王建茹，彭廣操，朱明軍

河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，鄭州 450099

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的一種急危重表現(xiàn)，發(fā)病率和死亡率均較高。近年來，隨著人們生活方式的巨大變化，AMI 病例數(shù)量急劇增加，AMI 已成為我國居民住院和死亡的主要原因［1-2］。早期快速恢復(fù)冠狀動脈血流可減少心肌梗死的面積，隨著溶栓、經(jīng)皮冠狀動脈介入治療等再灌注策略的發(fā)展，AMI 的死亡率有所降低。但大量證據(jù)表明再灌注會引起心肌的繼發(fā)性損傷，其所造成的心肌損傷可占最終心肌梗死面積的50%，這種現(xiàn)象叫作心肌缺血再灌注損傷 （myocardium ischemia-reperfusion injury，MIRI）；MIRI 已成為AMI 經(jīng)介入或溶栓治療后最常見的臨床問題［3-4］。MIRI主要表現(xiàn)形式多樣，可進一步加重心臟結(jié)構(gòu)和功能的損傷，最終引起多種不良心血管結(jié)局［5-6］。MIRI 的發(fā)生發(fā)展過程涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、鈣超載、冠狀微循環(huán)障礙、免疫反應(yīng)、細胞死亡、長鏈非編碼RNAs 表達水平變化等，但其詳細的機制仍不清楚［7-9］。因此，積極探索MIRI 的分子機制，挖掘關(guān)鍵基因，對于MIRI的防治至關(guān)重要。

近年來，利用生物信息學(xué)技術(shù)對芯片基因表達數(shù)據(jù)進行挖掘已廣泛地用于分析與疾病相關(guān)的差異表達基因（differentially expressed genes，DEGs），尋找關(guān)鍵基因，篩選與疾病診斷、治療和預(yù)后相關(guān)的生物標志物等方面。DEGs有可能為探索MIRI病理過程的發(fā)展及防治提供有價值的線索?，F(xiàn)階段，研究人員可以從基因表達數(shù)據(jù)庫（gene expression omnibus，GEO）等渠道獲取芯片數(shù)據(jù)。但值得注意的是，在篩選DEGs 的過程中由于單項獨立研究有限的樣本數(shù)、樣本的異質(zhì)性、技術(shù)平臺的差異、數(shù)據(jù)異常值及分析處理方法不恰當?shù)纫蛩氐拇嬖?，研究結(jié)果可能出現(xiàn)一定的偏倚。目前，基于GEO 中基因表達芯片鑒定DEGs存在一些不足之處；因此，尋找更加有效的計算方法，可避免偏倚結(jié)果的出現(xiàn)，得到更加穩(wěn)健的結(jié)果。穩(wěn)健排序整合（robust rank aggregation，RRA）方法是一種可使多個數(shù)據(jù)集之間的偏差和誤差達到最小的標準方法，用于各種排序基因列表的比較，可有效避免上述問題［10］。RRA 基于每個基因是隨機排序的假設(shè)，如果一個基因在所有實驗中排名高，用RRA 計算所得P值越小，則其成為DEG 的可能性越大。RRA 已廣泛應(yīng)用于多種腫瘤和非腫瘤疾病的多數(shù)據(jù)集的綜合分析，并表現(xiàn)出了良好的效果。目前，尚沒有關(guān)于RRA整合多個數(shù)據(jù)集分析MIRI的報道。

綜上所述，本研究擬從GEO 數(shù)據(jù)庫中獲取小鼠GSE61592、GSE83472 和GSE160516 數(shù)據(jù)集，利用limma 包篩選各數(shù)據(jù)集中的DEGs，然后采用RRA整合分析3 個數(shù)據(jù)集的DEGs 篩選穩(wěn)健DEGs；一方面利用clusterProfiler 包對穩(wěn)健DEGs 進行基因本體論（gene ontology，GO）和京都基因與基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，另一方面利用String 數(shù)據(jù)庫構(gòu)建穩(wěn)健DEGs 的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（proteinprotein interaction，PPI） 網(wǎng)絡(luò)；利用MCODE 和cytoHubba 插件來篩選PPI 網(wǎng)絡(luò)中的子模塊和hub 基因，再利用clusterProfiler 包對最重要的子模塊基因和hub 基因進行GO 和KEGG 分析；最后，采用反轉(zhuǎn)錄- 定量聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptionquantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR） 技術(shù)檢測小鼠MIRI 模型中hub 基因的表達情況。本研究旨在進一步探索MIRI 病理過程中潛在的干預(yù)靶點和分子機制，為其治療提供新的策略和思路。

1 材料與方法

1.1 芯片數(shù)據(jù)的來源

本研究流程如圖1 所示。從GEO 數(shù)據(jù)庫中下載與小鼠MIRI相關(guān)的基因芯片數(shù)據(jù)集GSE61592［平臺ID 為GPL6887，假手術(shù)（sham）組3 例，MIRI 組3例］、GSE83472（平臺ID 為GPL6885，sham 組4 例，MIRI 組4 例）和GSE160516（平臺ID 為GPL23038，sham 組4 例，MIRI 組12 例），其中GSE83472 的樣本量信息是根據(jù)本次研究的需求提取的樣本數(shù)，3 個數(shù)據(jù)集檢測樣本均為心肌組織。

圖1 研究流程圖Fig 1 Flow chart of the study

1.2 數(shù)據(jù)預(yù)處理和DEGs的篩選

利用perl腳本對表達數(shù)據(jù)進行注釋，將探針矩陣轉(zhuǎn)化為基因矩陣；利用impute 包對缺失值進行填充；利用avereps 函數(shù)對基因?qū)?yīng)多個探針取均值；利用normalizeBetweenArrays 函數(shù)對數(shù)據(jù)進行矯正；若基因表達數(shù)值較大，則需轉(zhuǎn)換為以2 為底的對數(shù)。利用limma 包，以|log2差異倍數(shù)（fold change，F(xiàn)C）|＞1 和P＜0.05 為閾值對3 個數(shù)據(jù)集的表達數(shù)據(jù)進行差異分析，篩選DEGs。

1.3 RRA法整合分析芯片數(shù)據(jù)

利用RRA 包對獲得的DEGs 整合分析，按照|log2FC|＞1 和P＜0.05 為條件篩選穩(wěn)健DEGs；然后利用pheatmap 包分別將P值排序前20 的上調(diào)和下調(diào)基因進行可視化。

1.4 穩(wěn)健DEGs的功能富集分析

為了探究穩(wěn)健DEGs 可能的功能作用，利用clusterProfiler包對其進行GO和KEGG富集分析。

1.5 PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

將穩(wěn)健DEGs 上傳至STRING 數(shù)據(jù)庫，相互作用得分設(shè)置為最高置信度≥0.400，進行PPI 分析。利用Cytoscape3.7.2軟件對PPI網(wǎng)絡(luò)進行可視化。

1.6 模塊分析和hub基因的篩選

將PPI 信息導(dǎo)入Cytoscape3.7.2 軟件中，利用MCODE 插件并以默認參數(shù)（度截止=2，節(jié)點評分截止=0.2，最大深度=100，k 評分=2）為標準對PPI 網(wǎng)絡(luò)進行模塊分析，篩選最重要的子模塊。CytoHubba插件可以通過其包含的12種算法分別對PPI網(wǎng)絡(luò)中的每個節(jié)點（基因）賦予一定的分數(shù)，然后再依據(jù)基因得分將排序靠前的基因作為hub 基因。本研究的hub基因由12 種算法排序前100 的基因的重疊基因組成。然后，再利用clusterProfiler包對最重要的子模塊基因和hub基因進行GO和KEGG富集分析。

1.7 Hub基因的驗證

1.7.1 MIRI小鼠模型構(gòu)建 18 只6～8 周齡的C57BL/6 J雄性小鼠購于鄭州市惠濟區(qū)華興實驗動物養(yǎng)殖場，許可證號：SCXK-（豫）-2019-0002。實驗動物飼養(yǎng)于獨立通風籠盒動物房，自由飲食和飲水。本實驗已經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實驗動物福利倫理審查委員會批準（批準編號：YFYDW2020004）。小鼠被隨機分為sham 組和MIRI 組，每組9 只。戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射麻醉并固定小鼠后，手術(shù)區(qū)備皮，消毒，于左側(cè)第4、5 肋間切口，打開胸腔，撕開心包，輕壓胸廓擠出心臟；探查確定左心耳，于肺動脈圓錐與左心耳交界距離左心耳根部約3 mm 處結(jié)扎冠狀動脈左前降支，缺血30 min 后去除結(jié)扎線，關(guān)閉切口，縫合皮膚，24 h 后處死小鼠（即再灌注24 h）。Sham 組小鼠操作同MIRI 組小鼠，但不結(jié)扎冠狀動脈左前降支。

1.7.2 氯化三苯基四氮唑染色 再灌注24 h 后，迅速摘取心臟，用磷酸鹽緩沖液洗滌，從結(jié)扎線附近垂直于心臟長軸進行切片，將心臟平均切成5 片，然后置入2% 氯化三苯基四氮唑（triphenyl tetrazolium chloride，TTC）染色液（北京索萊寶科技有限公司）中37 ℃水浴15 min，結(jié)束后固定并拍照。TTC 染色后正常心肌組織呈紅色，梗死組織呈蒼白色。

1.7.3 RT-qPCR 各組小鼠取適量左心室組織（其中MIRI 組為心肌缺血危險區(qū)組織），加入TRIZOL（Invitrogen 公司，美國）進行裂解，振蕩混勻，冰上放置5 min；加入氯仿，振蕩靜置離心；將離心管內(nèi)的上清液轉(zhuǎn)移至另一干凈的EP 管中，加入異丙醇，振蕩靜置離心；去上清液，加入75%乙醇洗滌RNA，離心后吸掉多余液體，自然控干RNA；用無RNase水溶解RNA，輕輕吹打助溶，4 ℃靜置10 min；用核酸蛋白濃度微量測定儀（Thermo Fisher 公司，美國）測RNA 濃度。按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TOYOBO 公司，日本）說明書合成cDNA；按照2×Universal SYBR Green Fast qPCR Mix試劑（ABclonal公司，中國）的說明書配制反應(yīng)液，在TL-988 熒光定量PCR 儀（西安天隆科技有限公司）上進行RT-qPCR；應(yīng)用2-ΔΔCT對基因進行相對定量分析。引物由蘇州金唯智生物科技有限公司合成（序列見表1）。PCR 反應(yīng)條件：95 ℃3 min預(yù)變性，95 ℃5 s變性，60 ℃34 s退火延伸，共45 個循環(huán)。采用SPSS 21.0 軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析，數(shù)據(jù)以±s表示，2組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 RT-qPCR引物序列Tab 1 Primer sequences for RT-qPCR

Continued Tab

2 結(jié)果

2.1 GEO數(shù)據(jù)集預(yù)處理和DEGs的篩選

差異分析結(jié)果顯示，GSE61592 篩選出1 684 個DEGs，其中上調(diào)的832個，下調(diào)的852個；GSE83472篩選出55 個DEGs，其中上調(diào)的51 個，下調(diào)的4 個；GSE160516篩選出1 061個DEGs，其中上調(diào)的733個，下調(diào)的328個。圖2為3個數(shù)據(jù)集的火山圖。

圖2 各數(shù)據(jù)集的火山圖Fig 2 Volcano plots for each data set

2.2 RRA法篩選穩(wěn)健DEGs

RRA 方法對3 個數(shù)據(jù)集進行了整合分析后，共鑒定出294 個穩(wěn)健DEGs，其中上調(diào)的209 個，下調(diào)的85 個。圖3 為P值排序前20 個上調(diào)和下調(diào)穩(wěn)健DEGs 的熱圖。

圖3 前20個上調(diào)和下調(diào)穩(wěn)健DEGs的熱圖Fig 3 Heat map of the top 20 up-and down-regulated robust DEGs

2.3 穩(wěn)健DEGs的功能富集分析

利用clusterProfiler 包、org.Mm.eg.db 包將篩選出的294 個穩(wěn)健DEGs 進行功能富集分析，如圖4所示。GO 分析結(jié)果顯示，依據(jù)P＜0.05 確定了949個GO 條目；生物學(xué)過程（biological process，BP）條目為867 條，主要涉及細胞的遷移、趨化作用、對外界刺激反應(yīng)的正性調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子超家族細胞因子的產(chǎn)生、細胞因子介導(dǎo)的信號通路等；分子功能（molecular function，MF）條目為62 條，主要涉及受體配體活性、細胞因子受體結(jié)合、細胞因子活性、趨化因子活性、細胞因子受體活性、Toll 樣受體結(jié)合等；細胞組分條目（cellular component，CC）為20 條，主要涉及細胞外基質(zhì)、線粒體外膜、肌質(zhì)網(wǎng)、溶酶體等。KEGG分析結(jié)果顯示，依據(jù)P＜0.05 共映射出5 條信號通路，包括細胞因子受體相互作用、病毒蛋白與細胞因子及細胞因子受體的相互作用、阿米巴病、白介素-17 和核因子κB （nuclear factor kappa B，NF-κB）信號通路。

圖4 穩(wěn)健DEGs的功能富集分析Fig 4 Functional enrichment analysis of robust DEGs

2.4 穩(wěn)健DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和模塊分析

利用STRING 數(shù)據(jù)庫對篩選得到的穩(wěn)健DEGs 構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)（圖5A）。該網(wǎng)絡(luò)包括1 248 條邊和239 個節(jié)點，其中上調(diào)的174個，下調(diào)的65個。模塊分析共篩選出14 個子模塊，其中模塊1 最重要（圖5B）。模塊1 中的穩(wěn)健DEGs 主要富集在急性炎癥反應(yīng)、炎性細胞的遷移、細胞趨化、細胞黏附分子結(jié)合、趨化因子受體活性、病毒蛋白與細胞因子及細胞因子受體的相互作用、NF-κB 信號通路、趨化因子信號通路等（圖5C、D）。

圖5 穩(wěn)健DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和模塊分析Fig 5 PPI network construction and modular analysis of robust DEGs

2.5 Hub基因的篩選

共獲得17 個hub 基因（圖6A、B），相關(guān)信息詳見表2。功能富集分析的結(jié)果顯示，17 個hub 基因主要富集在白細胞和中心粒細胞的遷移、淋巴細胞趨化性、對外界刺激反應(yīng)的正性調(diào)節(jié)、趨化因子的活性、趨化因子受體結(jié)合、細胞因子受體結(jié)合等功能；涉及病毒蛋白與細胞因子及細胞因子受體的相互作用、細胞因子受體相互作用、趨化因子信號通路、NF-κB信號通路等通路（圖6C、D）。

表2 Hub基因的相關(guān)信息Tab 2 Information about the hub genes

圖6 Hub基因的篩選及其功能富集分析Fig 6 Screening of hub genes and analysis of their functional enrichment

2.6 Hub基因的驗證

由圖7A 可知，與sham 組相比，MIRI 組小鼠經(jīng)過缺血再灌注處理后，心肌明顯出現(xiàn)了梗死，說明MIRI 模型構(gòu)建成功。如圖7B 所示，與sham 組相比，MIRI 組小鼠心肌趨化因子（C-C 基序） 配體4［chemokine（C-C motif） ligand 4，Ccl4］、Ccl6、Ccl7、趨化因子（C-X-C 基序）受體4［chemokine（C-X-C motif） receptor 4，Cxcr4］、趨化因子（C-C基序） 受體2 ［chemokine（C-C motif）receptor 2，Ccr2］、信號調(diào)節(jié)蛋白β1（signal-regulatory protein β 1，Sirpb1）、低親和力免疫球蛋白γ Fc 區(qū)受體Ⅱb（low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor Ⅱb，F(xiàn)cgr2b）、白細胞表面抗原Cd53（leukocyte surface antigen CD53，Cd53）、花生四烯酸5-脂氧合酶激活蛋白（arachidonate 5-lipoxygenase activating protein，Alox5ap）、髓樣分化初級反應(yīng)基因88（myeloid differentiation primary response gene 88，Myd88）、巨噬細胞清道夫受體1 （macrophage scavenger receptor 1，Msr1）、 基質(zhì)金屬肽酶14（matrix metallopeptidase 14，Mmp14）、髓樣細胞上表達的觸發(fā)受體2 （triggering receptor expressed on myeloid cells 2，Trem2）、樁蛋白（leupaxin，Lpxn）的mRNA 表達量均上調(diào)，而低親和力免疫球蛋白γ Fc 區(qū)受體Ⅲ（low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor Ⅲ，F(xiàn)cgr3）、補體C1q亞組分亞單位B（complement C1q subcomponent subunit B，C1qb）、去整合素和含金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域蛋白（a disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 8，Adam8）的mRNA表達未見明顯的差異。回顧文獻發(fā)現(xiàn)，目前僅Fcgr3、C1qb、Trem2、Lpxn、Cd53、Alox5ap、Sirpb1、Fcgr2b在MIRI 與正常組織中的差異表達未被報道。

圖7 Hub基因的驗證Fig 7 Validation of the hub genes

3 結(jié)論

本研究結(jié)合微陣列基因表達譜和生物信息學(xué)方法，探索了MIRI 病理過程中可能的新的核心基因及其潛在的分子機制。研究首先利用limma 包對小鼠GSE61592、GSE83472 和GSE160516 數(shù)據(jù)集中的DEGs 進行了篩選。其次，利用RRA 法對DEGs 進行合并分析，共鑒定出209 個上調(diào)和85 個下調(diào)穩(wěn)健DEGs。然后，對穩(wěn)健DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)進行功能模塊分析，共發(fā)現(xiàn)14 個子模塊，其中模塊1 最重要；同時，鑒定出了17個hub基因，而且這些基因大部分都在模塊1 中。最后，本文對穩(wěn)健DEGs、模塊1 中的基因和17個hub基因分別進行了功能富集分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些基因大都是通過調(diào)控炎性細胞的遷移、趨化因子和細胞因子及其受體活性、細胞因子受體相互作用、趨化因子信號通路、Toll 樣受體信號通路、NFκB 信號通路等生物學(xué)功能和通路，來介導(dǎo)MIRI的病理過程。眾所周知，MIRI 是一個復(fù)雜的事件，涉及炎癥細胞（如中性粒細胞、單核/巨噬細胞、淋巴細胞） 和關(guān)鍵激活信號（如細胞因子、趨化因子）等［11］。研究報道，炎癥信號通路Toll 樣受體和NFκB 信號通路以及兩者之間的交互作用可加劇MIRI的嚴重程度［12-14］。此外，MIRI可強化趨化因子的表達，這些趨化因子可誘導(dǎo)炎性細胞的活化和浸潤，進而進一步產(chǎn)生強烈的炎癥反應(yīng)，而抑制趨化因子可促進損傷心肌的愈合［11，15］。以上相關(guān)文獻的報道從側(cè)面證實了本研究富集分析結(jié)果的科學(xué)性。

為了進一步確證生物信息學(xué)分析預(yù)測的結(jié)果，本研究構(gòu)建了小鼠MIRI 模型并用RT-qPCR 方法檢測了17 個hub 基因mRNA 的表達情況。結(jié)果顯示，在MIRI 過程中Ccl7、Sirpb1、Fcgr2b、Cxcr4、Cd53、Alox5ap、Ccl6、Myd88、Msr1、Ccl4、Mmp14、Ccr2、Trem2、Lpxn的表達上調(diào)，而Fcgr3、C1qb、Adam8未見明顯差異。既往其他研究也證實了在MIRI 的過程中Ccl7、Cxcr4、Ccl6、Myd88、Ccl4、Msr1、Ccr2、Mmp14的表達上調(diào)［16-22］，這與本研究的結(jié)果吻合，從側(cè)面佐證了本研究結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。Adam8參與了MIRI 的病理過程，但在再灌注0.5 h 和24 h 時其表達并沒有增加，48 h 后才明顯增加［23］。目前，F(xiàn)cgr3、C1qb、Trem2、Lpxn、Cd53、Alox5ap、Sirpb1、Fcgr2b在MIRI中的差異表達情況，均未被其他研究報道；但Fcgr3和C1qb在本研究中的生物信息學(xué)分析預(yù)測結(jié)果與動物實驗的驗證結(jié)果不一致。綜上所述，Trem2、Lpxn、Cd53、Alox5ap、Sirpb1、Fcgr2b這6 個hub 基因的高表達在MIRI 中發(fā)揮著重要作用，將有助于闡釋MIRI可能的分子機制。

Alox5ap位于染色體13q12-13，與心肌梗死、動脈粥樣硬化等心血管疾病的易感性密切相關(guān)，其編碼的5-脂氧合酶激活蛋白，可將花生四烯酸催化為白三烯，進而參與炎癥反應(yīng)介導(dǎo)多種心血管疾?。?4］。Fcgr2b作為唯一的抑制性Fc 受體，在調(diào)控炎癥和免疫方面發(fā)揮著重要作用，與自身免疫性疾病的易感性密切相關(guān)［25］。Fcgr2b廣泛表達于巨噬細胞、樹突狀細胞等免疫細胞，可抑制激活FcγRs誘導(dǎo)的吞噬前信號，進而抑制吞噬作用［25］。研究［26］顯示，高效的吞噬作用可以及時清除MIRI過程中凋亡的心肌細胞，否則，將引起炎癥反應(yīng)、細胞進一步凋亡等后續(xù)損傷。因此，F(xiàn)cgr2b可能通過調(diào)控吞噬作用來參與MIRI的病理過程。Trem2為免疫球蛋白超家族受體的成員，在小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、髓系細胞等細胞中表達，可與相對分子質(zhì)量為12 000的跨膜免疫接頭DNAX 激活蛋白（DNAX-activating protein of 12 kDa，DAP12）的酷氨酸活化基序結(jié)合，通過激活下游信號通路，在免疫炎癥等反應(yīng)中發(fā)揮作用［27-30］。Trem2已被報道通過調(diào)控細胞焦亡及凋亡、炎癥反應(yīng)等，參與了腦、肝、腎、肺缺血再灌注損傷的病理過程［27-30］。由于各器官缺血再灌注存在相似的病理生理過程，因此Trem2可能也介導(dǎo)了MIRI。研究［31-32］顯示，B 細胞被募集到了MIRI 的心肌組織，其加劇MIRI 的機制可能與其分泌IgM 進而激活補體系統(tǒng)和炎性細胞有關(guān)；同時，被募集到MIRI 心肌組織的還有T 細胞尤其是CD4+T 細胞，其主要表現(xiàn)為Th1 促炎癥表型，通過釋放γ 干擾素等，加劇MIRI。Cd53為四次穿膜蛋白（tetraspanin）超家族的成員，高表達于T 細胞、B 細胞等免疫細胞表面，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用，主要表現(xiàn)為調(diào)控免疫細胞的黏附、遷移、增殖、活化以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等［33］。Lpxn是樁蛋白（paxillin）家族的成員，表達于白細胞細胞系、B 細胞等細胞，可調(diào)控整合素的活性，在B 細胞免疫反應(yīng)中發(fā)揮著不可或缺的作用［34］。Sirpb1是免疫球蛋白超家族的信號調(diào)節(jié)蛋白成員，胞內(nèi)段缺乏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基序，但可通過與DAP12結(jié)合，轉(zhuǎn)導(dǎo)活化信號，參與細胞增殖、分化、免疫功能等［35］。值得注意的是，Sirpb1與B 細胞受體通路相關(guān)，參與了B 細胞的增殖［36］。也就是說，Cd53、Lpxn、Sirpb1可能通過調(diào)控免疫機制來介導(dǎo)MIRI 的病理過程。綜上所述，我們尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)這6 個hub 基因在MIRI 中作用的相關(guān)報道，但回顧文獻的結(jié)果提示這些hub 基因表現(xiàn)出了介導(dǎo)MIRI 病理過程的可能性，為探索它們在MIRI 中的作用機制提供了一定的依據(jù)。

本研究運用生物信息學(xué)的方法發(fā)現(xiàn)了在小鼠MIRI 過程中的一些hub 基因，但仍有一些局限性。雖運用RRA 法分析了多個數(shù)據(jù)集，但由于基因芯片數(shù)據(jù)的可獲得性有限以及每個數(shù)據(jù)集中滿足研究條件的樣本較少，最終導(dǎo)致本研究納入的樣本量有限。生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果雖進行了實驗驗證，但由于種屬的差異，結(jié)果仍需要進一步在臨床實踐過程中進行佐證?？傊?，本研究利用基因表達譜和生物信息學(xué)相結(jié)合的方法共挖掘出17個hub基因，通過回顧既往文獻和實驗驗證后共鑒定出6個潛在的hub基因（Fcgr2b、Alox5ap、Trem2、Sirpb1、Cd53、Lpxn），研究結(jié)果可為進一步探討MIRI 的分子機制和治療靶點提供新的思路和切入點。