高飛，王百龍，李高燕，周鳳琴，王長云，孫稚穎

（1.山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南 250355；2.山東新時代藥業(yè)有限公司，山東 臨沂 273400；3.濰坊市第二人民醫(yī)院，山東 濰坊 261041；4.中國海洋大學，山東 青島 266100）

鯧為硬骨魚綱鱸形目（Perciformes）鯧科（Stromateidae）鯧屬（Pampus）魚類，蛋白質含量較高（16.8%），含有人體必需的8 種氨基酸[1]，營養(yǎng)豐富，富含鈣、磷、VD、VA、VB1、VPP等營養(yǎng)元素。歷代本草中收集的鯧藥材為鯧科（Stromateidae）銀鯧（Pampus argenteus Euphrasen）、中國鯧（P.chinensis Euphrasen）、灰鯧（P.cinereus Bloch）、長鯧科（Centrolophidae）刺鯧（Psenopsis anomala Temminck et Schlegel）的肉或全體。鯧性味甘、平，歸脾、胃、腎經，具有補血、健胃、益氣之功效。臨床上常用于脾胃虛弱、氣血不足等癥的治療。

傅里葉變換紅外光譜法具有簡單、快速、無損、分析成本低、樣品不需特別的預處理和不使用有毒試劑等優(yōu)點，廣泛用于中藥材的鑒別、道地識別和指紋圖譜等[2]。目前，對鯧的研究主要集中在鯧的養(yǎng)殖[3-7]和化學成分研究[8-10]等方面，而對于鯧種類的紅外光譜鑒別研究較少。本實驗采用紅外光譜的三級鑒定法對不同種類鯧藥材進行了系統鑒定研究，以實現不同種類鯧藥材的快速鑒定，為其生藥研究提供新資料。

1 材料與方法

1.1 樣品來源與制備

實驗材料分別購自山東青島和煙臺兩市，經山東中醫(yī)藥大學周鳳琴教授和中國海洋大學馬琳老師鑒定，所收集的商品藥材和采集的藥材樣品如表1 所示。取上述樣品背脊肉，置于烘箱內50℃干燥后，均勻研磨粉碎，過200 目篩，得到原藥材粉末。

表1 鯧樣品來源Tab.1 Source sof pomfret samples

試劑：溴化鉀晶體（分析純）。

1.2 儀器與測試條件

傅里葉變換紅外光譜儀（Spectrum One 型，PerkinElmer 公司）：DTGS 檢測器，分辨率設置為4 cm-1，測量范圍設置為4 000～400 cm-1，掃描信號累加16 次，OPD 速度為0.2 cm-1/S，掃描時實時扣除CO2和水的干擾。

1.3 方法

方法參見陳新璐等[11]。

2 結果與分析

2.1 鯧藥材的紅外光譜三級鑒定分析

2.1.1 鯧藥材的一維紅外譜圖分析

在4 000～400 cm-1波段4 種鯧藥材粉末指紋區(qū)的紅外譜圖見圖1。

圖1 鯧藥材粉末的一維紅外光譜圖Fig.1 One-dimensional infrared spectrum of pomfret medicinal powder

由圖1 可知，鯧藥材的紅外譜圖整體上比較接近，根據查閱文獻可判定鯧藥材粉末各吸收峰官能團振動方式及主要歸屬，如表2 所列。

由圖1 和表2 可知，銀鯧在1 657 cm-1、1 534 cm-1處；中國鯧在1 658 cm-1、1 530 cm-1處；灰鯧在1 658 cm-1、1 533 cm-1處；長鯧科刺鯧在1 657 cm-1、1 635 cm-1處酰胺Ⅰ帶和酰胺Ⅱ帶的特征峰明顯，這四種鯧均含有豐富的蛋白質，銀鯧在3 291 cm-1、1 236 cm-1處，中國鯧在3 293 cm-1、1 238 cm-1處，灰鯧在3 294 cm-1、1 236 cm-1處，長鯧科刺鯧在3 290 cm-1、1 234 cm-1處有明顯的特征峰，表明4 種鯧有不飽和脂肪酸和甾體。不同來源的鯧藥材也分別具有不同的特征峰。銀鯧在3 078 cm-1處具有較弱吸收峰，區(qū)別于其他三種鯧魚藥材；長鯧科刺鯧在3 012 cm-1處具有較弱吸收峰，可區(qū)別于其他三種鯧藥材；灰鯧在669 cm-1以及464 cm-1處具有兩個較弱吸收峰，可以區(qū)別于其他三種鯧藥材。

表2 鯧藥材粉末紅外吸收峰歸屬Tab.2 Attribution of infrared absorption peaks of pomfret medicinal powder

2.1.2 鯧藥材二階導數譜圖分析

在1 800～1 700 cm-1波段4 種鯧藥材粉末的二階導數圖譜見圖2。

圖2 鯧藥材粉末二階導數圖譜（1 800～1 700 cm-1）Fig.2 The second derivative spectrum of pomfret medicinal powder（1 800～1 700 cm-1）

由表3 可知：四種不同來源的鯧藥材粉末的二階導數圖譜均在1 759 cm-1、1 732 cm-1處具有明顯的吸收峰，且峰強：刺鯧＞中國鯧＞銀鯧＞灰鯧。每一種來源的鯧藥材都有其特定峰。

表3 鯧藥材粉末二階導數圖譜特征峰（1 800～1 700 cm-1）Tab.3 Characteristic peaks of the second derivative spectrum of pomfret medicinal powder（1800～1700 cm-1）

2.1.3 鯧藥材二維相關光譜分析4 種鯧藥材粉末在1 800～1 700 cm-1波段范圍內的二維相關圖譜見圖3。

由圖3 可知，在1 800～1 700 cm-1波段范圍內，四種來源的鯧藥材在自動峰數目以及出現的位置上存在一定的差異。銀鯧具有5 個較明顯的自動峰，分別在1 703 cm-1、1 720 cm-1、1 738 cm-1、1 752 cm-1和1 780 cm-1處，強度最大的自動峰出現在1 703 cm-1處，強度最小的自動峰出現在1 780 cm-1處。中國鯧也具有5 個較明顯的自動峰，分別在1 703 cm-1、1 720 cm-1、1 730 cm-1、1 738 cm-1和1 752 cm-1處，強度最大的自動峰出現在1 730 cm-1和1 738 cm-1處，強度最小的自動峰出現在1 703 cm-1處?；姻K則具有7 個較明顯的自動峰，分別在1 703 cm-1、1 720 cm-1、1 738 cm-1、1 760 cm-1、1 770 cm-1、1 780 cm-1和1 790 cm-1處，其中強度最大的自動峰出現在1 703 cm-1處，強度最小的自動峰出現在1 790 cm-1處。刺鯧只有4 個較明顯的自動峰出現，分別在1 703 cm-1、1 738 cm-1、1 760 cm-1和1 765 cm-1處，其中強度最大的自動峰出現在1 738 cm-1處，強度最小的自動峰出現在1 765 cm-1處。

圖3 鯧藥材粉末的二維相關譜圖（1 800～1 700 cm-1）Fig.3 Two-dimensional correlation spectrum of pomfret medicinal powder（1 800～1 700 cm-1）

3 討論

目前有關傅里葉變換光譜法在海洋魚類藥材鑒定中的應用較少，多應用于其他方面。LITIPIJIANG 等[12]利用紅外光譜法鑒定分析了百癬夏塔熱片的化學成分；黃冬蘭等[13]建立以紅外三級鑒定與聚類分析法快速鑒別了黨參藥材；方智文等[14]試驗表明：紅外三級鑒定法可以對栽培與野生春、冬天麻進行快速、無損、簡便的分析與鑒定。

線粒體DNA 細胞色素C 基因常被用作魚類種屬鑒定。線粒體COⅢ作為一種蛋白質編碼基因具有種間差異大、種內相對保守的特征，在物種鑒定中具有一定的優(yōu)勢。劉軍等[15]研究了金鯧、銀鯧和中間低鰭鯧的線粒體COⅢ基因，以其為DNA 條形碼并運用復合PCR 的手段成功區(qū)分了所選的金鯧、銀鯧和刺鯧3 種鯧，并通過擴增鯧科和鲹科的魚類的COⅢ基因并測序。經形態(tài)學鑒定，確定所選刺鯧實為中間低鰭鯧，同時獲得了中間低鰭鯧COⅢ基因全序列及ATP6 基因部分序列。

本實驗采用紅外光譜分析方法對比研究了不同來源的鯧，發(fā)現了不同來源的鯧藥材共有的指紋峰以及區(qū)別點。不同來源鯧藥材粉末的一維圖譜差異較小，相似度較高，通過一維圖譜不易區(qū)分。通過對其一維圖譜上的峰位置進行歸類可知，其含有大量的蛋白質、脂質化合物等成分。在1 800～1 700 cm-1波段內的二階導數圖譜中，不同來源的鯧藥材粉末更容易進行區(qū)分；不同種類的鯧藥材峰的位置、強度有差異。在1 800～1 700 cm-1波段內的二維圖譜分析表明，不同來源的鯧藥材的差異最為明顯，可以根據較明顯的自動峰的數量、位置以及自動峰的強度，快速有效鑒別對不同來源的鯧藥材。綜上分析，紅外三級鑒定法可用于鑒定不同種類的鯧藥材，為其他海洋藥物的鑒定研究提供了新的思路。