展建麗，姜 珊，陳穆芝，田樹革

（1.新疆師范大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，新疆 烏魯木齊830017；2.新疆醫(yī)科大學(xué) 中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊830011；3.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，浙江 杭州310005）

草木犀是一年生或兩年生草木犀屬植物，《藏藥標(biāo)準(zhǔn)》、《歐洲藥典（第5 部）》中均記載草木犀為豆科植物黃花草木犀[Melilotusofficinalis（Linn.）Pall.]，又被稱作野苜蓿，辟漢草。黃花草木犀是草木犀的一種，大多生長(zhǎng)在我國(guó)西北、華南、東北等地，其具有重要的農(nóng)用價(jià)值和藥用價(jià)值。在農(nóng)用方面，黃花草木犀耐鹽堿，耐旱，抗寒，抗風(fēng)沙，貧瘠地方也能生長(zhǎng)，生命力非常頑強(qiáng)[1]，在國(guó)內(nèi)早期黃花草木犀大多作為飼料和肥料使用，它的根系極其發(fā)達(dá)，與大豆植物相似，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與大豆類似，是牧民首選的飼料[2]。在藥用方面，黃花草木犀其性味苦、涼，具有清熱解毒、消炎、抗炎、鎮(zhèn)痛、抑菌、抗腫瘤、改變急性腦缺血等藥效[3,4]，用于脾臟病、絞腸痧、白喉、乳蛾等治療[5]，在國(guó)外其藥用價(jià)值得到較好的開發(fā)。日本開發(fā)的草木犀流浸片（香豆素酸）已上市使用，黃花草木犀的藥用價(jià)值有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。

黃花草木犀在實(shí)際使用過(guò)程中大多考慮活性成分，無(wú)機(jī)陰離子很少被考慮，但無(wú)機(jī)陰離子在中藥考察中也很重要。Cl-能調(diào)節(jié)植物氣孔，維持植物體內(nèi)pH 平衡，使植物健康生長(zhǎng)，NO-3為植物提供氮元素，是蛋白質(zhì)合成的必要元素，SO24-對(duì)植物體內(nèi)的微生物有抑制作用，為全面分析藥品，分析測(cè)定無(wú)機(jī)陰離子可以為全面考察藥材的質(zhì)量?jī)r(jià)值提供參考。如用離子色譜法測(cè)植物、藥品和肉制品中的無(wú)機(jī)陰離子[6-8]。采用離子色譜法快速、便捷、并可同時(shí)檢測(cè)多種陰離子，適用于批量較多的樣品檢測(cè)，為離子檢測(cè)工作節(jié)省大量時(shí)間。

本實(shí)驗(yàn)采用超聲法提取黃花草木犀，用離子色譜法對(duì)全草、莖、葉、花4 個(gè)不同生長(zhǎng)部位同時(shí)進(jìn)行陰離子測(cè)定，為黃花草木犀的開發(fā)提供基礎(chǔ)研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

DIONEX ASI 型離子色譜儀（賽默飛世爾（上海） 儀器有限公司）；DIONEX AS22 型離子色譜柱；ME204E 型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；KQ5200DE 型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

去離子水，KNO3、K2SO4以及KCl 試劑均為分析純。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

參照國(guó)標(biāo)HJ84-2016，準(zhǔn)確稱取1.6485g NaCl、1.4792g 無(wú)水Na2SO4、1.6304g KNO3分別溶于水中，分別移入1000mL 容量瓶，用水稀釋定容至標(biāo)線，混勻。移轉(zhuǎn)入聚乙烯瓶中貯存。精確移取100mL NaNO3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、200mL K2SO4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、200mL KCl標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于1000mL 聚四氟乙烯容量瓶中，加水定容至刻度線，配制100mg·L-1的NO-3、200mg·L-1的SO24-、200mg·L-1的Cl-的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液；準(zhǔn)確移取1.00、2.00、5.00、10.0、20.0mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液至100mL 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的Cl-系列溶液；準(zhǔn)確移取0.50、1.00、2.50、5.0、10.0mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液至100mL 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的NO-3系列溶液；準(zhǔn)確移取0.50、1.00、2.50、5.00、10.00mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液至100mL 容量瓶中，加水稀釋定容至刻度線，配成1.00、2.00、5.00、10.00、20.00mg·L-1的SO24-系列溶液。

1.3 樣品溶液制備

參照文獻(xiàn)[11-13]制備檢測(cè)含量，將新鮮的黃花草木犀清洗干凈，再用純水沖洗3 次，置于通風(fēng)室內(nèi)陰干，使用電動(dòng)粉碎機(jī)將黃花草木犀的根、莖、葉和全草分別粉碎，將粉碎后的樣品過(guò)篩（80 目）備用。稱取1.00g 樣品于50mL 錐形瓶中，加入35mL 去離子水，混勻。超聲提取20min，過(guò)濾，轉(zhuǎn)移至50mL 的容量瓶中，用去離子水定容至刻度線，混勻，用0.22μm濾膜過(guò)濾，離子色譜儀測(cè)定。表1 為陰離子色譜峰參考保留時(shí)間。

表1 陰離子保留時(shí)間Tab.1 Anion retention time

1.4 色譜條件

色譜柱DionexIonPacAS22 型色譜柱（4×250mm）；淋洗條件：采用1.5mmol·L-1的Na2CO3和1.5mmol·L-1的NaHCO3混合溶液；洗脫條件：等度洗脫0～20min；流速：1.2mL·min-1；進(jìn)樣體積：10μL；柱溫：室溫；抑制性電導(dǎo)檢測(cè)器。

2 結(jié)果與討論

2.1 離子色譜圖

3 種離子混標(biāo)溶液色譜圖見圖1；3 種離子全草溶液色譜圖見圖2。

圖1 離子混標(biāo)色譜圖Fig.1 Ionmixed standard chromatogram

圖2 樣品色譜圖Fig.2 Chromatogram of sample

2.2 線性關(guān)系和方法檢出限

分別吸取不同濃度的離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，依次進(jìn)樣測(cè)定，以離子峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制3 種陰離子的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出其線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限，結(jié)果見表2。

由表2 可以看出，3 種陰離子測(cè)定均在線性范圍內(nèi)，離子色譜法測(cè)定黃花草木犀的3 種陰離子具有良好的線性相關(guān)性，其線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9993，0.9995，0.9991。

表2 方法線性范圍和檢出限Tab.2 Results of coefficient and detection limit

2.3 樣品的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

稱取1.0g 藥品，按“1.4 項(xiàng)下”方法提取樣品，相同色譜條件，測(cè)樣時(shí)間1、2、3、4、5、6h 分別進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，Cl-、NO-3、SO24-的峰面積RSD 值均小于5%，表明樣品在6h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 樣品的精密度實(shí)驗(yàn)

稱取1.00g 藥品，將藥品“按1.2”色譜條件連續(xù)平行測(cè)定6 次，樣品中Cl-、NO-3、SO24-的峰面積RSD值分別為2.00%、3.89%、2.14%，表明儀器精密度良好，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量精密度實(shí)驗(yàn)Tab.3 Precision test of sample content

2.5 樣品的加標(biāo)回收率

稱取3 份黃花草木犀樣品2.0g，按“1.4 項(xiàng)下”實(shí)驗(yàn)方法樣品溶液制備，分別加入Cl-、NO-3、SO24-的混標(biāo)溶液，回收率在90.00%～105.00%之間，RSD 為1.7%，結(jié)果見表4。

表4 樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)Tab.4 Recovery of samples with added standard

2.6 樣品不同生長(zhǎng)部位的離子含量測(cè)定

分別稱取對(duì)不同生長(zhǎng)部位的黃花草木犀2.0g，按“1.4 項(xiàng)下”方法制備樣品溶液，微濾膜過(guò)濾后，測(cè)全草、莖、葉、花的Cl-、NO-3、SO24-含量，結(jié)果見表5。

由表5 可見，葉的Cl-、NO-3、SO24-含量最高，全草和莖的Cl-、NO-3、SO24-含量比較低。

表5 黃花草木犀不同部位的離子含量Tab.5 Ion content of different parts of herba botanica

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲法提取黃花草木犀，操作簡(jiǎn)便，提取率高，采用離子色譜法測(cè)定黃花草木犀中的Cl-，NO-3和SO24-的含量。應(yīng)用DionexIonPacAS22 型色譜柱適合快速分析常規(guī)離子，短時(shí)間內(nèi)能快速實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單基質(zhì)的離子分離和無(wú)機(jī)陰離子的等度分析。抑制性電導(dǎo)檢測(cè)器，該方法靈敏度高，快速、簡(jiǎn)潔、分離效果好，16min 內(nèi)完成分析，可以用于該藥品的批量檢測(cè)。