李若彬，王柯為，李夢娜，楊賀迪，冷鋒

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)，黑龍江 大慶 163000

0 引言

幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）是一種螺旋形、微厭氧、對(duì)生長條件要求十分苛刻的細(xì)菌。1983年首次從慢性活動(dòng)性胃炎患者的胃黏膜活檢組織中分離成功，是目前所知能夠在人胃中生存的唯一微生物種類，能夠?qū)е翲p病包括由Hp感染引起的胃炎、消化道潰瘍、淋巴增生性胃淋巴瘤等，存在于大多數(shù)慢性胃炎患者的胃黏膜上皮表面或腺體的黏液層中[1-2]。在發(fā)達(dá)國家，大約占比30%～60%，在發(fā)展中國家，大約占比60%。Hp能產(chǎn)生大量的脲酶，其活性是其他變形桿菌的20～70倍，是所有已知產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌中最活躍的。Hp產(chǎn)生脲酶，該酶催化游離氨的產(chǎn)生[3]。氨氣在Hp周圍形成“氨氣云”，中和胃酸，保護(hù)Hp免受胃黏膜酸性環(huán)境的影響。醫(yī)學(xué)從業(yè)人員認(rèn)為體內(nèi)的Hp通?？梢韵?，應(yīng)進(jìn)行全國普查。至少那些曾經(jīng)做過胃部手術(shù)、胃部疾病或者胃癌的患者應(yīng)該接受Hp檢測，感染者應(yīng)接受殺菌治療，希望能夠控制胃癌。

1 檢測材料

Hp唾液檢測試劑：尿素50g，酵母浸膏0.1g，酚紅0.01g，乙醇，PH計(jì)。

呼氣試驗(yàn)：13C呼氣試驗(yàn)分析儀（WLD600），13C膠囊。

2 實(shí)驗(yàn)檢測

2.1 Hp唾液檢測方法

2.1.1 采樣預(yù)處理

患者一周之內(nèi)不可服用抗生素，鉍劑，質(zhì)子泵抑制劑等藥物，留取唾液樣本前一晚十二點(diǎn)之后禁食禁水（見圖1）。清晨刷牙前留取唾液樣本至采集管1，通過調(diào)節(jié)唾液PH酸堿度至6.8降低唾液鏈球菌酶活性，減少其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

圖1 實(shí)驗(yàn)檢測步驟

2.1.2 口腔Hp半定量檢測

將采樣預(yù)處理后的樣本用膠頭滴管吸入3～5滴，放入配置好的反應(yīng)盒內(nèi)，5min后觀察其顏色改變，通過比色法進(jìn)行酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，以此實(shí)現(xiàn)對(duì)Hp的半定量[4]。5min后反應(yīng)試劑盒內(nèi)溶液為黃色則為陰性，變?yōu)榧t色則顯示陽性，且隨著HP含量的增加，溶液的顏色也會(huì)隨之加深，由淺紅色變?yōu)樯罴t色或玫紅色[5-6]。

2.2 13C呼氣試驗(yàn)

呼氣試驗(yàn)是檢測Hp感染的首選方法，主要是13C和14C尿素呼氣試驗(yàn)，具體如下：

（1）呼氣試驗(yàn)檢測Hp主要是通過13C和14C的尿素呼氣試驗(yàn)，由于尿素能夠在尿素酶的作用下生成氨和CO2，在患者進(jìn)行呼氣試驗(yàn)的時(shí)候可以先服用一顆有標(biāo)記的13C或14C尿素，當(dāng)患者體內(nèi)有Hp時(shí)，它就可以被分解為氨和CO2，在使用同位素標(biāo)記的CO2將會(huì)通過呼吸道排放到體外，因此可以用患者呼氣來檢測Hp感染的情況，同位素標(biāo)記的CO2越多則Hp感染的情況越嚴(yán)重[7-8]。

（2）呼氣試驗(yàn)無創(chuàng)無痛，減輕了患者的疼痛感，并且敏感性高，檢測的準(zhǔn)確性率高，不會(huì)造成交叉感染，所以Hp的檢測首選呼氣試驗(yàn)的方法13C呼吸試驗(yàn)檢測的方法，通過檢測被13C標(biāo)記的CO2是否超過100dpm來確定是否有Hp感染，本文主要運(yùn)用的是13C[9-10]。

3 實(shí)驗(yàn)分析

3.1 尿素濃度與反應(yīng)時(shí)間確定

尿素酶催化尿素水解，生成兩分子的氨和一分子的CO2，同時(shí)也引起溶液PH的變化（見圖2），因此，分別將濃度為0.1、0.7、7、30、50、70、140g/L的10mL尿素溶液與1mL，0.5U/mL的尿素酶溶液混合，30min后檢測其PH酸堿度，結(jié)果顯示，尿素濃度在0.7、7、30、50、70g/L時(shí)，PH變化最為明顯，且5組數(shù)據(jù)之間無顯著差異。據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)試劑尿素溶液濃度設(shè)置為50g/L。

圖2 不同濃度尿素溶液檢測結(jié)果

將10mL的尿素溶液與0.5U/mL的尿素酶溶液充分混合，靜置5min，30min，60min，90min，分別檢測其PH變化，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在反應(yīng)時(shí)間為5min時(shí)其PH酸堿度與反應(yīng)時(shí)間30min的PH酸堿度無顯著差異。據(jù)此本檢測方式設(shè)定反應(yīng)時(shí)間為5min。

3.2 唾液鏈球菌的分析

口腔中的唾液鏈球菌是最為主要的產(chǎn)生尿素酶分解尿素的細(xì)菌，因此會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生一定影響。根據(jù)唾液鏈球菌的酶活性數(shù)據(jù)與PH數(shù)據(jù)，結(jié)合matlab軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)擬合，軟件擬合得出的R-square=0.9613，可以看出擬合的精確度較高，同時(shí)也符合實(shí)際情況，詳見表1。

表1 唾液鏈球菌酶活性與PH關(guān)系變化圖表

3.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

本文對(duì)200組檢測結(jié)果進(jìn)行綜合分析，對(duì)檢測結(jié)果的靈敏性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、準(zhǔn)確率、一致性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，具體方法如下：

計(jì)算靈敏度數(shù)學(xué)方法：靈敏度的計(jì)算需要與陽性標(biāo)本數(shù)與總陽性標(biāo)本數(shù)有關(guān)，計(jì)算公式如下：

計(jì)算特異性數(shù)學(xué)方法：特異性的計(jì)算主要與陰性標(biāo)本數(shù)與總的陰性標(biāo)本數(shù)有關(guān)，計(jì)算公式如下：

計(jì)算特異性數(shù)學(xué)方法：陽性預(yù)測值主要與真陽性標(biāo)本數(shù)和診斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽性標(biāo)本數(shù)有關(guān),計(jì)算公式如下：

計(jì)算陰性預(yù)測值數(shù)學(xué)方法：陰性預(yù)測值主要與真陰性標(biāo)本數(shù)和診斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陰性標(biāo)本數(shù)有關(guān),計(jì)算公式如下：

計(jì)算準(zhǔn)確性數(shù)學(xué)方法：準(zhǔn)確性主要與真陽性標(biāo)本數(shù)、真陰性標(biāo)本數(shù)以及總標(biāo)本數(shù)有關(guān),計(jì)算公式如下：

計(jì)算一致性數(shù)學(xué)方法：計(jì)算一致性主要與共陽性標(biāo)本數(shù)和陽性總數(shù)有關(guān)，計(jì)算公式如下：

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在200例受試者中，Hp唾液檢測試劑盒檢測出受試者陽性的數(shù)目為122例，Hp唾液檢測試劑盒檢測出受試者陰性的數(shù)目為78例；Hp唾液檢測試劑盒檢測出受試者13C陽性的數(shù)目為117例，Hp唾液檢測試劑盒檢測出受試者陰性的數(shù)83例，122例Hp唾液檢測試劑盒陽性標(biāo)本對(duì)應(yīng)13C陽性117例，Hp唾液檢測試劑盒陽性標(biāo)本對(duì)應(yīng)假陽性7例；78例Hp唾液檢測試劑盒陰性標(biāo)本對(duì)應(yīng)13C陰性83例，Hp唾液檢測試劑盒陰性標(biāo)本對(duì)應(yīng)假陰性2例；本實(shí)驗(yàn)所采用的試劑盒靈敏性通過前面數(shù)學(xué)方法計(jì)算達(dá)到了98.29%，特異性通過前面數(shù)學(xué)方法計(jì)算達(dá)到了90.36%，陽性預(yù)測值通過前面數(shù)學(xué)方法計(jì)算達(dá)到了94.26%，陰性預(yù)測值通過前面數(shù)學(xué)方法計(jì)算達(dá)到了96.15%，準(zhǔn)確性通過前面數(shù)學(xué)方法計(jì)算達(dá)到了95%，差異性通過前面數(shù)學(xué)方法計(jì)算達(dá)到了5%，低于實(shí)驗(yàn)允許變異系數(shù)（10%），所以本實(shí)驗(yàn)具有很高可行性與可信度[11-14]。

5 討論

Hp經(jīng)口到達(dá)胃黏膜后定居感染，會(huì)引發(fā)慢性、淺表性胃炎、潰瘍、淋巴增生性胃淋巴瘤、慢性萎縮性胃炎、腸化生、胃癌等，大量研究數(shù)據(jù)表明口腔中存在Hp，且具有較高的檢出率[15-16]。

Hp產(chǎn)生尿素酶，可分解尿素生成CO2和氨氣。13C呼氣試驗(yàn)通過標(biāo)記、檢測Hp尿素酶分解生成的CO2，實(shí)現(xiàn)對(duì)Hp的檢測；Hp唾液檢測試劑盒，通過檢測被氨氣堿化的溶液，確定是否有Hp感染[17-18]。Hp唾液檢測試劑盒與13C呼氣試驗(yàn)檢測結(jié)果存在一定差異，但是差異性為5%，低于實(shí)驗(yàn)允許變異系數(shù)10%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Hp唾液檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)標(biāo)本為唾液[19]，對(duì)人體無危害，且檢測時(shí)間短，操作簡單，可重復(fù)檢測，適用于家庭、學(xué)校的初查。

6 防治建議

想要徹底的把Hp消滅并不是一件困難的事，大約85%的細(xì)菌感染者經(jīng)過7～14d的正確治療過后，位于身體內(nèi)部的Hp幾乎能夠被徹底消除[20-21]。我們提出如下建議，應(yīng)該有一定周期性的開展全民普查，對(duì)接受過胃部手術(shù)、有過胃病、或親屬中有過胃癌的人進(jìn)行Hp的定時(shí)檢查，同時(shí)在感染者進(jìn)行合理的殺菌治療，這樣有利于防控胃癌的發(fā)生，減少全國胃癌發(fā)病率[22-23]。