勢,分化階段呈現(xiàn)出上升-下降-上升的趨勢,METTL3表達(dá)量與分化階段RNA 中m6A 含量變化趨勢相一致,提示在牦牛脂肪細(xì)胞分化階段METTL3大于調(diào)控細(xì)胞中m6A 的整體含量。小鼠前體脂肪細(xì)胞分化中WTAP和METTL3協(xié)同調(diào)控細(xì)胞內(nèi)甲基化水平的變化從而調(diào)節(jié)3T3-L1 細(xì)胞周期和細(xì)胞的有絲分裂克隆擴(kuò)增,進(jìn)而促進(jìn)3T3-L1 細(xì)胞中脂質(zhì)的形成[25]。在WTAP缺失的情況下,METTL3結(jié)合RNA 的能力顯著下降,表明WTAP調(diào)控m6A 甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(METTL3 和METTL14)到靶mRNA的募集[31]。而本研究發(fā)現(xiàn)在前體脂肪細(xì)胞分化后期METTL3的表達(dá)顯著升高,而WTAP的表達(dá)有所下降,這與3T3-L1 細(xì)胞分化后期WTAP增強(qiáng)METTL3到靶RNA 的募集研究結(jié)果相類似[25]。此外,在HepG2細(xì)胞中敲低METTL3細(xì)胞中脂質(zhì)積累減少,推測m6A RNA 甲基化介導(dǎo)了晝夜節(jié)律和脂質(zhì)代謝之間的相互作用[37]。對豬前體脂肪細(xì)胞分化的研究中發(fā)現(xiàn),METTL3介導(dǎo)的m6A 抑制脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)的形成[29]。Yao 等[39]發(fā)現(xiàn)豬骨髓干細(xì)胞中METTL3的缺失通過依賴YTHDF2 增強(qiáng) Janus 激酶1 mRNA 的穩(wěn)定性和激活STAT5 來促進(jìn)脂肪生成,這表明METTL3通過m6A 依賴的方式調(diào)控BMSCs 的分化。以上研究表明WTAP和METTL3對脂肪細(xì)胞的分化具有調(diào)控作用,在不同的細(xì)胞系及組織發(fā)育過程中具有不同的調(diào)控作用。這也充分暗示了WTAP和METTL3對動(dòng)物脂肪組織發(fā)育及脂肪細(xì)胞的分化具有重要的調(diào)控作用,但其具體功能機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

        4 結(jié)論

        本研究揭示了WTAP和METTL3在牦牛各組織及前體脂肪細(xì)胞增殖與分化階段的表達(dá)模式,METTL3在肝臟組織中高度表達(dá),WTAP在皮下脂肪組織中高度富集。二者在牦牛前體脂肪細(xì)胞增殖后期具有較高的表達(dá)水平,METTL3在脂肪細(xì)胞分化后期表達(dá)顯著上升。細(xì)胞整體m6A 含量在牦牛前體脂肪細(xì)胞分化后期也具有較高水平。初步揭示W(wǎng)TAP和METTL3對牦牛脂肪組織的發(fā)育及前體脂肪細(xì)胞的增殖與分化具有重要的調(diào)控作用。

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