譚金燕，李建麗，蘇琪輝，李 慧，程艷剛，喬元彪，李青山*，王穎莉*

分心木中2個新的脂肪酸酯

譚金燕1, 2，李建麗2#，蘇琪輝2，李 慧2，程艷剛1, 2，喬元彪1, 2，李青山1, 2*，王穎莉1, 2*

1.山西中醫(yī)藥大學，基于炎性反應的重大疾病創(chuàng)新藥物山西省重點實驗室，山西 晉中 030619 2.山西中醫(yī)藥大學，山西省現(xiàn)代中藥工程實驗室，山西 晉中 030619

目的 研究分心木的化學成分。方法 采用正相硅膠、反相ODS、中壓制備液相色譜和制備型高效液相色譜等多種色譜技術和手段進行分離和純化，通過1D和2D-NMR、HR-ESI-MS等譜學數(shù)據(jù)分析鑒定化合物結構。結果 從分心木中共分離得到5個脂肪酸類成分，分別鑒定為胡桃酸酯A（1）、胡桃酸酯B（2）、pinellic acid（3）、()-11,12,13-trihydroxy-9-octadecenoate（4）和9,12,13-三羥基十八烷-10,15-二烯酸（5）。結論 化合物1和2為新的脂肪酸酯類化合物，化合物3～5為首次從胡桃中分離得到。

分心木；胡桃；脂肪酸；十八烷酸；胡桃酸酯A；胡桃酸酯B；9,12,13-三羥基十八烷-10,15-二烯酸

分心木為胡桃科植物胡桃L.果核內(nèi)的木質(zhì)隔膜，又名核桃隔膜、核桃瓣膜[1-2]。傳統(tǒng)中醫(yī)學認為分心木具有澀精、健脾固腎、利尿清熱等功效，可用于治療遺精、尿頻、尿血以及暑熱瀉痢等疾病[3-4]?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，分心木對糖尿病也能起到較好的預防和治療作用[5-6]。此外，長期服用分心木茶，可緩解老年人的腰膝酸軟癥狀，并有助于睡眠和提高免疫力[7]。目前，從分心木中分離得到的化合物主要集中在黃酮類、酚酸類和醌類化學成分，其中黃酮類成分在分心木中具有較高含量[8]。分心木資源豐富，但其作為核桃的副產(chǎn)物主要被制作成燃料或大部分被丟棄，利用率低、資源浪費現(xiàn)象嚴重[9-10]。為了更好利用分心木藥用資源，尋找新的活性成分，本實驗對分心木70%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取部位進行研究，最終共分離得到5個脂肪酸類化合物，分別鑒定為胡桃酸酯A（juglans acid ester A，1）、胡桃酸酯B（juglans acid ester B，2）、pinellic acid（3）、()-11,12,13-trihydroxy-9-octadecenoate（4）和9,12,13-三羥基十八烷-10,15-二烯酸（9, 12,13-trihydroxyoctadeca-10,15-dienoic acid，5），其中化合物1和2為新的脂肪酸酯類化合物。

1 儀器與材料

Bruker Ascend-600 MHz型核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）；Triple TOFTM5600 MS/MS液質(zhì)聯(lián)用色譜儀（美國ABSciex公司）；Büchi pump Manager C-610型中壓色譜儀（瑞士Büchi公司）；Waters 2695-2998-2414分析型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；島津Essentia LC-16P制備型高效液相色譜儀（日本SHIMADZU公司）；Sharpsil-U C18分析型色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Sharpsil-U C18制備型色譜柱（250 mm×21.2 mm，5 μm）；柱色譜硅膠（200～300、80～120目，青島海洋化工廠）；柱色譜ODS（日本YMC公司）；色譜級甲醇（瑞典OCEANPAK公司）；其他試劑均為分析純（天津市致遠化學試劑有限公司）。

分心木于2021年3月購自河北安國中藥材市場，經(jīng)山西中醫(yī)藥大學裴香萍教授鑒定為胡桃科植物胡桃L.果實的干燥木質(zhì)隔膜。樣品標本（20210301）放置于山西中醫(yī)藥大學現(xiàn)代中藥工程實驗室。

2 提取與分離

取分心木5 kg，用8倍量70%乙醇加熱回流提取3次（每次2 h），合并提取液，減壓濃縮得總浸膏1.1 kg。浸膏加入適量蒸餾水使其混懸分散，依次用石油醚（60～90 ℃）、醋酸乙酯和水飽和正丁醇等體積反復萃取3次，回收溶劑得到石油醚、醋酸乙酯和正丁醇3個萃取部位。取醋酸乙酯萃取部位（約260 g）經(jīng)硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（50∶0、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1、1∶1、0∶1）系統(tǒng)分離得到8個組分A～H。組分B經(jīng)ODS中壓制備液相分離（甲醇-水10%～100%），得到15個流分B-1～B-15。B-12經(jīng)制備型高效液相色譜分離（64%甲醇）得到化合物1（1.2 mg，R＝22.9 min）和2（2.5 mg，R＝23.7 min）；組分C經(jīng)ODS中壓制備液相分離（10%～100%甲醇），共得到13個流分C-1～C-13。C-9經(jīng)制備型高效液相色譜分離（61%甲醇）得到化合物3（7.7 mg，R＝23.5 min），C-10經(jīng)制備型高效液相色譜分離（70%甲醇）得到化合物5（6.6 mg，R＝25.2 min），C-11經(jīng)制備型高效液相色譜分離（75%甲醇）得到化合物4（7.3 mg，R＝27.1 min）。

3 結構鑒定

化合物1：無色油狀物；[α]20 D＋32.0° (0.05, MeOH)；HR-ESI-MS給出準分子離子峰/259.153 8 [M＋H]+（計算值為259.154 5）；結合1H-NMR和13C-NMR譜推測分子式為C13H22O5，不飽和度為3。通過1H-NMR譜數(shù)據(jù)（表1）可以判斷化合物1含有2個連氧次甲基質(zhì)子信號[H4.30 (1H, ddd,= 8.2, 5.5, 2.8 Hz) 和4.20 (1H, m)] 和1個甲氧基質(zhì)子信號[H3.65 (3H, s)]。13C-NMR結合DEPT圖譜顯示13個碳信號，包括2個酯羰基碳信號(C176.0和178.1)、2個連氧碳信號(C89.8和72.2) 和1個甲氧基碳信號(C51.9)，此外還可以觀察到8個亞甲基碳信號(C38.1, 34.7, 33.8, 30.1×2, 30.0, 26.4, 25.9)。經(jīng)文獻查閱，發(fā)現(xiàn)化合物1與文獻中已知化合物sorcomic acid[11]的核磁數(shù)據(jù)非常相似，其1D-NMR主要差異在于化合物1中多出1組甲氧基碳信號，并且C-1的位移值略微向高場區(qū)移動。這提示化合物1可能是sorcomic acid羧基上的羥基被甲氧基取代形成酯而得到的。這一推論被化合物1的分子式（C13H22O5）及其二維相關譜（圖1）所證實。

表1 化合物1的1H-NMR (600 MHz, CD3OD) 和13C-NMR (150 MHz, CD3OD)數(shù)據(jù)

在化合物1的HMBC譜中，H-OCH3（H3.65）與C-1（C176.0）間存在明顯相關，證實甲氧基與C-1相連?；衔?的相對構型可通過NOESY實驗確定。在NOESY相關譜中可明顯觀察到H-11α和H-9、H-11β和H-10、H-10和H-8間存在相關信號，表明H-9和H-10間是反式構型?；衔?的絕對構型則通過與已知化合物sorcomic acid比對旋光度值來確定。已知化合物sorcomic acid的旋光度值為[α]25 D＋28.0° (0.35, MeOH)，化合物1的旋光度值為[α]20 D＋32.0° (0.05, MeOH)，因此確定化合物1的絕對構型與sorcomic acid一致，即為9,10。綜上所述，確定了化合物1的結構如圖1所示，經(jīng)檢索其為新化合物，命名為胡桃酸酯A。

圖1 化合物1的結構及關鍵1H-1H COSY (粗線)和HMBC (箭頭)相關

化合物2：無色油狀物；[α]20 D＋9.0° (0.1, MeOH)；HR-ESI-MS/：577.394 8 [2M＋H]+（計算值為577.395 2），同時結合1H-NMR、13C-NMR和DEPT譜推測其分子式為C15H28O5，不飽和度為2。1H-NMR譜數(shù)據(jù)（表2）中顯示化合物2含有1組烯烴質(zhì)子信號[H5.70 (1H, overlapped), 5.71 (1H, overlapped)]，3個連氧次甲基質(zhì)子信號[H4.07 (1H, q,= 6.3 Hz)、3.91 (1H, t,= 5.5 Hz) 和3.41 (1H, m)]、1個甲氧基質(zhì)子信號[H3.65 (3H, s)]、1個甲基質(zhì)子信號[H0.91 (3H, s)] 以及信號嚴重重疊的亞甲基質(zhì)子信號。13C-NMR結合DEPT圖譜顯示15個碳信號，包括1個酯羰基碳信號(C175.8)、1組烯碳信號(C136.2和131.4)、3個連氧碳信號(C76.5、75.7和72.6)、1個甲氧基碳信號(C52.0) 和1個甲基碳信號(C14.4)，此外還可以觀察到7個亞甲基碳信號(C37.6, 34.6, 33.6, 33.1, 26.6, 23.7, 22.7)。

在化合物2的HMBC譜中，可以清晰地看到H-OCH3(H3.65) 與C-1 (C175.8) 信號呈遠程相關，由此可以確定甲氧基連接在C-1位上。此外，可以通過NOESY譜確定出C6-C7間雙鍵為反式構型[12]。經(jīng)過上述分析并結合不飽和度值推測化合物2為鏈式脂肪酸酯類化合物，平面結構為()-5,8,9-三羥基-6-十四烯酸甲酯，這一推論可以通過HSQC、1H-1H COSY和HMBC相關譜進行驗證，如圖2所示。通過查閱文獻發(fā)現(xiàn)，化合物2中C-5和C-8的絕對構型可以根據(jù)H-6和H-7在1H-NMR中的偶合模式進行推測。當C-5和C-8的絕對構型一致時，即為5, 8或5, 8，則H-6和H-7的化學位移值非常相近；當C-5和C-8的絕對構型相反時，即為5, 8或5, 8則H-6和H-7的化學位移值相隔較遠[11]。在化合物2中，H-6和H-7的化學位移幾乎重疊，因此推測C-5和C-8的絕對構型為5, 8或5, 8。化合物2絕對構型的確定由于缺少直接證據(jù)加之其量較少，因此還有待于進一步測定。綜上所述，確定了化合物2的結構如圖2所示，經(jīng)檢索其為新化合物，命名為胡桃酸酯B。

表2 化合物2的1H-NMR (600 MHz, CD3OD) 和13C-NMR (150 MHz, CD3OD)數(shù)據(jù)

圖2 化合物2的結構及關鍵1H-1H COSY (粗線) 和HMBC (箭頭)相關

化合物3：無色油狀物，ESI-MS/: 329.3 [M－H]?。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.74～5.66 (2H, m, H-10, 11), 4.06 (1H, q,= 6.2 Hz, H-9), 3.91 (1H, t,= 5.7 Hz, H-12), 3.42 (1H, m, H-13), 2.28 (2H, t,= 7.4 Hz, H-2), 1.64～1.58 (2H, m, H-3), 1.53 (2H, m, H-8), 1.34 (16H, m, H-4～7, 14～17), 0.91 (3H, t,= 6.9 Hz, H-18)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 178.2 (C-1), 136.5 (C-11), 131.1 (C-10), 76.5 (C-12), 75.8 (C-13), 73.0 (C-9), 38.2 (C-8), 35.3 (C-2), 33.6 (C-14), 33.1 (C-16), 30.4, 30.3, 30.2 (C-4 or C-5 or C-6), 26.6 (C-15), 26.4 (C-7), 26.2 (C-3), 23.7 (C-17), 14.4 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[13]，故鑒定化合物3為pinellic acid。

化合物4：白色無定形粉末，ESI-MS/: 353.2 [M＋Na]+，[α]22 D?8.3 (1.0, MeOH)。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)：5.57～5.50 (2H, m, H-9, 10), 4.59 (1H, dd,= 8.2, 3.9 Hz, H-11), 3.58 (1H, m, H-13), 3.25 (1H, dd,= 6.4, 3.9 Hz, H-12), 2.27 (2H, t,= 7.4 Hz, H-2), 2.18～2.07 (2H, m, H-8), 1.59～1.50 (4H, m, H-4, 14a, 15a), 1.47～1.27 (14H, m, H-3, 5～7, 14b, 15b, 16, 17), 0.92 (3H, t,= 7.0 Hz, H-18)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 178.0 (C-1), 133.3 (C-10), 130.9 (C-9), 78.9 (C-12), 72.7 (C-13), 67.9 (C-11), 35.2 (C-2), 33.8 (C-14), 33.2 (C-16), 30.7 (C-7), 30.3 (C-5, 6), 30.2 (C-3), 28.8 (C-8), 26.6 (C-15), 26.2 (C-4), 23.8 (C-17), 14.4 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[14]，故鑒定化合物4為()-11,12,13-trihydroxy-9-octadecenoate。

化合物5：無色油狀物，ESI-MS/: 329.2 [M＋H]+，[α]22 D?15.0 (1.0, MeOH)。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 5.76～5.70 (2H, m, H-10, 11), 5.49～5.43 (2H, m, H-15, 16), 4.06 (1H, m, H-9), 3.96 (1H, t,= 5.3 Hz, H-12), 3.46 (1H, m, H-13), 2.32～2.28 (2H, m, H-3), 2.28 (2H, t,= 7.2 Hz, H-2), 2.12～2.07 (1H, m, H-14), 2.07 (1H, m, H-17), 1.60 (2H, m, H-7), 1.47～1.35 (1H, m, H-8), 1.34 (6H, m, H-4～6), 0.97 (3H, t,= 7.6 Hz, H-18)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 177.8 (C-1), 136.5 (C-10), 134.3 (C-16), 131.1 (C-11), 126.4 (C-15), 75.9 (C-13), 75.8 (C-12), 73.0 (C-9), 38.3 (C-8), 35.2 (C-2), 31.5 (C-14), 30.6 (C-4), 30.5 (C-5), 30.2 (C-6), 26.5 (C-7), 26.2 (C-3), 21.7 (C-17), 14.6 (C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[15]，故鑒定化合物5為9,12,13-trihydroxy- octadeca-10,15-dienoic acid。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Two new fatty acid esters from

TAN Jin-yan1, 2, LI Jian-li2, SU Qi-hui2, LI Hui2, CHENG Yan-gang1, 2, QIAO Yuan-biao1, 2, LI Qing-shan1, 2, WANG Ying-li1, 2

1.Shanxi Key Laboratory of Innovative Drug for the Treatment of Serious Diseases Basing on the Chronic Inflammation, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong 030619, China 2.Shanxi Modern Chinese Medicine Engineering Laboratory, Shanxi University of Chinese Medicine, Jinzhong 030619, China

Objective To study the chemical constituents from.Methods The chemical constitutes were isolated and purified by silica gel, ODS, preparative MPLC and preparative HPLC.Their structures were elucidated based on 1D-NMR, 2D-NMR, and HR-ESI-MS.Results Five fatty acids compounds were isolated and identified from.The structures of 1 and 2 were established and named juglans acid ester A (1) and juglans acid ester B (2), respectively.The other compounds were identified as pinellic acid (3), ()-11,12,13-trihydroxy-9-octadecenoate (4), and 9,12,13-trihydroxy-octadeca-10,15-dienoic acid (5).Conclusions Compounds 1 and 2 are new fatty acid esters.Compounds 3—5 are isolated fromfor the first time.

;L.; fatty acids; octadecanoic acid; juglans acid ester A; juglans acid ester B; 9,12,13-trihydroxy-octadeca-10,15-dienoic acid

R284.1

A

0253 - 2670(2022)05 - 1360 - 05

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.05.010

2022-01-05

山西省衛(wèi)生健康委科研項目（2020094）；基于炎性反應的重大疾病創(chuàng)新藥物山西省重點實驗室開放基金資助項目（2021sxcxyw10）；中央引導地方科技發(fā)展資金項目（YDZX20201400001518）

程艷剛（1992—），博士，研究方向為中藥及復方藥效物質(zhì)基礎。E-mail: 931313534@qq.com

通信作者：王穎莉（1967—），博士，教授，博士研究生導師，研究方向為中藥藥效物質(zhì)基礎。E-mail: wyltyut@163.com

李青山（1965—），博士，教授，博士研究生導師，研究方向為中藥與天然藥物藥效物質(zhì)基礎與作用機制。E-mail: sxlqs2012@163.com

#并列第一作者：李建麗（1997—），碩士研究生，研究方向為中藥及復方藥效物質(zhì)基礎。E-mail: lijianli1124ljl@163.com

[責任編輯 王文倩]