李華根

布魯氏菌病是因布魯氏桿菌感染而引起的一種人獸共患的疾病,這種疾病在全世界范圍內(nèi)存在廣泛的流行性［1］,因此采取有效措施防止并控制布魯氏菌病的感染十分重要。傳統(tǒng)血清學(xué)和血培養(yǎng)檢驗是診斷布魯氏菌病的主要方法,我國在進(jìn)行臨床診斷時初次篩查一般利用布魯氏菌病平板凝集試驗,也有患者開展虎紅平板凝集試驗,對檢驗結(jié)果陽性者進(jìn)一步利用布魯氏菌病試管凝集試驗進(jìn)行確診［2］。在本次研究中主要利用虎紅平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測方法進(jìn)行診斷,利用半胱氨酸檢驗方法是為了鑒別布魯氏菌病患者的急慢性情況,以便為病情的進(jìn)一步診治提供依據(jù)。具體情況報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年3 月～2021 年3 月在本中心監(jiān)測的123 例疑似布魯氏菌病患者作為研究對象,其中男61 例,女62 例；年齡24～62 歲,平均年齡(42.16±10.31)歲。

1.2 方法 所有患者入院后采集空腹靜脈血4 ml 進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)試驗,同時根據(jù)《布魯氏菌病診斷》WS269-2019 進(jìn)行判定。

1.2.1 虎紅平板凝集試驗 開展試驗前需要將血清和抗原在室溫條件下放置0.5～1.0 h,然后在玻璃板上標(biāo)記被檢血清號,添加相應(yīng)的被檢血清0.03 ml。在被檢血清旁加虎紅平板凝集抗原0.03 ml。通過牙簽對血清和抗原進(jìn)行攪拌,以便于充分的混合均勻。在5 min 內(nèi)觀察結(jié)果。每次試驗均應(yīng)該設(shè)置陰性血清和陽性血清進(jìn)行對照［3］。

1.2.2 熒光偏振檢測 通過熒光偏振檢測儀、相配套的熒光偏振檢測試管型抗體檢測試劑盒、布魯氏菌病試管、凝集抗原等進(jìn)行檢驗。在開展檢測時所有的方法按照說明書進(jìn)行嚴(yán)格執(zhí)行。利用熒光偏振檢測試驗對患者的血清進(jìn)行布魯氏桿菌和抗體檢查。參照《實用臨床布魯氏菌病》進(jìn)行判斷,熒光偏振檢測試驗試管型抗體的檢驗結(jié)果則以毫偏振單位(mP)進(jìn)行表示,并以檢測值>93 mP 作為陽性［4］。

1.2.3 試管凝集試驗 首先對被檢測的血清進(jìn)行稀釋,每份被檢血清用5 支凝集試管,標(biāo)記檢驗編碼后,第1管加1.15 ml稀釋液,第2～5管各加入0.5 ml稀釋液。取被檢血清0.1 ml 加入第1 管,充分混勻。從第1 管中吸取0.5 ml 加入到第2 管,混合均勻后再從第2 管 吸取0.5 ml 加至第3 管,如此倍比稀釋至第5 管,從第5 管棄去0.5 ml,稀釋完畢。第1～5 管的血清稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1∶50、1∶100、1∶200,然后增加抗原,將0.5 ml 20 倍稀釋的抗原加入已稀釋好的各血清管中,并振搖均勻；第1～5 管的血清稀釋度分別為1∶25、1∶50、1∶100、1∶200、1∶400,各反應(yīng)管反應(yīng)總量為1 ml。最后設(shè)置對照試驗進(jìn)行比較［5］。

1.2.4 半胱氨酸檢測 選擇1∶5 稀釋的被檢血清 0.5 ml 和等量的0.2 M 半胱氨酸鹽酸鹽溶液進(jìn)行混合,將其放置在37℃的溫箱中保存30 min,然后通過生理鹽水進(jìn)行倍比稀釋。然后再各自加入0.5 ml 的試管凝集抗原,同時設(shè)抗原和0.2 M 半胱氨酸處理后的血清對照。在混合均勻后放置在37℃的溫箱中18～24 h,取出溫室下放置2 h,對結(jié)果進(jìn)行判斷。1∶100 稀釋,“++”及以上判定為陽性；1∶50 稀釋呈現(xiàn)“++”及以上,判定為疑似陽性［6］。

1.3 觀察指標(biāo) 以細(xì)菌學(xué)檢測結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)。比較不同檢測方法(虎紅平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測)對布魯氏菌病的檢出率；分析不同檢測方法(虎紅平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測)對布魯氏菌病的診斷效能,即陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率。陽性預(yù)測值=真陽性/(真陽性+假陽性)×100%；陰性預(yù)測值=真陰性/(假陰性+真陰性)×100%；敏感度=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%；準(zhǔn)確度=(真陽性+真陰性)/(真陽性+假陽性+假陰性+真陰性)×100%；約登指數(shù)=(靈敏度+特異度)-1；誤診率=假陽性/(假陽性+真陰性)×100%；漏診率=假陰性/(真陽性+假陰性)× 100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同檢測方法對布魯氏菌病的檢出率比較 123 例疑似布魯氏菌病患者細(xì)菌學(xué)檢測結(jié)果最終確診105 例(85.37%)?；⒓t平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測對布魯氏菌病的檢出率分別為83.74%、82.93%、83.74%、82.11%,比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同檢測方法對布魯氏菌病的檢出率 比較(n,%,n=123)

2.2 不同檢測方法對布魯氏菌病的診斷效能分析 虎 紅平板凝集試驗對布魯氏菌病的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為94.17%(97/103)、60.00%(12/20)、92.38% (97/105)、66.67%(12/18)、88.62%(109/123)、0.5905、33.33%(6/18)、7.62%(8/105)。熒光偏振檢測對布魯氏菌病的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為97.06%(99/102)、71.43%(15/21)、94.29%(99/105)、83.33%(15/18)、92.68%(114/123)、0.7762、16.67%(3/18)、5.71%(6/105)。試管凝集試驗對布魯氏菌病的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為92.23%(95/103)、50.00%(10/20)、90.48% (95/105)、55.56%(10/18)、85.37%(105/123)、0.4604、44.44%(8/18)、9.52%(10/105)。半胱氨酸檢測對布魯氏菌病的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率分別為98.02% (99/101)、72.73%(16/22)、94.29%(99/105)、88.89% (16/18)、93.50%(115/123)、0.8318、11.11%(2/18)、5.71% (6/105)。見表2。

表2 不同檢測方法對布魯氏菌病的診斷效能分析(n)

3 討論

布魯氏菌病屬于全球范圍內(nèi)具有較高發(fā)病率的一種人畜共患疾病,當(dāng)前試驗室對該疾病的檢查方法主要包括分離培養(yǎng)方法和血清檢測方法,但這兩類方法也分別存在自身的優(yōu)勢和不足［3］。細(xì)菌學(xué)檢測方法是試驗室檢測的金標(biāo)準(zhǔn),其操作要求較高,并存在一定的風(fēng)險,因此在臨床應(yīng)用時很難進(jìn)行規(guī)范的使用［4］。

目前國內(nèi)檢測布魯氏菌病的主要方法包括虎紅平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測。本研究結(jié)果顯示,虎紅平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測對布魯氏菌病的檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)過虎紅平板凝集試驗、熒光偏振檢測、試管凝集試驗、半胱氨酸檢測進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)檢測對布魯氏菌病的陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、約登指數(shù)、誤診率和漏診率均存在著各自的優(yōu)點。由此說明通過上述檢測方法對布魯氏菌病進(jìn)行血清學(xué)檢測可實現(xiàn)對布魯氏菌病的檢出情況,但不同檢測方法也存在不足之處。如熒光偏振檢測屬于一種新型的檢測手段,國外對這種檢測方法的應(yīng)用早有研究［5］,我國處于起步階段。這是一種同源性分析的技術(shù),可以通過檢測抗原抗體之間的相互作用進(jìn)行確診。半胱氨酸檢測屬于一種含硫基化合物,主要含有巰基-SH 成分,通過半胱氨酸處理血清能夠反映出免疫球蛋白G (IgG)的成分和活性,可以應(yīng)用于布魯氏菌病人群的免疫與自然抗感染的鑒別中［6-10］。當(dāng)前認(rèn)為布魯氏菌病發(fā)病早期階段在人體中會產(chǎn)生對二級乙醇及半胱氨酸敏感的抗體免疫球蛋白M(IGM),之后IgG 會逐漸上 升［11］。在本次研究中,急性患者的半胱氨酸陰性值相對慢性患者要低［12］,由此也說明半胱氨酸在布魯氏菌病患者的檢測中具有較高的檢測價值,并能實現(xiàn)對患者病情的準(zhǔn)確分析。

綜上所述,布魯氏菌病血清學(xué)檢測在布魯氏菌病的診斷中具有重要的意義,不同血清學(xué)檢測方法存在各自的診斷特點,可聯(lián)合多方法綜合性進(jìn)行布魯氏菌病血清學(xué)檢測,對提高布魯氏桿菌的確診率具有重要意義。