韓光遠(yuǎn) 劉可心 魏汝恒 苗珠月 馬存根 肖保國(guó) 黃建軍 宋麗娟

（山西中醫(yī)藥大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)研究中心/國(guó)家中醫(yī)藥管理局多發(fā)性硬化益氣活血重點(diǎn)研究室，晉中 030619）

羥基紅花黃色素A對(duì)糖氧剝奪/復(fù)糖復(fù)氧后星形膠質(zhì)細(xì)胞缺血性腦血管病嚴(yán)重危害人類健康，炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激是其重要的病理生理過程。星形膠質(zhì)細(xì)胞（astrocyte，Ast）作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）中分布最廣、數(shù)量最多的細(xì)胞類型，在腦缺血缺氧后過度活化會(huì)引起膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）高表達(dá)，其在炎癥反應(yīng)中的雙重作用備受關(guān)注：腦缺血后，反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞（reactive astrocytes，RAs）一方面通過產(chǎn)生抗炎細(xì)胞因子和形成膠質(zhì)瘢痕等發(fā)揮保護(hù)作用，另一方面又可以通過釋放促炎因子和氧化應(yīng)激損傷等進(jìn)一步破壞腦組織［1-3］。研究發(fā)現(xiàn)，Ast在缺血性腦卒中炎癥反應(yīng)中的雙重作用可能與其極化形成A1、A2兩種不同亞型密切相關(guān)［4］。另外，腦缺血再灌注過程中Ast氧化應(yīng)激會(huì)產(chǎn)生大量的酶使氧化-抗氧化系統(tǒng)紊亂，從而導(dǎo)致細(xì)胞損傷［5］。

作為治療缺血性腦卒中的經(jīng)典活血代表藥物紅花的有效單體成分羥基紅花黃色素A（hydroxysafflor yellow A，HSYA），其相對(duì)分子質(zhì)量為612（分子結(jié)構(gòu)式如圖1所示），具有抗缺血、抗炎、抗氧化及抗血栓的作用，對(duì)多種神經(jīng)細(xì)胞都有保護(hù)功能［6-8］。但目前HSYA對(duì)糖氧剝奪/復(fù)糖復(fù)氧（oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R）后Ast的作用鮮有報(bào)道。本研究利用原代Ast，觀察HSYA對(duì)OGD/R狀態(tài)下Ast的保護(hù)作用并探索其相關(guān)機(jī)制，為臨床應(yīng)用活血化瘀藥有效防治缺血性腦卒中提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并試圖為臨床腦缺血的治療提供新的治療靶點(diǎn)。

圖1 HSYA的分子結(jié)構(gòu)式Fig.1 Molecular structure of HSYA

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物C57BL/6小鼠，體質(zhì)量16~18 g，購(gòu)自北京斯貝福動(dòng)物有限公司。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵照山西中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查委員會(huì)制定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理原則執(zhí)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010。

1.1.2 主要藥物與試劑HSYA（批號(hào)：4261）購(gòu)自上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司；DMEM培養(yǎng)液、無糖型DMEM培養(yǎng)液和胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；胰酶、雙抗、MTT檢測(cè)試劑盒、LDH檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；抗C3抗體（ab200999）、抗S100A10抗體（ab76472）購(gòu)自美國(guó)Abcam有限公司；抗PTX3抗體（D262383）購(gòu)自上海生物工程有限公司；抗GFAP抗體（3670S）、抗p-NF-κB抗體（8242S）、抗p-STAT3抗體（9145S）購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公 司；HRP-羊 抗 兔 二 抗（BST15I16B15J55）、ALexa FluorTM488標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗購(gòu)自Thermo Fisher公司；TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自Elabscience生物科技有限公司；CAT、SOD、GSH-Px、ROS、RNS、MDA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司。

1.1.3 主要儀器多用途低溫高速離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；MCO175型CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自日本SANYO公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；Bugbox M厭氧工作站購(gòu)自英國(guó)Baker Ruskinn公司；熒光顯微鏡購(gòu)自德國(guó)徠卡公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠原代Ast培養(yǎng)無菌條件下取新生1~3 d C57BL/6小鼠大腦皮質(zhì)，在預(yù)冷的DMEM中剝離腦膜和血管，用吸管吹打形成單細(xì)胞懸液；4℃、1 500 r/min離心10 min。棄上清，加DMEM完全培養(yǎng)液繼續(xù)吹打，過100目篩網(wǎng)，再次離心，1 500 r/min離心5 min。棄上清，加完全培養(yǎng)液重懸。接種于多聚賴氨酸包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。每3 d換液1次，直到細(xì)胞鋪滿整個(gè)瓶底，然后置于恒溫?fù)u床，37℃、180 r/min離心18 h，以去除小膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。2.5 g/L胰酶消化傳代。免疫熒光鑒定Ast純度≥95%用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 MTT檢測(cè)Ast活力將第二代Ast接種于96孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%時(shí)，加入含終濃度為0、1、5、25、75、150 μmol/L HSYA的DMEM培養(yǎng)液，按上述實(shí)驗(yàn)條件繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后小心吸棄上清，加入90 μl DMEM，再加入10 μl MTT，繼續(xù)孵育4 h，終止培養(yǎng)。然后吸棄上清，加入110 μl Formanzan溶解液，搖床低速振蕩孵育10 min，使結(jié)晶全部溶解。酶標(biāo)儀490 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度A值。細(xì)胞活力=（A樣本-A空白）/（A對(duì)照-A空白）×100%。

1.2.3 LDH檢測(cè)HSYA對(duì)Ast的毒性（漏出率）將第二代Ast接種于96孔板中，待細(xì)胞生長(zhǎng)至80%時(shí)，加入終濃度為0、1、5、25、75、150 μmol/L HSYA的DMEM培養(yǎng)液，按上述實(shí)驗(yàn)條件繼續(xù)培養(yǎng)。取上清液檢測(cè)LDH活性。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和試劑盒測(cè)得LDH活性。

1.2.4 相關(guān)實(shí)驗(yàn)分組及處理為探討HSYA對(duì)Ast的保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組（Normal）、模型組（OGD/R）和HSYA干預(yù)組（OGD/R+HSYA）。正常對(duì)照組在培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)，模型組在糖氧剝奪期間更換無糖DMEM培養(yǎng)液，放入95%N2、5%CO2的厭氧箱中孵育，4 h后更換為含糖DMEM培養(yǎng)液，然后放在常氧培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育24 h。HSYA組在糖氧剝奪期間更換為含終濃度為75 μmol/L HSYA無糖培養(yǎng)液。

1.2.5 免疫熒光染色細(xì)胞爬片用4%多聚甲醛固定30 min，加入抗GFAP抗體，4℃孵育過夜，PBST洗滌，加入熒光二抗室溫孵育2 h，PBST洗滌，加入DAPI染液避光孵育5 min，50%甘油封片，熒光顯微鏡下觀察取圖像，Image-ProPlus6.0軟件分析結(jié)果。

1.2.6 RT-qPCR檢測(cè)按照RNA提取試劑盒說明書從細(xì)胞中提取總RNA。按照TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA；逆轉(zhuǎn)錄條件：37℃15 min，85℃5 s。特異性擴(kuò)增引物由上海生工生物工程股份有限公司合成（表1）。按照2×M5 HiPer SYBR Premix EsTaq試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。反應(yīng)體系（20 μl）：SYBR Premix EsTaq 10 μl，上下游引物各0.4 μl，ddH2O 7.2 μl，cDNA模板2 μl。擴(kuò)增條件：預(yù)變性95℃30 s；變性95℃5 s，退火62℃30 s，延伸72℃30 s，重復(fù)45個(gè)循環(huán)。使用2-ΔΔCt計(jì)算mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表1 RT-qPCR引物種類及其序列Tab.1 RT-qPCR primer types and sequences

1.2.7 Western blot檢測(cè)提取各組蛋白，用BCA法檢測(cè)蛋白濃度。采用8%、10%凝膠SDS-PAGE電泳，濕轉(zhuǎn)法將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%的脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入一抗，按比例稀釋，4℃過夜，TBST清洗后加入二抗37℃孵育2 h，TBST洗去二抗，加入顯影液。Bioanalytical Imaging System顯影。目的條帶采用Image J軟件進(jìn)行圖像分析。

1.2.8 ELISA檢測(cè)收集培養(yǎng)細(xì)胞上清液，細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10測(cè)定采用相應(yīng)的ELISA檢測(cè)試劑盒，氧化抗氧化指標(biāo)CAT、SOD、GSH-Px、ROS、RNS、MDA采用相應(yīng)的氧化損傷檢測(cè)試劑盒，具體操作方法按說明書推薦進(jìn)行，參照各細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用GraphPad Prism 8.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HSYA對(duì)Ast活性的影響采用MTT和LDH檢測(cè)HSYA對(duì)Ast的活性和毒性影響。如圖2A所示，各組數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)后無顯著差異（P>0.05），表明Ast在正常培養(yǎng)條件下經(jīng)不同濃度的HSYA處理后，并不影響細(xì)胞的活性和毒性，可根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇適當(dāng)濃度。如圖2B所示，Ast在OGD/R條件下，HSYA終濃度為75 μmol/L時(shí)Ast活力處于最高峰；如圖2C所示，相比正常對(duì)照組，模型組在OGD/R后Ast的LDH釋放量明顯增多（P<0.01）；75 μmol/L HSYA作用于OGD/R后的Ast時(shí)LDH釋放量明顯少于模型組（P<0.05）。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇終濃度為75 μmol/L HSYA作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)藥物的最佳濃度。

圖2 MTT和LDH檢測(cè)HSYA對(duì)Ast藥物安全性Fig.2 MTT and LDH testing HSYA for Ast drug safety

在倒置相差顯微鏡下觀察，可見正常組Ast貼壁生長(zhǎng)，呈星形或不規(guī)則形態(tài)，細(xì)胞與細(xì)胞之間緊密連接，透光度好；糖氧剝奪4 h，復(fù)糖復(fù)氧24 h后鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)Ast數(shù)量減少，突觸回縮，細(xì)胞間緊密連接斷開，細(xì)胞腫脹變形，從形態(tài)學(xué)觀察可以看到氧糖剝奪對(duì)Ast有一定的損傷。75 μmol/L的HSYA可減輕OGD/R后Ast的損傷（圖3A）。

免疫熒光染色顯示，Ast的活化指標(biāo)GFAP蛋白在正常組中表達(dá)較少（圖3B）。但在OGD/R損傷后，GFAP蛋白在模型組較正常組表達(dá)顯著增高，HSYA干預(yù)使GFAP蛋白的表達(dá)明顯低于模型組。免疫熒光統(tǒng)計(jì)分析顯示，模型組和HSYA干預(yù)組GFAP蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度明顯高于正常組，但HSYA組較對(duì)照組顯著降低（圖3C，P<0.05）。Western blot檢測(cè)顯示，模型組和HSYA組Ast活化標(biāo)志物GFAP蛋白表達(dá)明顯高于正常組，但HSYA組較對(duì)照組顯著降低（圖3D，P<0.05）。

圖3 HSYA對(duì)Ast活化的影響Fig.3 Effect of HSYA on activation of Ast

2.2 HSYA對(duì)OGD/R后Ast炎癥反應(yīng)的影響在mRNA水平上，相較于正常對(duì)照組，模型組TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10 mRNA水 平 均 顯 著升 高（P<0.05）；相較于模型組，HSYA干預(yù)使TNF-α、IL-1β、IL-6水平明顯降低（P<0.05），而顯著升高IL-10水平（P<0.05，圖4A）。ELISA結(jié)果表明，模型組TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10蛋白水平顯著高于正常對(duì)照組（P<0.05），HSYA干預(yù)組則明顯降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平，顯著增加IL-10水平（P<0.05，圖4B），與前述PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。這表明OGD/R可刺激Ast釋 放 炎 癥 因 子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10，而HSYA可有效抑制Ast在OGD/R后促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌，而增加抑炎因子IL-10的分泌。

圖4 HSYA對(duì)OGD/R后Ast炎癥因子的影響Fig.4 Effect of HSYA on Ast inflammatory factors after OGD/R

2.3 HSYA對(duì)OGD/R后Ast極化的影響首先采用RT-PCR檢測(cè)A1極化指標(biāo)C3和A2極化指標(biāo)S100A10以及PTX3 mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示（圖5A），A1指標(biāo)C3 mRNA水平模型組高于正常對(duì)照組（P<0.05），HSYA干預(yù)組低于模型組（P<0.05）。模型組A2極化指標(biāo)S100A10和PTX3 mRNA水平均低于正常對(duì)照組（P<0.05），而HSYA干預(yù)組低于正常對(duì)照組，但高于模型組（P<0.05）。同樣，在蛋白水平上，Western blot檢測(cè)結(jié)果也表明（圖5B），相比于模型組，HSYA可顯著增加OGD/R后S100A10和PTX3的表達(dá)（P<0.05），降低C3的表達(dá)（P<0.05）。

圖5 HSYA對(duì)OGD/R后Ast極化的影響Fig.5 Effect of HSYA on polarization of Ast after OGD/R

2.4 HSYA對(duì)OGD/R后Ast p-NF-κB（p65）和p-STAT3蛋白水平的影響采用Western blot法檢測(cè)p-NF-κB（p65）和p-STAT3蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示（圖6），模型組p-NF-κB（p65）和p-STAT3蛋白明顯高于正常組（P<0.05）；而HSYA干預(yù)組低于模型組（P<0.05）。

圖6 HSYA對(duì)OGD/R后Ast p-NF-κB（p65）和p-STAT3蛋白水平的影響Fig.6 Effect of HSYA on protein levels of Ast p-NF-κB（p65）and p-STAT3 after OGD/R

2.5 HSYA對(duì)OGD/R后Ast氧化應(yīng)激作用的影響圖7顯示，模型組CAT、SOD、GSH-Px的含量均顯著降低，而RNS、ROS、MDA均顯著升高，且與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。經(jīng)HSYA干預(yù)處理后，CAT、SOD、GSH-Px含量有所增加，RNS、ROS和MDA含量有所降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

圖7 HSYA對(duì)OGD/R后Ast氧化應(yīng)激作用的影響Fig.7 Effect of HSYA on oxidative stress of Ast after OGD/R

2.6 HSYA對(duì)OGD/R后Ast Nrf2和HO-1蛋白 水 平的影響通過Western blot檢測(cè)氧化應(yīng)激相關(guān)通路Nrf2/HO-1。結(jié)果顯示（圖8），模型組Nrf2和HO-1蛋白明顯低于正常組（P<0.05）；而HSYA干預(yù)組則高于模型組（P<0.05）。

圖8 HSYA對(duì)OGD/R后Ast Nrf2和HO-1蛋白水平的影響Fig.8 Effect of HSYA on protein levels of Ast Nrf2 and HO-1 after OGD/R

3 討論

腦缺血后，Ast被激活成為RAs。Ast在腦缺血缺氧進(jìn)程中同時(shí)具有保護(hù)和損傷雙重作用［9］。這種雙重作用可能與RAs進(jìn)一步極化形成兩種不同的亞型A1和A2密切相關(guān)。A1和A2動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和炎癥微環(huán)境。A1促進(jìn)相關(guān)損傷，C3被認(rèn)為是A1的特征性標(biāo)記；而A2發(fā)揮著保護(hù)作用，S100A10、PTX3被認(rèn)為是A2的特征性標(biāo)記［10］。核因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）作為腦缺血后炎癥反應(yīng)中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子［11］，在Ast的激活以及神經(jīng)炎癥的發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用［12］?；罨腘F-κB可通過調(diào)控炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6的產(chǎn)生促進(jìn)炎癥反應(yīng)。TSUBAKI等［13］和CAO等［14］的研究表明，抑制或阻斷NF-κB活化可下調(diào)細(xì)胞中TNF-α、IL-1β和IL-6表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)。另外，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducers and activators of transcription 3，STAT3）也在腦缺血后Ast中表達(dá)并且活性發(fā)生改變［15］。IL-6的高表達(dá)可以促進(jìn)STAT3持續(xù)磷酸化，IL-6/STAT3也是細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路，其可介導(dǎo)促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和抑炎細(xì)胞因子IL-4、IL-10等多種炎癥因子的產(chǎn)生。Ast在腦缺血期間可通過NF-κB及STAT3通路來誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子和神經(jīng)毒性介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷和死亡［16］。通過PCR以及Western blot技術(shù)檢測(cè)A1與A2的特異性標(biāo)志和炎癥因子的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Ast在OGD/R后，C3被顯著誘導(dǎo)高表達(dá)，而S100A10、PTX3低表達(dá)，且炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌增加。這表明，Ast在OGD/R后確實(shí)存在著向A1極化的方向，并且促進(jìn)了致炎因子的釋放。且在OGD/R時(shí)，A1的表達(dá)比A2更高。此外，還對(duì)影響Ast炎癥和極化的p-NF-κB（p65）以及p-STAT3也做了相應(yīng)的研究，結(jié)果表明OGD/R可 以 上 調(diào)p-NF-κB（p65）以 及p-STAT3的表達(dá)。

目前，已有大量相關(guān)研究表明，HSYA具有抗缺血、抗炎和抗氧化等作用［17-18］。在體內(nèi)腦缺血損傷模型中，HSYA可以增強(qiáng)腦缺血-再灌注大鼠缺血半暗帶區(qū)Ast的活性［19］。在體外模型中，HSYA還可以抑制OGD誘導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)［20］。在Aβ誘導(dǎo)的阿爾茨海默病模型中，HSYA可以抑制小膠質(zhì)細(xì)胞和Ast的活化從而降低炎癥反應(yīng)［21］。本研究發(fā)現(xiàn)HSYA干預(yù)能夠降低OGD/R損傷后Ast的活化，減少GFAP的表達(dá)并調(diào)節(jié)A1與A2的平衡。同時(shí)，經(jīng)HSYA處理后，能夠減少促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6分泌，增加IL-10分泌，從而減輕炎癥反應(yīng)。HSYA還可以降低p-NF-κB（p65）以及p-STAT3的表達(dá)。表明HSYA可能是通過抑制p-NF-κB（p65）以及p-STAT3來調(diào)節(jié)腦缺血后Ast炎癥和極化。

同樣，HSYA也在抗氧化應(yīng)激方面發(fā)揮了調(diào)節(jié)作用。田京偉等［22］在MCAO模型中發(fā)現(xiàn)，HSYA對(duì)缺血腦細(xì)胞線粒體損傷有明顯的保護(hù)作用，能明顯降低腦缺血大鼠腦線粒體MDA含量，升高SOD活性。本研究表明HSYA同樣可以增加OGD/R損傷后Ast CAT、SOD、GSH-Px的活性，降低RNS、ROS、MDA含量，減輕OGD/R后Ast氧化應(yīng)激導(dǎo)致的損傷。核因子E2相關(guān)因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）是細(xì)胞內(nèi)抗氧化應(yīng)激功能的重要轉(zhuǎn)錄因子，也是防治腦缺血的重要潛在靶點(diǎn)［23］?；罨腘rf2可啟動(dòng)下游信號(hào)HO-1，進(jìn)而發(fā)揮抗氧化應(yīng)激、清除自由基等作用［24-25］。劉瑩等［26］研究表明，青蒿琥酯通過Nrf2/HO-1信號(hào)通路增強(qiáng)了腦缺血后的抗氧化作用，能保護(hù)腦組織。周海燕等［27］研究發(fā)現(xiàn)吳茱萸茨堿可能通過激活Nrf2/HO-1通路減輕局灶性腦缺血大鼠氧化應(yīng)激損傷并緩解氧化-抗氧化失衡。由此可見，越來越多的研究表明，Nrf2/HO-1通路的激活可減輕腦缺血引起的氧化應(yīng)激損傷。本研究表明，HSYA增加OGD/R后Nrf2/HO-1的表達(dá)，提示HSYA可能通過Nrf2/HO-1通路抑制腦缺血后氧化應(yīng)激，減輕腦損傷。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)HSYA可以降低Ast活化，抑制炎癥因子的釋放并影響極化水平，這可能是通過抑制p-NF-κB（p65）與p-STAT3通路實(shí)現(xiàn)的；同時(shí)，HSYA也可能通過Nrf2/HO-1通路減輕缺血后氧化應(yīng)激損傷，表明HSYA可能在腦缺血后Ast中起著復(fù)雜的多重作用；即HSYA對(duì)OGD/R后Ast一方面能夠減輕炎癥反應(yīng)并調(diào)節(jié)A1與A2的表型，另一方面發(fā)揮抗氧化作用降低氧化損傷，共同減輕缺血性損害，這為HSYA治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供理論依據(jù)。但本研究只在細(xì)胞模型上做了研究，在動(dòng)物體內(nèi)還存在著各種復(fù)雜的反應(yīng)機(jī)制，HSYA在動(dòng)物體內(nèi)是否具有同樣的保護(hù)作用，還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。