許艷秋，王廣成，安萬霞，吳春先，李 婷，高立明

(1.四川省農(nóng)藥檢定所，四川成都 610041；2.成都楠光先業(yè)科技有限公司，四川成都 610041)

氟啶蟲酰胺(flonicamid)，化學(xué)名稱為N-氰甲基-(三氟甲基)煙酰胺，CAS登記號(hào)為158062-67-0，是由日本石原產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社開發(fā)的新型低毒吡啶酰胺類殺蟲劑，目前已在全球30多個(gè)國家登記上市[1]。氟啶蟲酰胺具有良好的滲透作用，通過阻礙害蟲的吮吸作用從而將其餓死，在實(shí)際生產(chǎn)中廣泛用于作物蚜蟲等刺吸式口器害蟲的防治[2]。聯(lián)苯菊酯(bifenthrin)又名氟氯菊酯，化學(xué)名稱為2-甲基聯(lián)苯基-3-基甲基(Z)-(1R,3R; 1S,3S)-3-(2-氯-3,3,3-三氟丙-1-烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷羧酸酯，CAS編號(hào)82657-04-3，具有觸殺和胃毒作用，無內(nèi)吸和熏蒸作用，是一種殺蟲譜廣、作用迅速的擬除蟲菊酯類殺蟲劑和殺螨劑[2]。聯(lián)苯菊酯與氟啶蟲酰胺進(jìn)行復(fù)配可以彌補(bǔ)氟啶蟲酰胺在速效上的不足[3]，從而達(dá)到更好的防治效果。

2020年6月23日，歐盟食品安全局(EFSA)發(fā)布消息稱擬制定農(nóng)作物和動(dòng)物源食品中氟啶蟲酰胺的進(jìn)口限量[4]。因此，對(duì)氟啶蟲酰胺相關(guān)產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)督和控制十分重要。目前，氟啶蟲酰胺水分散粒劑含量[5]的檢測(cè)方法已有文獻(xiàn)報(bào)道，聯(lián)苯菊酯乳油的檢測(cè)方法也有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]。然而，其混配制劑的檢測(cè)方法卻未見報(bào)道。因此本文建立了一種能夠快速有效分離和測(cè)定混配制劑中氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的液相色譜方法，為其質(zhì)量控制和監(jiān)督管理提供技術(shù)支持。

1 試驗(yàn)部分

1.1 供試藥劑

氟啶蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品[質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.3%，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽)]；聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%，上海市農(nóng)藥研究所有限公司)；15%氟啶蟲酰胺·聯(lián)苯菊酯懸浮劑(某公司提供)；乙腈(色譜純，飛世爾科技公司)；超純水(實(shí)驗(yàn)室制備)。

1.2 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀配二極管陣列檢測(cè)器(美國安捷倫科技有限公司)；ZORBAX SB-C18不銹鋼柱色譜柱[150 mm×4.6 mm (i.d.)，5 μm，安捷倫科技(中國)有限公司]。

1.3 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈+水，梯度淋洗，淋洗參數(shù)如表1所示；流速：1.0 mL/min；柱溫：(30±2) ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)244 nm；進(jìn)樣體積：5.0 μL。在該色譜條件下，氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的保留時(shí)間分別約為4.1 min和10.3 min。

表1 梯度淋洗參數(shù)

上述為典型操作條件，實(shí)際操作中可根據(jù)儀器自身特點(diǎn)作適當(dāng)調(diào)整，以獲得理想的效果。典型色譜圖見圖1。

圖1 氟啶蟲酰胺+聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣(上)和15%氟啶蟲酰胺·聯(lián)苯菊酯懸浮劑樣品(下)的色譜圖

1.4 試驗(yàn)步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱取氟啶蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.06 g (精確至0.000 2 g)、聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)品0.03 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入適量乙腈超聲溶解，恢復(fù)至室溫后，用乙腈稀釋至刻度，搖勻備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取15%氟啶蟲酰胺·聯(lián)苯菊酯懸浮劑樣品0.6 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用約5 mL水稀釋混勻，加入適量乙腈超聲溶解，恢復(fù)至室溫后，用乙腈稀釋至刻度，過濾備用。

1.4.3 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，用標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣，當(dāng)相鄰2針樣品峰面積變化小于1.5%后，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進(jìn)樣測(cè)定。

1.4.4 計(jì)算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液中氟啶蟲酰胺(或聯(lián)苯菊酯)的峰面積，計(jì)算試樣中氟啶蟲酰胺(或聯(lián)苯菊酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，計(jì)算公式如下：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中氟啶蟲酰胺(或聯(lián)苯菊酯)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟啶蟲酰胺(或聯(lián)苯菊酯)峰面積的平均值；m1為氟啶蟲酰胺(或聯(lián)苯菊酯)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；p為標(biāo)樣中氟啶蟲酰胺(或聯(lián)苯菊酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相的選擇

根據(jù)氟啶蟲酰胺、聯(lián)苯菊酯以及懸浮劑的特征，選擇乙腈+水作為溶劑溶解樣品。并以乙腈+水作為流動(dòng)相，由于氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯極性差別較大，在等度淋洗條件下保留時(shí)間差異大，容易造成氟啶蟲酰胺出峰過早，影響目標(biāo)物與雜質(zhì)等的分離效果；或聯(lián)苯菊酯出峰時(shí)間過晚，致使分析時(shí)間過長(zhǎng)影響試驗(yàn)效率。因此，本文采用梯度淋洗方式進(jìn)行洗脫，并優(yōu)化了梯度淋洗條件(表1)。在該條件下基線平穩(wěn)，氟啶蟲酰胺、聯(lián)苯菊酯和雜質(zhì)能夠有效地分離，且峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適中，分析時(shí)間較短，是理想的分離條件。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

采用DAD檢測(cè)器，對(duì)氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣在210~400 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行紫外掃描，得到其紫外吸收?qǐng)D(圖2)。由圖2可知，氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的最大吸收波長(zhǎng)分別為265 nm和219 nm。由于吸收波長(zhǎng)在219 nm附近可能存在的雜質(zhì)干擾比較多，而在265 nm時(shí)聯(lián)苯菊酯的吸收比較差，因此本文選擇氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯紫外吸收曲線的交叉點(diǎn)244 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。在此條件下，氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯都有較好的吸收，且無雜質(zhì)干擾。

圖2 氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣的紫外吸收?qǐng)D

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

分別配制5個(gè)濃度分別為0.439 1、0.864 4、1.093 8、1.339 1、1.685 3 mg/mL的氟啶蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本文操作條件進(jìn)行測(cè)定。以氟啶蟲酰胺濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)。由圖3可見，氟啶蟲酰胺質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值之間表現(xiàn)出良好的線性相關(guān)，其線性回歸方程為y=2 172.3x-3.165 4，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。

圖3 氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的線性關(guān)系圖

按照如上方法，配制5個(gè)濃度分別為0.360 5、0.516 1、0.638 3、0.758 5、1.138 7 mg/mL的聯(lián)苯菊酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行測(cè)定，得到聯(lián)苯菊酯的線性回歸方程為y=7 339.2x+28.263，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 2。

2.4 方法精密度

采用本方法對(duì)同一批次樣品中氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行6次平行測(cè)定，測(cè)試結(jié)果見表 2。從表 2可知，氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值分別為10.47%和5.38%，標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.056和0.041，變異系數(shù)分別為0.54%和0.76%。

表2 精密度測(cè)定結(jié)果

2.5 方法準(zhǔn)確度

按照配方比例將除原藥以外的所有助劑混勻，配制成15%氟啶蟲酰胺·聯(lián)苯菊酯懸浮劑空白樣品，準(zhǔn)確稱取空白樣品6份，分別加入一定量的氟啶蟲酰胺標(biāo)樣、聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣，按照上述方法進(jìn)行回收率測(cè)定，結(jié)果見表3。由表3可見，在氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯的添加量分別為 59.14~64.78 mg和 30.73~33.98 mg時(shí)，其相應(yīng)的回收率范圍分別為 99.49%~100.50%和99.27%~100.25%，平均回收率分別為99.92%和99.85%。

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜儀建立了同時(shí)測(cè)定15%氟啶蟲酰胺·聯(lián)苯菊酯懸浮劑中有效成分含量的方法。該方法具有分離效果好、出峰時(shí)間適中、準(zhǔn)確定和精密度高及線性關(guān)系好等特點(diǎn)，是一種簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確檢測(cè)氟啶蟲酰胺和聯(lián)苯菊酯混劑產(chǎn)品中有效成分含量的方法，適用于該類產(chǎn)品的質(zhì)量控制。