王明霞 蔡雪峰 林靜 黃宗文

（海南省安寧醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科和老年精神科，?？?571100）

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一個復(fù)雜的病變過程，涉及多種細(xì)胞機(jī)制和途徑，如炎癥、脂質(zhì)積聚、氧化應(yīng)激等，是引起心血管和腦血管疾病、心梗、冠狀動脈疾病和缺血性中風(fēng)的重要因素。血管內(nèi)皮下巨噬細(xì)胞脂質(zhì)顆粒的內(nèi)化均由一系列清道夫受體（scavenger receptors，SRS）調(diào)控，每一種受體都能攝取修飾后的低密度脂蛋白（low density lipoprotein,LDL）。例如，SR-A類受體SR-AⅠ和SR-AⅡ?qū)σ阴；兔芏戎鞍缀痛罅垦趸兔芏戎鞍拙哂休^強(qiáng)的親和力，然而SRS并不是巨噬細(xì)胞攝取氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）的唯一途徑，吞噬和胞吞也可能攝取ox-LDL。

巨噬細(xì)胞自噬參與AS過程中泡沫細(xì)胞的形成與炎癥反應(yīng)［3］，巨噬細(xì)胞與AS從脂質(zhì)條紋到斑塊破裂及血栓形成等各個階段密切相關(guān)，調(diào)節(jié)病變處的脂質(zhì)膽固醇代謝、炎癥反應(yīng)以及纖維降解等，對AS性斑塊的形成、增大以及斑塊的穩(wěn)定性有重要作用，抑制巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)堆積和泡沫細(xì)胞形成，減少巨噬細(xì)胞向病變處的遷移和黏附可有效保持斑塊的穩(wěn)定。巨噬細(xì)胞也是參與炎癥反應(yīng)過程中的重要功能分子之一，其中包括NLRP3、ASC和caspase-1三種相關(guān)蛋白組成的炎癥小體，促進(jìn)IL-1β前體成熟并釋放，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。相關(guān)研究結(jié)果表明，自噬可以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)［4-5］。敲除ATG16L1或ATG7等自噬基因后，經(jīng)脂多糖（LPS）誘導(dǎo)后，NLRP3介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)增加，表明自噬與抑制NLRP3活化有關(guān)［6］。在炎癥過程中，小膠質(zhì)細(xì)胞或巨噬細(xì)胞可以激活caspase-1介導(dǎo)的炎癥因子如IL-1β和IL-18的釋放，而促進(jìn)細(xì)胞自噬的藥物可以抑制炎癥因子的釋放和caspase-1的表達(dá)。PENG等［7］研究表明ox-LDL可激活NLRP3炎癥小體，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生并釋放成熟的IL-1β。

自噬是細(xì)胞進(jìn)化上保守的自我降解過程，可降解損壞或多余的蛋白質(zhì)、細(xì)胞器及大分子物質(zhì)，降解物被重新吸收利用以達(dá)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的作用，從而減輕組織細(xì)胞損傷［6］。LC3是細(xì)胞自噬過程中的標(biāo)志蛋白，當(dāng)細(xì)胞激發(fā)自噬時LC3Ⅰ通過降解部分多肽，形成LC3Ⅱ以促進(jìn)自噬體膜的形成，beclin1作為自噬體產(chǎn)生的重要分子可調(diào)控自噬體的形成［8］。研究表明自噬的激活可減輕炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激［9-10］。胡黃連苷Ⅱ（化學(xué)式為C23H28O13）在許多臟器組織中具有廣泛的藥理作用［11-12］。然而，關(guān)于胡黃連苷Ⅱ是否可通過調(diào)節(jié)自噬及減輕炎癥反應(yīng)，從而抑制巨噬細(xì)胞泡沫化形成的分子機(jī)制目前未見報道。

胡黃連是我國傳統(tǒng)中草藥，可用于治療多種疾病，根據(jù)宋代《本草圖經(jīng)》中記載,胡黃連能夠治療“傷寒勞復(fù)身熱，大小便赤如血者”。胡黃連苷Ⅱ是其主要活性成分之一，具有廣泛的藥理作用，包括神經(jīng)保護(hù)、肝保護(hù)、抗膽汁淤積、抗炎和免疫調(diào)節(jié)活性［13-14］。研究表明胡黃連苷Ⅱ具有抗氧化與抗炎活性［15-17］。LEE等［18］首次證明了胡黃連苷Ⅱ通過抑制MAPK和NF-κB途徑抑制人單核細(xì)胞和人氣管上皮細(xì)胞中IL-33的表達(dá)與分泌，表明胡黃連苷Ⅱ?qū)τ诜尾垦装Y具有改善作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞THP-1（人髓系白血病單核細(xì)胞）購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。

1.1.2 藥物胡黃連苷Ⅱ購自上海源葉生物（HPLC≥98%），用生理鹽水配制成1 mmol/L胡黃連苷Ⅱ母液，過濾除菌低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 試劑RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清、胰酶購自Thermo Hyclone公司；Cell Counting Kit-8（CCK-8）相關(guān)試劑購自美國Apexbio公司；蛋白提取試劑盒、BCA試劑盒購自碧云天公司；鼠抗人LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、beclin1、ABCA1、ABCG1、NLRP3、ASC、GAPDH一抗及TNF-α、human IL-10、human IL-6、human IL-1β ELISA Kit均購自英國Abcam；二抗（辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG）購自美國Thermo Scientific公司。

1.2 方法

1.2.1 巨噬細(xì)胞泡沫化模型建立用含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中。PMA誘導(dǎo)分化36 h，THP-1細(xì)胞形態(tài)由懸浮的圓形細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橘N壁的不規(guī)則形態(tài)細(xì)胞，同時伸出偽足，表明THP-1單核細(xì)胞已分化為巨噬細(xì)胞。

經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化為THP-1細(xì)胞源性巨噬細(xì)胞后，加入80 μg/ml ox-LDL培養(yǎng)24 h后，顯微鏡下細(xì)胞體積增大，細(xì)胞內(nèi)含物增多，油紅O染色顯紅色圓形脂滴，表明已形成泡沫細(xì)胞。

1.2.2 測定細(xì)胞活力THP-1細(xì)胞以1×104個/孔接種于96孔板，每組設(shè)置3個復(fù)孔，PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞后，加入不同濃度的胡黃連苷Ⅱ（0、10、20、30和100 μmol/L），協(xié)同80 μg/ml的ox-LDL孵育48 h，加入培養(yǎng)液組為對照組，加入CCK-8試劑置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 h，使用酶標(biāo)儀在450 nm下測定各孔吸光度，測定細(xì)胞相對活力。細(xì)胞相對活力（%）=實(shí)驗(yàn)組A490/對照組A490×100%。

1.2.3 油紅O染色THP-1細(xì)胞以2×105個/孔接種于12孔板，每組設(shè)置3個復(fù)孔，PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞后，加入不同濃度的胡黃連苷Ⅱ（0、5、10和20 μmol/L）與100 μg/ml ox-LDL培養(yǎng)24 h，4%多聚甲醛4℃固定30 min，PBS洗滌后37℃油紅O染色30 min，除去油紅O染液，60%異丙醇漂洗殘余油紅O，倒置熒光顯微鏡（×40）下觀察拍照。

1.2.4 檢測細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量THP-1細(xì)胞以2×106個/孔接種于6孔板，PMA誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞后加入不同濃度的胡黃連苷Ⅱ（0、5、10和20 μmol/L）預(yù)處理6 h，加入80 μg/ml的ox-LDL培養(yǎng)24 h，收集細(xì)胞用PBS清洗3次，依據(jù)游離膽固醇（FC）與總膽固醇（TC）含量檢測試劑盒說明，測定各實(shí)驗(yàn)組中游離膽固醇與總膽固醇含量，取適量細(xì)胞上清液用BCA法測定蛋白濃度，酶標(biāo)儀測定OD550值，并校正膽固醇含量。細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯（cholesterol ester，CE）=TC-FC。膽固醇酯化率（%）=CE含量/總膽固醇含量×100%。

1.2.5 Western blot THP-1細(xì)胞以2×106個/孔接種于6孔板，誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞，加入不同濃度的胡黃連苷Ⅱ（0、5、10和20 μmol/L）與80 μg/ml ox-LDL培養(yǎng)24 h。收集各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，加入RIPA裂解液，冰上裂解30 min，4℃下12 000 r/min離心10 min。BCA法測定所得樣品蛋白濃度，均取45 μg蛋白于10%SDS-PAGE分離蛋白，并轉(zhuǎn)至NC膜上，5%脫脂奶粉封閉1 h，加入按比例稀釋后的一抗ABCA1、ABCG1、NLRP3、ASC、caspase-1、LC3、beclin1和GAPDH，4℃孵育過夜；TBST洗膜后加入對應(yīng)二抗，室溫孵育2 h；采用ECL化學(xué)發(fā)光試劑在化學(xué)發(fā)光儀中顯影曝光，使用Image Lab 5.1.0軟件進(jìn)行蛋白條帶灰度分析。

1.2.6 ELISA法檢測炎癥因子THP-1細(xì)胞以1×104個/孔接種于96孔板，每組設(shè)置3個復(fù)孔，PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞后，加入不同濃度的胡黃連苷Ⅱ（0、5、10和20 μmol/L），協(xié)同80 μg/ml的ox-LDL孵育24 h，加入培養(yǎng)液組為對照組。收集各組細(xì)胞培養(yǎng)液，ELISA試劑盒檢測TNF-α、IL-1β和IL-6等炎癥因子，從而評估炎癥反應(yīng)。

1.2.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)THP-1細(xì)胞以2×105個/孔接種于12孔板，PMA誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞后，加入不同濃度的胡黃連苷Ⅱ（0、5、10和20 μmol/L），協(xié)同80 μg/ml的ox-LDL孵育24 h，加入培養(yǎng)液組為對照組。加入4%多聚甲醛固定和0.5%Triton X-100改變細(xì)胞膜通透性，5%BCA阻斷1 h，LC3Ⅱ一抗在4℃下孵育過夜，洗滌細(xì)胞后室溫下避光孵育二抗1 h，DAPI溶液孵育10 min，激光共聚焦顯微鏡拍照。

1.2.8 自噬水平與炎癥小體相關(guān)性檢測THP-1細(xì)胞以2×106個/孔接種于6孔板，誘導(dǎo)成巨噬細(xì)胞，預(yù)先加入自噬激活劑200 nmol/L雷帕霉素（rapamycin，RAPA）或自噬抑制劑50 nmol/L巴佛洛霉素A1（bafilomycin A1，Baf-A1）處理，再加入20 μmol/L胡黃連苷Ⅱ與80 μg/ml ox-LDL培養(yǎng)24 h。收集各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)方法同1.2.5 Western blot操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析使用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析及繪圖。所有數(shù)據(jù)以±s表示。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度胡黃連苷Ⅱ?qū)HP-1細(xì)胞活力的影響如圖1A所示，胡黃連苷Ⅱ在0~100 μmol/L的濃度范圍內(nèi)不影響THP-1細(xì)胞活力，表明胡黃連苷Ⅱ在該濃度范圍內(nèi)對THP-1無細(xì)胞毒性。此外，THP-1細(xì)胞與80 μg/ml ox-LDL共培養(yǎng)以誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞的形成。經(jīng)ox-LDL誘導(dǎo)后，THP-1細(xì)胞的細(xì)胞活力顯著降低，與空白組（0 μmol/L）相比胡黃連苷Ⅱ（10~100 μmol/L）處理可顯著提高ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞活力（圖1B）。

圖1 胡黃連苷Ⅱ?qū)HP-1細(xì)胞活力的影響Fig.1 Effects of picrosideⅡon viability of THP-1 cells

2.2 油紅O染色如圖2所示，Control組細(xì)胞內(nèi)僅有少量細(xì)小紅色顆粒，巨噬細(xì)胞經(jīng)ox-LDL刺激后體積增大，胞內(nèi)有明顯紅色脂滴。5、10、20 μmol/L胡黃連苷Ⅱ處理后的細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴均明顯減少，隨著胡黃連苷Ⅱ濃度增加，呈現(xiàn)出濃度依賴性減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的沉積，初步表明胡黃連苷Ⅱ可有效改善巨噬細(xì)胞對脂質(zhì)的積累。

圖2 胡黃連苷Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累影響（油紅O，×40）Fig.2 Effects of picrosideⅡon cholesterol accumulation in macrophages（Oil red O，×40）

2.3 膽固醇積累與相關(guān)蛋白水平檢測如表1所示，經(jīng)ox-LDL誘導(dǎo)后THP-1源泡沫細(xì)胞TC水平顯著增加，胡黃連苷Ⅱ干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)TC降低。空白對照組巨噬細(xì)胞的膽固醇酯化率為（72.20±3.21）%，隨著胡黃連苷Ⅱ濃度的增加（5、10和20 μmol/L），巨噬細(xì)胞的膽固醇酯化率逐漸降低［分別為（60.77±7.80）%、（54.33±9.64）%和（47.59±8.73）%］，表明胡黃連苷Ⅱ能夠抑制巨噬細(xì)胞膽固醇酯化。采用Western blot驗(yàn)證胡黃連苷Ⅱ是否作用于巨噬細(xì)胞的ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）和ABCG1，從而影響巨噬細(xì)胞攝取膽固醇。Western blot結(jié)果顯示（圖3），5、10和20 μmol/L胡黃連苷Ⅱ處理后，與ox-LDL+PicrosideⅡ(0 μmol/L)組 相 比ABCA1和ABCG1的蛋白表達(dá)水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01），表明胡黃連苷Ⅱ可能通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)膜蛋白ABCA1和ABCG1的表達(dá)，加快細(xì)胞內(nèi)膽固醇外排，減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇積累。

表1 巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量Tab.1 Cholesterol content in macrophages

圖3 不同濃度胡黃連苷Ⅱ?qū)δ懝檀纪馀诺鞍妆磉_(dá)的影響Fig.3 Effects of picrosideⅡat different concentrations on expressions of cholesterol-efflux regulatory protein

2.4 胡黃連苷Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞炎癥反應(yīng)的影響如圖4A~C所 示，ELISA實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表 明，Control組與ox-LDL誘導(dǎo)組中TNF-α［（49.00±3.60）與（131.67±3.06）pg/ml］、IL-1β［（42.67±3.18）與（99.00±4.00）pg/ml］、IL-6［（103.00±7.21）與（303.67±11.72）pg/ml］相比較，ox-LDL誘導(dǎo)組中炎癥因子均顯著提高，與不同濃度的胡黃連苷Ⅱ共同孵育后，巨噬細(xì)胞炎癥因子的分泌均減少，其中20 μmol/L胡黃連苷Ⅱ處理后的巨噬細(xì)胞炎癥因子為TNF-α［（42.33±5.86）pg/ml］、IL-1β［（44.33±4.16）pg/ml］、IL-6［（138.67±9.61）pg/ml］，相關(guān)炎癥因子的分泌均顯著降低。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示胡黃連苷Ⅱ在10 μmol/L和20 μmol/L的 濃 度 下 顯 著 下 調(diào)ASC、caspase-1和NLRP3的表達(dá)（P<0.05，P<0.01或P<0.001），這些結(jié)果表明胡黃連苷Ⅱ能夠有效抑制ox-LDL誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)（圖4D）。

圖4 胡黃連苷Ⅱ?qū)x-LDL誘導(dǎo)的THP-1炎癥反應(yīng)的影響Fig.4 Effects of picrosideⅡon ox-LDL-induced inflammation in THP-1 cells

2.5 胡黃連苷Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞自噬活性的影響在ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞中評估胡黃連苷Ⅱ的自噬活性。如圖5A所示，在ox-LDL誘導(dǎo)后，LC3Ⅱ/Ⅰ和beclin1的蛋白表達(dá)水平顯著增加，表明ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞激活自噬。5、10、20 μmol/L胡黃連苷Ⅱ處理巨噬細(xì)胞后，與空白組相比LC3Ⅱ/Ⅰ和beclin1的蛋白表達(dá)水平增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01或P<0.001），呈現(xiàn)濃度依賴性提高LC3Ⅱ/Ⅰ和beclin1的蛋白表達(dá)且增強(qiáng)自噬。此外，免疫熒光分析表明，ox-LDL可提高LC3Ⅱ的活性，而胡黃連苷Ⅱ處理可進(jìn)一步增強(qiáng)LC3Ⅱ的活性。

圖5 胡黃連苷Ⅱ?qū)x-LDL誘導(dǎo)的THP-1自噬的影響（×20）Fig.5 Effects of picrosideⅡon ox-LDL-induced autophagy in THP-1 cells（×20）

2.6 胡黃連苷Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞自噬水平與炎癥小體相關(guān)性的影響如圖6所示，胡黃連苷Ⅱ或自噬促進(jìn)劑RAPA處理后均顯著降低ox-LDL誘導(dǎo)的NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表達(dá)（P<0.05或P<0.01），而自噬抑制劑Baf-A1處理后減弱了胡黃連苷Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞炎癥小體相關(guān)蛋白表達(dá)的作用，表明胡黃連苷Ⅱ促進(jìn)巨噬細(xì)胞自噬并因此下調(diào)炎癥小體相關(guān)蛋白的表達(dá)，巨噬細(xì)胞的自噬水平與炎癥小體的激活呈負(fù)相關(guān)性。

圖6 胡黃連苷Ⅱ通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞自噬影響炎癥小體的表達(dá)Fig.6 PicrosideⅡaffects expression of inflammasome by regulating autophagy in macrophages

3 討論

AS是心腦血管疾病的病理基礎(chǔ)，可引發(fā)腦卒中、心肌梗塞和急性冠狀動脈綜合征，是世界范圍內(nèi)致殘和死亡的主要原因之一。由于缺乏對AS治療有效并無副作用的藥物，目前研究熱點(diǎn)是尋找毒性小，替代療法療效高的新藥物。胡黃連苷Ⅱ是從傳統(tǒng)中草藥胡黃連（clematis chinensis）中提取的主要活性成分之一，具有抗炎活性。LAN等［19］研究表明胡黃連苷Ⅱ通過NF-κB途徑抑制脊髓反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥，從而減輕大鼠CCI誘導(dǎo)的神經(jīng)性疼痛。

然而，關(guān)于胡黃連苷Ⅱ在AS形成中的確切作用和機(jī)制知之甚少。本研究證明了黃連苷Ⅱ可以通過增強(qiáng)ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞自噬，抑制泡沫細(xì)胞的形成、膽固醇積累和炎癥反應(yīng)。此外，還發(fā)現(xiàn)胡黃連苷Ⅱ通過自噬調(diào)節(jié)ABCA1/ABCG1表達(dá)和NLRP3炎癥體，從而對ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞發(fā)揮了保護(hù)作用。

泡沫細(xì)胞的形成是由于巨噬細(xì)胞脂質(zhì)代謝失衡，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)膽固醇的過度積累，巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇平衡主要通過膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，排出過多膽固醇以調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞內(nèi)外平衡。膽固醇外流是由膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCA1和ABCG1介導(dǎo)［20］。ABCA1由于具有膽固醇外排和磷脂調(diào)節(jié)功能而被稱為膽固醇外排調(diào)節(jié)蛋白，ABCG1則可誘導(dǎo)膽固醇與高密度脂蛋白（HDL）結(jié) 合 外 排。YUAN等［21］證 實(shí) 在ABCA1和ABCG1敲除小鼠中，會加重泡沫細(xì)胞及AS的形成。此外，最近的研究確定了幾種源自傳統(tǒng)中草藥的有效成分，如白樺蛋白和亮氨酸，均是通過上調(diào)巨噬細(xì)胞ABCA1和ABCG1的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出并減少細(xì)胞內(nèi)膽固醇積累，有望成為減緩或防治AS的候選藥物［22］。本研究證明胡黃連苷Ⅱ抑制了THP-1巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞。此外，胡黃連苷Ⅱ上調(diào)ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞ABCA1/ABCG1的表達(dá)，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞膽固醇外流。這些發(fā)現(xiàn)表明胡黃連苷Ⅱ通過調(diào)節(jié)ABCA1/ABCG1有效促進(jìn)膽固醇外排，從而減少泡沫細(xì)胞的形成。

已有文獻(xiàn)報道氧化應(yīng)激和ox-LDL等因素可引發(fā)AS的形成，而細(xì)胞自噬可有效減緩細(xì)胞炎癥并預(yù)防AS的形成［23］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示當(dāng)ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞時，beclin1表達(dá)和LC3Ⅱ/Ⅰ顯著增加。據(jù)報道，適度的激活巨噬細(xì)胞自噬可調(diào)節(jié)膽固醇的外排從而抑制泡沫細(xì)胞的形成和炎癥反應(yīng)，進(jìn)而預(yù)防AS的形成［23-24］。在本研究中，黃連苷Ⅱ處理ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞后，LC3Ⅱ和beclin1的表達(dá)以及LC3Ⅱ/Ⅰ進(jìn)一步增加，表明黃連苷Ⅱ促進(jìn)自噬激活以阻止AS形成。另外，還發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞自噬活性與NLRP3炎癥小體之間呈負(fù)相關(guān)，NLRP3炎癥體被自噬負(fù)調(diào)控，黃連苷Ⅱ可能部分通過調(diào)節(jié)自噬介導(dǎo)的NLRP3炎性體抑制ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。

本研究證實(shí)了黃連苷Ⅱ通過促進(jìn)ox-LDL刺激的THP-1巨噬細(xì)胞中的自噬來促進(jìn)ABCA1/ABCG1依賴性膽固醇外排并抑制NLRP3炎癥體，從而抑制泡沫細(xì)胞的形成和炎癥反應(yīng)。為黃連苷Ⅱ在預(yù)防和治療AS中提供了基礎(chǔ)理論。