羅 鑫，孫萬成，羅毅皓*

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810016）

牦牛酥油是似黃油的一種乳制品，是從牦牛奶中提煉出的脂肪。產(chǎn)于夏秋季的牦牛酥油色澤鮮黃、味道香甜、口感極佳，產(chǎn)于冬季的牦牛酥油則呈淡黃色。酥油含多種維生素，與普通奶油相比營養(yǎng)價(jià)值頗高，其硬脂酸含量更高、棕櫚酸含量更低，反式油酸和共軛亞油酸分別是普通奶油的近8 倍和2 倍[1]。

鞘磷脂是含鞘氨醇或二氫鞘氨醇的磷脂，其分子不含甘油，是一分子脂肪酸以酰胺鍵與鞘氨醇的氨基相連形成的，是細(xì)胞膜的重要組成成分[2]，也是一種膳食成分，在雞蛋、牛奶、肉類和魚類等食物中最為豐富[3]。近年來有研究表明，鞘磷脂與多種疾病的發(fā)生和治療有密切關(guān)系[4]，鞘磷脂主要位于細(xì)胞膜、脂蛋白和其他富含脂類的組織結(jié)構(gòu)上，對(duì)維持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)尤其是細(xì)胞膜的微控功能十分重要，還與人體內(nèi)的脂肪酸、膽固醇所引起的一些疾病有著密切的關(guān)系[5]。膳食中的鞘磷脂可通過調(diào)節(jié)結(jié)腸癌發(fā)生早期表達(dá)的蛋白質(zhì)，抑制結(jié)腸癌、肝癌細(xì)胞增殖，使得鞘磷脂在結(jié)腸癌和肝癌的發(fā)生過程中可能成為一種潛在的治療候選藥物[6-8]；膳食鞘磷脂可顯著上調(diào)缺鎂飲食導(dǎo)致的特異性皮炎模型表皮中神經(jīng)酰胺合成酶的表達(dá)，抑制缺鎂飲食無毛小鼠皮膚炎癥的發(fā)生[9-10]；研究表明，與對(duì)照組相比，飼喂含鞘磷脂飼料的大鼠血漿中膽固醇含量減少了30%[11-13]。目前，高脂飲食習(xí)慣正逐漸影響著人類的健康，長期高脂飲食、體內(nèi)營養(yǎng)過剩易引起高脂血癥，患者長期處于炎癥的狀態(tài)，機(jī)體的脂代謝平衡也會(huì)發(fā)生改變。鞘磷脂具有一定的抗炎癥功能[14]和調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝[15]的作用。Norris等[11]研究發(fā)現(xiàn)牛奶鞘磷脂能降低高脂肪飲食誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠的血清血脂和肝臟甘油三酯。Chung等[12]發(fā)現(xiàn)當(dāng)將雞蛋鞘磷脂添加到高脂肪的飲食中時(shí)，其會(huì)以劑量依賴地方式有效降低肝臟膽固醇和甘油三酯的水平，并且對(duì)飲食誘導(dǎo)的肝臟脂肪組織炎癥具有潛在的預(yù)防作用。依帕爾古麗·阿不拉等[13]研究了新疆拜城油雞中的鞘磷脂提取物對(duì)高脂血癥小鼠血脂及肝臟的影響，發(fā)現(xiàn)拜城油雞鞘磷脂提取物可顯著降低高脂血癥小鼠的血脂水平，保護(hù)肝細(xì)胞、改善肝細(xì)胞脂肪變性。

不同食物中鞘磷脂的含量不同，某些水果和蔬菜中鞘磷脂含量不到100 μmol/kg，在雞蛋、奶制品和部分植物種子中可達(dá)2 000 μmol/kg 以上[16]，諸多學(xué)者通過對(duì)市售嬰兒配方乳粉中磷脂的含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)磷脂在嬰兒配方奶粉中的含量為15～607 mg/100 g，其中鞘磷脂為12～125 mg/100 g，磷脂在牛乳中的質(zhì)量濃度為4.60～49.10 mg/100 mL，磷脂中鞘磷脂相對(duì)含量為17%～41.10%，磷脂在母乳中的質(zhì)量濃度為13.30～40.60 mg/100 mL，鞘磷脂占磷脂的24.0%～45.9%[17]，而牦牛酥油中鞘磷脂含量可達(dá)1 918 mg/100 g，通過分析牦牛酥油中鞘磷脂的脂肪酸組成及含量，發(fā)現(xiàn)其飽和脂肪酸占脂肪酸總量的73.73%～75.89%，不飽和脂肪酸占24.12%～26.27%，與牦牛酥油和牦牛酥油磷脂中超長鏈脂肪酸含量相比，牦牛酥油鞘磷脂中超長鏈脂肪酸（占23.15%）的含量具有極顯著性差異[18-19]。因此，本實(shí)驗(yàn)分析牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食引起的小鼠脂代謝紊亂及肝臟組織炎癥的作用，初步探討鞘磷脂調(diào)節(jié)脂代謝及改善組織炎癥的機(jī)制，為更好地開發(fā)和利用鞘磷脂提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

C57BL/6J小鼠，SPF級(jí)，雄性，4 周齡，體質(zhì)量約13.00 g，由蘭州獸醫(yī)研究所提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（甘）2015-0001。

牦牛酥油鞘磷脂 本實(shí)驗(yàn)室自制；總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglycerides，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、空腹血糖、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）測(cè)定試劑盒 南京建成生物工程研究所；脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，F(xiàn)AS）、硬脂酰輔酶A去飽和酶1（stearoyl-CoA desaturase 1，SCD1）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-6等基因 上海生物有限公司合成；Total RNA試劑盒美國Omega Bio-Tek公司；Evo M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR Green Pro Taq HS預(yù)混型qPCR試劑盒 艾科瑞生物技術(shù)有限公司。小鼠低脂飼料（TP23302，脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%）和高脂飼料（TP23300，脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%） 江蘇南通特洛菲飼料科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

MμLtiskan FC酶標(biāo)儀 美國Thermo Fisher公司；YM立式壓力蒸汽滅菌器 上海三申醫(yī)療器械有限公司；CFX96熒光定量儀 美國 BIO-RAD公司；2-16KL冷凍離心機(jī) 德國Sigma公司；NanoDrop 2000紫外-可見分光光度計(jì) 美國賽默飛世爾公司。

1.3 方法

1.3.1 牦牛酥油鞘磷脂的制備

牦牛酥油鞘磷脂參考本課題組已發(fā)表的方法制得[18]。參照GB/T 35867—2018《糧油檢驗(yàn) 卵磷脂中磷脂含量的測(cè)定 高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測(cè)法》測(cè)得牦牛酥油中鞘磷脂的含量為1 918 mg/100 g，提取的鞘磷脂純度為78%。鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)溶液和牦牛酥油鞘磷脂樣品的高效液相色譜圖分別見圖1、2。

圖1 鞘磷脂標(biāo)準(zhǔn)溶液高效液相色譜圖Fig.1 High performance liquid chromatogram of sphingomyelin standard solution

圖2 牦牛酥油鞘磷脂樣品溶液高效液相色譜圖Fig.2 High performance liquid chromatogram of yak ghee sphingomyelin solution

1.3.2 動(dòng)物分組及飼喂

將30 只雄性C57BL/6J小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5 組，每組6 只，并適應(yīng)性飼喂7 d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，小鼠分組如下：低脂組（LF組）、高脂組（HF組）、鞘磷脂高劑量組（HF+HSM組，鞘磷脂添加量為1.20 g/100 g）、鞘磷脂中劑量組（HF+MSM組，鞘磷脂添加量為0.60 g/100 g）和鞘磷脂低劑量組（HF+LSM組，鞘磷脂添加量為0.30 g/100 g），根據(jù)Norris等[21]的方法確定鞘磷脂添加量，按照不同劑量直接將鞘磷脂拌入到飼料中，觀察確保每次飼喂的含鞘磷脂飼料均能被小鼠食用完。除低脂組小鼠飼喂低脂飼料外，其他組小鼠均給予高脂飼料或高脂飼料+鞘磷脂進(jìn)行飼喂，所有小鼠均被安置在恒定的溫度、濕度條件和12 h的光暗循環(huán)下。自由攝食和飲水，飼料每日更新并測(cè)定攝食量，按公式（1）計(jì)算食物利用率。每周測(cè)量體質(zhì)量。

鞘磷脂飼喂4 周后，小鼠禁食10 h，麻醉摘眼球取血后處死，處死前進(jìn)行稱質(zhì)量，麻醉取血后打開小鼠腹腔和胸腔，立即分離肝臟、心臟、脾、腎、腹部脂肪和腎周脂肪，測(cè)定質(zhì)量，然后取腹部脂肪和100 mg肝臟組織進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，剩余組織于-80 ℃貯存待用。分別按公式（2）、（3）計(jì)算臟器指數(shù)和臟器脂肪指數(shù)。

1.3.3 血清和肝臟生化指標(biāo)檢測(cè)

用1.5 mL的無菌EP管收集小鼠眼球血，室溫靜置1 h后，于4 ℃、3 000 r/min 離心10 min，吸取上層血清，分裝保存于-80 ℃，參照試劑盒說明書測(cè)定血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C和空腹血糖的濃度。再根據(jù)試劑盒的方法測(cè)定肝臟組織中ALT、AST的活力，結(jié)果以蛋白質(zhì)量計(jì)。

1.3.4 肝臟和脂肪組織病理學(xué)分析

收集肝臟和腹部脂肪組織，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛固定后，石蠟切片用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)變化，并進(jìn)行圖像采集。

1.3.5 實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分析

使用Total RNA試劑盒按照說明對(duì)5 個(gè)組小鼠的肝臟組織RNA進(jìn)行提取，并利用NanoDrop 2000紫外-可見分光光度計(jì)對(duì)提取的RNA濃度和純度進(jìn)行測(cè)定，OD260nm/280nm值在1.80～2.10之間。根據(jù)Evo M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒的方法合成cDNA第一條鏈。根據(jù)SYBR Green Pro Taq HS預(yù)混型qPCR試劑盒的方法對(duì)18 個(gè)基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分析，脂質(zhì)代謝和炎癥因子的引物序列見表1。所有基因均以GAPDH為參考基因，采用比較閾值法（2-ΔΔCt）進(jìn)行相對(duì)定量，計(jì)算小鼠肝臟組織脂代謝和炎癥因子mRNA相對(duì)表達(dá)量。注：ACC-α.乙酰輔酶A羧化酶α（acetyl-CoA carboxylase alpha）；FADS1.脂肪酸去飽和酶1（fatty acid desaturase 1）；FADS2.脂肪酸去飽和酶2（fatty acid desaturase 2）；GPAT4.甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶4（glycerol-3-phosphate acyltransferases 4）；GPAM.3-磷酸甘油酰基轉(zhuǎn)移酶（glycerol-3-phosphate acyltransferase）；THRSP.甲狀腺激素應(yīng)答蛋白（thyroid hormone responsive protein）；HMGCR.3-羥基-3-甲基戊二酸輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methylglutaric acid coenzyme A reductase）；CPT1.肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1（carnitine palmitoyl transferase 1）；FABP1.肝型脂肪酸結(jié)合蛋白（hepatic fatty acid binding protein）；A-FABP.脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白（adipocyte fatty acid-binding protein）；IL-1Ra.白介素1受體拮抗劑（interleukin-1 receptor antagonist）；IFN-γ.干擾素γ（interferon-γ）。

表1 引物序列信息Table 1 Primers sequences

續(xù)表1

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用鄧肯檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠體質(zhì)量和總攝食量的影響

由表2和圖3可知，與高脂組相比，牦牛酥油鞘磷脂組小鼠（除鞘磷脂低劑量組外）的最終體質(zhì)量顯著降低（P＜0.05）。相對(duì)于低脂組，高脂組小鼠的攝食量顯著降低（P＜0.05），而其體質(zhì)量增加量顯著升高（P＜0.05），說明高脂飲食能夠誘導(dǎo)小鼠肥胖的發(fā)生；與高脂組相比，鞘磷脂組小鼠的總攝食量與之相近，但體質(zhì)量增加量有所降低，尤其是高劑量組具有顯著差異（P＜0.05）。相對(duì)于高脂組，低脂組的食物利用率顯著降低（P＜0.05），高劑量鞘磷脂組雖有較低的食物利用率，但差異不顯著（P＞0.05）。上述數(shù)據(jù)表明牦牛酥油鞘磷脂具有降低由肥胖飲食引發(fā)體質(zhì)量增加的作用。

表2 各組小鼠的體質(zhì)量增加量、總攝食量和食物利用率（n＝6）Table 2 Body mass gain, total feed intake, and utilization rate of mice in each group (n = 6)

圖3 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響Fig.3 Effect of yak ghee sphingomyelin on body mass of mice

2.2 鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠臟器指數(shù)、腹部和腎周脂肪指數(shù)的影響

由表3可知，與低脂組相比，高脂組小鼠心臟、腎臟和脾臟指數(shù)均有所升高；肝臟指數(shù)顯著增高（P＜0.05），從39.90 mg/g增加至44.15 mg/g。與高脂組相比，鞘磷脂各組小鼠的脾臟、心臟和腎臟指數(shù)較低，但無顯著差異；高劑量鞘磷脂組的肝臟指數(shù)顯著下降了8.54%（P＜0.05）。此外，與低脂組相比，高脂組小鼠腹部脂肪和腎周脂肪指數(shù)顯著升高（P＜0.05），鞘磷脂低、中、高劑量組中小鼠腹部脂肪指數(shù)較高脂組分別降低了28.54%、29.83%和34.37%，腎周圍脂肪指數(shù)也顯著降低（P＜0.05）。以上研究表明牦牛酥油鞘磷脂對(duì)小鼠的心臟、腎臟和脾臟無明顯影響，且能夠改善高脂飲食引起的小鼠肝臟指數(shù)變化和緩解腹部脂肪及腎周脂肪的積聚。

表3 各組小鼠的臟器指數(shù)、腹部脂肪指數(shù)和腎周脂肪指數(shù)（n＝6）Table 3 Visceral organ indexes, abdominal fat index, and perirenal fat index of mice in each group (n = 6)

2.3 鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠血清血脂水平的影響

高脂飲食引起的血液中TC、TG和LDL-C水平升高會(huì)導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生，本研究對(duì)小鼠血清血脂水平的分析評(píng)估了牦牛酥油鞘磷脂的脂代謝作用。由圖4可知，與低脂組相比，高脂組小鼠TC、TG和LDL-C和血糖水平顯著升高，HDL-C水平顯著下降（P＜0.05）；相對(duì)于高脂組，鞘磷脂組中TC、TG、LDL-C和血糖水平顯著下降（P＜0.05），高劑量鞘磷脂組TC、TG和LDL-C和血糖水平分別下降了26.26%、24.70%、38.96%和42.16%。Zhang Ping[20]、Norris[21]等發(fā)現(xiàn)牛奶和雞蛋鞘磷脂可通過抑制內(nèi)源性膽固醇的吸收降低血液中膽固醇的含量，從而改善高脂飲食引起的血脂水平增加。牦牛酥油鞘磷脂對(duì)體內(nèi)血脂具有代謝作用，其降血脂的潛在機(jī)理表現(xiàn)為可以通過抑制膽固醇的吸收防止膽固醇沉積，有效地維持血液中膽固醇水平的平衡；此外，牦牛酥油鞘磷脂中不飽和脂肪酸含量較高，不飽和脂肪酸具有調(diào)節(jié)血脂、降低血液中膽固醇含量的作用。

圖4 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠血清血脂水平的影響Fig.4 Effect of yak ghee sphingomyelin on serum lipid levels in HFD-fed mice

2.4 鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟AST和ALT活力的影響

ALT和AST活力為評(píng)價(jià)肝功能的重要指標(biāo)，肝臟組織受損時(shí)，細(xì)胞膜的通透性增加，肝細(xì)胞漿內(nèi)ALT和AST釋放到血液中，會(huì)引起肝臟和血清中轉(zhuǎn)氨酶水平升高[22]。從圖5可以看出，與低脂組相比，高脂飲食引起了肝臟ALT和AST活力的顯著升高（P＜0.05），低脂組中ALT和AST的活力分別為11.16 U/g和11.76 U/g；高脂組中ALT和AST的活力分別為24.37 U/g和15.76 U/g；與高脂組相比，鞘磷脂高、中、低劑量組小鼠肝臟ALT和AST活力均顯著降低（P＜0.05），ALT的活力分別為15.99、18.63、21.58 U/g，AST的活力分別為12.91、14.24、14.32 U/g。Norris[21]等發(fā)現(xiàn)與低脂飲食相比，高脂飲食能夠使血清中ALT、AST活力分別顯著增加43%和30%（P＜0.05），雞蛋鞘磷脂和牛奶鞘磷脂均能降低ALT（分別降低了8.30%和8%）和AST（分別降低了5%和10%）的活力。

圖5 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟ALT（A）、AST（B）活力的影響Fig.5 Effect of yak ghee sphingomyelin on liver alanine aminotransferase (A)and aspartate transaminase (B) activity in HFD-fed mice

2.5 鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟和腹部脂肪組織病理學(xué)的影響

為了研究飼喂鞘磷脂后對(duì)小鼠肝臟及腹部脂肪組織病理變化的影響，進(jìn)一步對(duì)肝臟和腹部脂肪組織進(jìn)行HE染色。由圖6、7可知，低脂組和高脂組中，小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)正常完整，肝細(xì)胞沿中央靜脈呈放射狀排列，未見變性、壞死，高脂組偶見輕微肝細(xì)胞空泡變；腹部脂肪組織的脂肪細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，間質(zhì)未見充血、水腫和炎細(xì)胞浸潤。鞘磷脂組中小鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)正常完整，肝細(xì)胞沿中央靜脈呈放射狀排列，未見變性、壞死，肝竇未見擴(kuò)張，間質(zhì)未見充血、水腫和炎細(xì)胞浸潤；腹部脂肪組織的脂肪細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，間質(zhì)未見充血、水腫和炎細(xì)胞浸潤。染色結(jié)果表明，飼喂鞘磷脂后，可以減輕由高脂飲食引起的小鼠肝臟細(xì)胞空泡變，從而對(duì)肝臟起到一定的保護(hù)作用。

圖6 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟組織病理學(xué)的影響Fig.6 Effect of yak ghee sphingomyelin on liver histopathology in HFD-fed mice

圖7 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠腹部脂肪組織病理學(xué)的影響（×200）Fig.7 Effect of yak ghee sphingomyelin on the histopathology of abdominal adipose tissues in HFD-fed mice (× 200)

2.6 鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟脂代謝和炎癥因子表達(dá)量的影響

2.6.1 對(duì)脂質(zhì)代謝基因表達(dá)的影響

如圖8所示，與高脂組相比，飼喂鞘磷脂后，小鼠肝臟組織中FAS、A-FABP、ACC-α、FADS2、THRSP、FADS1、GPAM、CPT1和GPAT4基因的表達(dá)受到抑制，其表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）；FABP1、HMGCR和SCD1基因的表達(dá)顯著上調(diào)。

圖8 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟脂代謝基因表達(dá)量的影響Fig.8 Effect of yak ghee sphingomyelin on lipid metabolism gene expression in liver tissues of HFD-fed mice

FADS1和FADS2基因的表達(dá)在多不飽脂肪酸的合成中起關(guān)鍵作用，ACC-α是脂肪酸生物合成第一步的限速酶[23]，GPAM定位于線粒體，GPAT4定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)[24]，是甘油三酯合成第一步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。THRSP基因參與甲狀腺激素和碳水化合物誘導(dǎo)的脂肪生成過程[25]，F(xiàn)AS的表達(dá)量隨著THRSP表達(dá)增強(qiáng)而提高[26]。SCD1基因是單不飽和脂肪酸合成過程中的限速酶[27]。因此，牦牛酥油鞘磷脂調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用機(jī)制表現(xiàn)為：通過抑制磷酸甘油途徑合成甘油三酯、減少甲狀腺激素和碳水化合物誘導(dǎo)脂肪的合成、調(diào)節(jié)肝臟中脂類的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝從而減少肝臟和血清中脂質(zhì)的積累。牦牛酥油鞘磷脂的降血脂機(jī)理與肝臟組織中脂質(zhì)代謝相關(guān)酶的表達(dá)密切相關(guān)，鞘磷脂通過影響相關(guān)酶的表達(dá)量調(diào)節(jié)機(jī)體中的飽和及不飽和脂肪酸的含量，進(jìn)而對(duì)血脂起調(diào)節(jié)作用。

2.6.2 對(duì)炎癥因子基因表達(dá)的影響

促炎因子和抗炎因子在多種炎癥反應(yīng)中起重要作用[28]。高脂飲食不僅會(huì)引起血脂代謝紊亂，還會(huì)使機(jī)體長期處于慢性炎癥狀態(tài)[29]。高脂飼料飼喂小鼠會(huì)顯著上調(diào)機(jī)體促炎癥因子的表達(dá)[30]，TNF-α和IL-6等促炎因子的釋放，能夠增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，引起肝損傷[31]。因此，本實(shí)驗(yàn)利用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)炎癥因子在肝臟中的表達(dá)水平，由圖9可知，高脂組小鼠肝臟中促炎癥因子IL-6、TNF-α、IL-1β和IFN-γ的表達(dá)量顯著高于低脂組（P＜0.05），鞘磷脂組小鼠肝臟中促炎癥因子的表達(dá)量均顯著低于高脂組（P＜0.05）。與高脂組相比，鞘磷脂中、高劑量組中抗炎癥因子IL-10的表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），IL-1Ra和IL-4表達(dá)量隨著鞘磷脂添加量的增加呈上升趨勢(shì)，因此，牦牛酥油鞘磷脂改善炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制可能與抑制TNF-α和IL-6等促炎因子的生成相關(guān)，但本研究中鞘磷脂對(duì)體內(nèi)炎癥因子的表達(dá)量影響無明顯劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系，可能與本實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)相關(guān)，需要通過建立相應(yīng)的炎癥模型或增加飼喂時(shí)間及樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

圖9 牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食小鼠肝臟炎癥因子基因表達(dá)量的影響Fig.9 Effect of yak ghee sphingomyelin on inflammatory gene expression in liver tissues of HFD-fed mice

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)初探了牦牛酥油鞘磷脂對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠脂質(zhì)代謝及肝臟組織炎癥的作用。研究發(fā)現(xiàn)，牦牛酥油鞘磷脂能夠減輕高脂飲食小鼠的體質(zhì)量和預(yù)防高脂飲食引起的高脂血癥。通過對(duì)肝臟組織中炎癥因子及脂質(zhì)代謝相關(guān)基因表達(dá)量的分析發(fā)現(xiàn)，牦牛酥油鞘磷脂飼喂小鼠后顯著下調(diào)了組織中促炎癥因子的表達(dá)，對(duì)組織炎癥具有很好的預(yù)防作用，但鞘磷脂對(duì)抗炎癥因子的表達(dá)量無明顯的劑量對(duì)應(yīng)關(guān)系，可能是由于飼喂時(shí)間較短或者樣本較少，存在誤差，后續(xù)實(shí)驗(yàn)還需通過建立炎癥模型，對(duì)鞘磷脂的抗炎癥劑量進(jìn)行詳細(xì)的研究；對(duì)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)分析發(fā)現(xiàn)，鞘磷脂能上調(diào)FABP1、HMGCR和SCD1基因的表達(dá)，下調(diào)THRSP、ACC-α等基因的表達(dá)，這些與脂肪合成代謝和分解代謝相關(guān)基因表達(dá)量的變化能夠?qū)Ω咧嬍骋鸬男∈笱逖竭M(jìn)行調(diào)節(jié)。綜上，本研究可為今后以牦牛酥油鞘磷脂為原料的功能性食品的開發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。