唐榮，黃凡卿，武星紅，朱智龍

（江西省撫州市疾病預(yù)防控制中心，江西 撫州 344000）

禽流感是由A型流感病毒引起的傳染性疾病綜合癥。按病原體類型，禽流感可分為高致病性、低致病性和非致病性三大類。高致病性禽流感具有病情危重、病死率高的特點(diǎn)[1-2]。1997年香港發(fā)現(xiàn)H5N1具有感染人的能力后，禽流感在世界各地相繼爆發(fā)。2013年3月上海出現(xiàn)首例人感染H7N9禽流感病例，隨后數(shù)月從華東地區(qū)擴(kuò)散到全國(guó)多個(gè)省份。近十年中國(guó)持續(xù)發(fā)生人感染禽流感病例及家庭聚集性疫情[3-6]，且病毒型別多樣。目前引起人禽流感的主要病原有H5N1、H7N9、H9N2及H10N8等亞型[7-9]，流行病學(xué)調(diào)查表明多數(shù)病例有家禽接觸或活禽市場(chǎng)交易史[9-10]。活禽市場(chǎng)是人禽流感發(fā)生的重要場(chǎng)所[11]，禽流感監(jiān)測(cè)對(duì)疫情早期預(yù)警和防控起重要作用[12]。本文分析撫州地區(qū)2016年至2020年活禽市場(chǎng)禽流感病毒的動(dòng)態(tài)分布，為預(yù)防和控制人禽流感提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 根據(jù)《江西省活禽經(jīng)營(yíng)市場(chǎng)人感染禽流感監(jiān)測(cè)方案（2015版）》要求選取中心城區(qū)共8處，其余11個(gè)縣區(qū)每縣區(qū)各1～2處活禽市場(chǎng)作為監(jiān)測(cè)點(diǎn)。標(biāo)本采集情況為：崇仁縣2016年至2020年作為省級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)連續(xù)5年每個(gè)季度采集30份標(biāo)本。2017年第一季度采集中心城區(qū)標(biāo)本65份，各縣區(qū)標(biāo)本165份，崇仁縣第四季度加采30份，2018年至2020年中心城區(qū)第一季度共采集200份。標(biāo)本類型分為籠具表面擦拭、糞便、禽類飲水、宰殺或擺放禽肉案板表面擦拭和其他（清洗禽類的污水和脫毛機(jī)等）5類。2018年開始增加禽種類的分類，標(biāo)本為雞、鴨和鴿子。所有標(biāo)本采集運(yùn)送參照監(jiān)測(cè)方案要求執(zhí)行。

1.2 儀器與試劑 江蘇碩世生物科技有限公司全自動(dòng)核酸提取儀SSNP-2000A(32通量)及FluA、H5、H7、H9和H10核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）、Bio-Rad公司CFX-96熒光PCR儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 撫州市疾病預(yù)防控制中心對(duì)標(biāo)本進(jìn)行FluA檢測(cè)，F(xiàn)luA陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)一步檢測(cè)H5、H7、H9和H10亞型。病毒核酸提取在生物安全Ⅱ級(jí)（BSL-2級(jí)）實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，RT-PCR進(jìn)行核酸檢測(cè)。PCR結(jié)束后檢測(cè)Ct≤35且曲線呈S型判為陽(yáng)性，Ct＞38或者未檢出判為陰性。H5、H7、H9和H10均為陰性而FluA陽(yáng)性標(biāo)本判斷為A未分型。H5+H9、H7+H9和H5+H7+H9為核酸陽(yáng)性的混合型。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 Excel 2013和SPSS 23.0軟件進(jìn)行整理數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析，組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)總體情況 不同年份陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.67，P＜0.05）。見表1。

表1 2016年至2020年撫州地區(qū)不同年份活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)情況

2.2 不同季度活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè) 不同季度陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=81.20，P＜0.05)。見表2。

表2 2016年至2020年撫州地區(qū)不同季度活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)情況

2.3 不同標(biāo)本類型活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè) 不同類型標(biāo)本陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.70，P＞0.05)。見表3。

表3 2016年至2020年撫州地區(qū)不同標(biāo)本類型活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)情況

2.4 不同禽種類活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè) 雞、鴨和鴿子的陽(yáng)性率依次為77.82%、70.18%和50.00%，不同禽種類標(biāo)本陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.21，P＜0.05)。見表4。

表4 2018年至2020年撫州地區(qū)不同禽種類活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)情況

2.5 不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè) 中心城區(qū)和其他縣區(qū)標(biāo)本陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.05，P＜0.05)。中心城區(qū)大公路陽(yáng)性率為95.00%，剪子口為69.70%，不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.93，P＞0.05)。東鄉(xiāng)區(qū)和廣昌縣FluA陽(yáng)性率均為80.00%，南城縣為33.33%，其他縣區(qū)不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.90，P＜0.05)，見表5。

表5 2016年至2020年撫州地區(qū)不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)情況

3 討論

本監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示2016年至2020年撫州地區(qū)活禽市場(chǎng)FluA總陽(yáng)性率為70.47%，連續(xù)5年陽(yáng)性率高于本省及其他省市[13-16]。這表明活禽市場(chǎng)持續(xù)存在廣泛的禽流感病毒污染，主要亞型為H9（34.81%）和A未分型（47.25%）。禽流感病毒基因分析表明2013年中國(guó)確診的H7N9部分片段來(lái)源于H9N2。H9N2雖為低致病性禽流感病毒，但可在H7N9禽流感病毒基因重配和突破種間屏障引起人類感染中發(fā)揮重要作用[17]。有研究報(bào)道低致病性H7N4、H9N2引起人類感染甚至死亡[18-19]，H5N2、H7N7、H9N2可在禽間傳播過(guò)程中變異為高致病性H5N1，不可忽視低致病性禽流感病毒的存在。H5和H5+H9占比和達(dá)到15.53%，提示要警惕H5的污染。2017年檢出活禽市場(chǎng)H7共7例，當(dāng)時(shí)江西省共報(bào)告人感染H7N9病例7例，全國(guó)多省市進(jìn)入H7N9禽流感高發(fā)期。2013年至2016年家禽H7N9為弱病毒，2017年之后轉(zhuǎn)為強(qiáng)致病性造成禽類大量感染并死亡。高致病性H7N9可以直接感染人類，環(huán)境標(biāo)本中檢出H7預(yù)警加強(qiáng)活禽市場(chǎng)禽類和環(huán)境治理及高危人群管理。

不同季度活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)顯示冬季是禽流感高發(fā)季節(jié)，F(xiàn)luA陽(yáng)性率第四季度（86.11%）最高，第二季度（42.00）最低，和李靈之2117份外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果分析一致[20]。高致病性H5和H7在第一和四季度維持較高水平，應(yīng)加強(qiáng)冬春季活禽市場(chǎng)監(jiān)測(cè)及不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。不同類型標(biāo)本陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,結(jié)果與鄧立權(quán)[21]等研究相同。FluA陽(yáng)性率糞便（74.55%）高于宰殺或擺放禽肉案板（71.43%）和籠具表面檫拭（69.06%）及其他二類標(biāo)本。禽流感病毒可在禽類的消化道中增殖，并依靠空氣、糞便和飲水等傳播造成廣泛的環(huán)境污染。被病毒污染的清洗水、脫毛機(jī)、籠具、飲水以及宰殺禽類案板等都含有病毒。5種類型標(biāo)本存在較廣泛污染，陽(yáng)性率在67.59%～74.55%之間。H5在禽類飲水標(biāo)本中污染較廣泛，占比為22.83%，其他標(biāo)本的H5和H5+H9占比和為30.61%。應(yīng)加強(qiáng)各地活禽城市場(chǎng)水源管理，禽類飲水、污水和脫毛機(jī)等要及時(shí)更換和清洗，減少病毒對(duì)禽舍、飼料、飲水和案板的污染。家庭中應(yīng)做到熟食和生食案板分開使用。不同禽種類活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)顯示雞類FluA陽(yáng)性率最高，這和魏明敏[22-23]等相關(guān)報(bào)道一致。不同種類家禽對(duì)禽流感病毒易感性不同，家禽中以雞和火雞最強(qiáng)，成為重要的傳染源。鄧斐[24]等對(duì)人感染H7N4禽流感病毒分子溯源的研究從患者家養(yǎng)的雞鴨中分離到7株高度同源的病毒并揭示了中國(guó)南方庭院式養(yǎng)殖模式為禽流感病毒的跨種族傳播提供了便利。中國(guó)是家禽飼養(yǎng)大國(guó)，崇仁縣有大型雞、鴨養(yǎng)殖場(chǎng)，且多為農(nóng)村散養(yǎng)方式，雞、鴨和鴿子甚至家畜間的頻繁接觸可增加交叉感染和基因重配的機(jī)會(huì)。

國(guó)家衛(wèi)計(jì)委網(wǎng)站公布數(shù)據(jù)顯示2017年1月全國(guó)人感染H7N9禽流感發(fā)病數(shù)為192例，死亡79例，波及福建、云南、湖南、湖北和浙江等多個(gè)省份。受全國(guó)疫情影響，2017年1月?lián)嶂菔屑部刂行募哟蠡钋菔袌?chǎng)監(jiān)測(cè)力度，中心城區(qū)及各縣區(qū)共采集標(biāo)本230份，崇仁縣在第四季度加采30份。不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)活禽市場(chǎng)禽流感監(jiān)測(cè)顯示中心城區(qū)FluA陽(yáng)性率高于其他縣區(qū)，陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)原因可能有：標(biāo)本采集范圍廣、禽類飼養(yǎng)、宰殺方式不同、標(biāo)本采集方式及各個(gè)市場(chǎng)進(jìn)貨來(lái)源不一等。中心城區(qū)8個(gè)活禽交易市場(chǎng)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相關(guān)調(diào)查資料顯示活禽大多由同一家經(jīng)銷商供貨。東鄉(xiāng)區(qū)和廣昌縣FluA陽(yáng)性率最高，其次為宜黃，樂(lè)安，黎川和資溪，南城縣最低，不同縣區(qū)之間陽(yáng)性率差別較大。H5在其他縣區(qū)占比高于中心城區(qū)，且宜黃縣和崇仁縣活禽市場(chǎng)污染較廣泛。由于H5在禽類飲水標(biāo)本中污染廣泛，應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)這部分地區(qū)禽類飲水和其他水源管理。

綜上所述，撫州地區(qū)活禽市場(chǎng)存在廣泛的禽流感病毒污染，應(yīng)加大對(duì)活禽市場(chǎng)的消毒清洗工作，規(guī)范化無(wú)害化處理禽類污物。疫情期間采取“一日一清潔、一周一大掃除、一月一休市”模式，必要時(shí)可關(guān)閉活禽交易市場(chǎng)。同時(shí)應(yīng)增強(qiáng)禽類飼養(yǎng)、銷售等相關(guān)從業(yè)人員防范意識(shí)，盡量減少活禽接觸及暴露的機(jī)會(huì)。建議有條件的農(nóng)村改善飼養(yǎng)方式，不同禽類分開養(yǎng)殖以減少與其他禽類接觸的機(jī)會(huì)。應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)人和動(dòng)物的禽流感監(jiān)測(cè)，對(duì)疑似病例早發(fā)現(xiàn)、早診斷，降低人感染禽流感的風(fēng)險(xiǎn)。