郝校鵬 ，周利，趙玉洋，王游游，康利平，楊健*

1. 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院（鄭州 450046）；2. 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心，道地藥材國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地（北京 100700）

決明子，別名草決明、馬蹄決明、馬蹄子等，為豆科植物決明Cassia obtusifoliaL.或小決明Cassia toraL.的干燥成熟種子[1]，具有清肝明目、潤(rùn)腸通便等功效，并因其具有降血壓、降血脂、保肝及抑菌等活性[2-3]，同時(shí)又可作為食品和保健飲科的良好原料，已開(kāi)發(fā)許多保健飲料和食品[4]，是著名的藥食同源中藥品種之一[5]。市場(chǎng)上決明子的質(zhì)量良莠不齊，其質(zhì)量問(wèn)題關(guān)系到消費(fèi)者的食用安全和臨床用藥安全[6]，又由于現(xiàn)代工業(yè)的快速發(fā)展，決明子野生資源不能滿足需求，人工種植又濫用農(nóng)藥化肥，污染加劇，食品污染日趨嚴(yán)重[7]，如重金屬及有害元素含量超標(biāo)。重金屬及有害元素對(duì)人體的代謝和正常的生理作用會(huì)造成明顯的損害，因此，引起越來(lái)越多學(xué)者關(guān)注[8-12]。

常規(guī)檢測(cè)方法如原子吸收分光光度法、原子熒光光譜法等存在操作復(fù)雜、效率低、精度低等缺點(diǎn)，而ICP-MS法具有靈敏度高、干擾小、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，普及率較高[13]。試驗(yàn)采用ICP-MS法，測(cè)定不同產(chǎn)地來(lái)源的24批決明子樣品中Pb，Cd，As，Hg，Cu，Li，Be，V，Cr，Mn，Co，Ni，Mo，Sn，Sb，Ba，Dy，Tl 18種重金屬及有害元素的殘留量，為進(jìn)一步控制決明子的質(zhì)量、保證其用藥安全提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

ICAP-Q電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（美國(guó)賽默飛公司）；Mars 6微波消解儀（美國(guó)CEM公司）；MM 400混合球磨儀（德國(guó)Retsch公司）；AUW120D電子天平（日本島津公司）；Millipore Mill-Q超純水機(jī)（美國(guó)Millipore公司）；DST-1000酸純化器（美國(guó)Savillex公司）。

標(biāo)準(zhǔn)溶液由Muti-element Solution 1和Muti-element Solution 2（美國(guó)SPEX CertiPerp公司）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制而成；硝酸（分析級(jí)，美國(guó)默克公司，由酸純化器二次純化）；過(guò)氧化氫溶液（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；水（經(jīng)Millipore Milli-Q水處理系統(tǒng)處理后的去離子水）。

決明子樣品于2016年10月至2017年1月分別收集于河北、山東、安徽等10個(gè)省份共20批，越南進(jìn)口決明子4批，總計(jì)24批；所有樣品經(jīng)中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心康利平副研究員鑒定均為豆科植物決明Cassia obtusifoliaL.或小決明Cassia toraL.的干燥成熟種子；經(jīng)球磨儀打粉后過(guò)0.250 mm（60目）篩備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 ICP-MS條件

射頻功率15 500 W；采樣深度5.0 mm；輔助氣和載氣（均為氬氣）流速分別為0.8 L/min和1.05 L/min；冷氣流流速14.0 L/min；霧化器類型為同心霧化器；霧化室溫度2 ℃；掃描方式為STD模式；采集點(diǎn)數(shù)為3；重復(fù)次數(shù)3次。

2.2 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制

精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2%硝酸溶液稀釋，制成各元素質(zhì)量濃度均為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，4 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 供試品溶液制備

2.3.1 測(cè)定Hg供試品溶液

取0.1 g決明子藥材粉末，精密稱定，置壓力消解罐中，加入5 mL硝酸，浸泡過(guò)夜，于160 ℃的電熱鼓風(fēng)干燥箱中消解4 h，冷卻；取消解內(nèi)罐置電熱板上，于120 ℃緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡，放冷，用超純水定容至10 mL，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，即得測(cè)定Hg供試品溶液。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。

2.3.2 測(cè)定其他元素供試品溶液

精確稱取0.1 g決明子藥材粉末置聚四氟乙烯微波消解罐中，依次加入1 mL過(guò)氧化氫溶液和5 mL硝酸，密閉消解罐，置于微波消解儀中消解。消解程序：第一步，升溫時(shí)間6 min，100 ℃保持3 min；第二步，升溫時(shí)間7 min，160 ℃保持4 min；第三步，升溫時(shí)間6 min，190 ℃保持30 min；消解功率1 600 W。消解完全后，自然冷卻，取消解內(nèi)罐置電熱板上180 ℃趕酸至剩余1 mL，放冷，用超純水定容至10 mL，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，即得測(cè)定其他元素供試品溶液。按相同方法做空白對(duì)照溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察

分別精密量取適量混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，加2%硝酸溶液稀釋，分別配成含Cr、Mn、Ni、Cu、Ba的1，2，5，10，50，100，200和500 ng/mL；Li，Be，V，Co，As，Mo，Cd，Sn，Sb，Dy，Tl，Pb和Hg 0.1，0.2，0.5，1，2，5，10，50 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)混合溶液（Hg為單標(biāo)溶液），以響應(yīng)信號(hào)值為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（表1）。結(jié)果顯示，各元素的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上。將標(biāo)準(zhǔn)品溶液逐步稀釋，直至各元素信號(hào)值為空白溶液信號(hào)值的3倍左右（S/N≈3），此時(shí)各元素的質(zhì)量濃度即為該元素的檢出限。

表1 18種元素的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

2.4.2 精密度考察

精密吸取同一混合對(duì)照品溶液，按照2.1的方法分別連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各元素響應(yīng)信號(hào)值SRSD，均小于3.5%，表明儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品溶液（河北深州），按2.1的方法分別于0，2，4，8，12，18和24 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄各元素響應(yīng)信號(hào)值；計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)間各元素響應(yīng)信號(hào)值的SRSD均小于4%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性考察

取約0.1 g河北深州決明子樣品粉末，平行操作6份，分別按各供試品溶液的制備方法操作，以2.1的條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算各元素含量。結(jié)果表明，各元素含量SRSD在1.65%～6.79%之間，在痕量分析的要求下，重復(fù)性良好，可以滿足試驗(yàn)檢測(cè)要求。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn)

取6份已知各元素含量的河北深州決明子樣品，精密稱定，每份0.1 g；分別加入適量2.2的各元素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，按照2.3的方法制備各供試品溶液，按照2.1的方法測(cè)定，記錄各元素響應(yīng)信號(hào)值，計(jì)算得到各元素的平均加樣回收率在94.6%～108.5%之間，SRSD均小于10%，表明在痕量分析的要求下，各元素回收率良好，該方法有效可行。

2.5 樣品重金屬及有害元素含量測(cè)定

2.5.1 含量測(cè)定及結(jié)果

分別精密稱取24批不同來(lái)源的決明子樣品，按2.3的方法制備各供試品溶液，按2.1的方法測(cè)定，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同來(lái)源決明子樣品18種重金屬及有害元素含量測(cè)定結(jié)果（n=3） 單位：mg/kg

2.5.2 結(jié)果分析

24批不同來(lái)源的決明子樣品中Li，Be，V，Co，As，Mo，Cd，Sn，Sb，Dy，Tl，Hg和Pb 13種重金屬及有害元素在決明子樣品中的含量相對(duì)較低，其含量均未超過(guò)1 mg/kg。Cr，Ni和Cu 3種元素在決明子樣品中的平均含量達(dá)到1～10 mg/kg；其中Cr元素以河北深州產(chǎn)決明子含量最高，達(dá)3.92 mg/kg，山東泰安產(chǎn)樣品含量最低，僅為0.49 mg/kg，前者約為后者的8倍；Ni元素以湖北蘄春產(chǎn)決明子含量最高，達(dá)2.78 mg/kg，陜西商洛產(chǎn)樣品含量最低，為0.55 mg/kg；Cu元素含量最高的為河北青縣決明子，達(dá)8.32 mg/kg，安徽歙縣產(chǎn)決明子Cu元素含量最低，為5.22 mg/kg。Mn和Ba元素在24批決明子樣品中的平均含量相對(duì)較高，分別達(dá)到15.29 mg/kg和17.15 mg/kg；前者以江西樟樹(shù)產(chǎn)決明子含量最高，達(dá)到34.17 mg/kg，四川綿陽(yáng)樣品含量最低，僅為11.27 mg/kg；后者含量最高的亦為湖北蘄春決明子，達(dá)到47.53 mg/kg，含量最低的為越南進(jìn)口1樣品，僅1.71 mg/kg，相差達(dá)26.8倍。

中國(guó)藥典2020年版一部中對(duì)重金屬及有害元素的限量要求為Pb含量≤5 mg/kg，Hg含量≤0.2 mg/kg，As含量≤2 mg/kg，Cd含量≤1 mg/kg，Cu含量≤20 mg/kg；按照該標(biāo)準(zhǔn)，不同產(chǎn)地決明子樣品中的Pb，Hg，As，Cd，Cu均符合限量要求。參考《美國(guó)藥典》USP40-NF35的重金屬限量要求標(biāo)準(zhǔn)，有10批決明子樣品中Pb元素含量超出限量標(biāo)準(zhǔn)，超標(biāo)率達(dá)41.7%，其含量平均超限達(dá)48.0%。按照USP40-NF35的限量標(biāo)準(zhǔn)，越南進(jìn)口的4批決明子Pb元素含量均超出限量。

3 討論與結(jié)論

按《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版檢測(cè)人參、丹參、金銀花、甘草等39種中藥材中鉛、砷、鎘、汞和銅5種重金屬元素的含量，與2015年版相比，又新增人參、刀豆、山茱萸、白芷、冬蟲夏草、當(dāng)歸、梔子、桃仁、黃精、葛根、酸棗仁11種[14]，對(duì)中藥材的重金屬元素殘留愈加重視?！睹绹?guó)藥典》USP40版監(jiān)測(cè)藥品中的重金屬和有害元素達(dá)24種[15]。中藥材的產(chǎn)地或種植方式的不同，均會(huì)導(dǎo)致重金屬污染水平差異[16]，炮制加工過(guò)程又不同程度地減少或引入重金屬殘留物[17]。因此著重中藥材產(chǎn)區(qū)的環(huán)境調(diào)查，并嚴(yán)格控制化肥和農(nóng)藥的使用，加強(qiáng)中藥飲片加工管理，從源頭上減少重金屬污染的風(fēng)險(xiǎn)[18]。

試驗(yàn)采用ICP-MS技術(shù)，建立同時(shí)測(cè)定決明子中18種重金屬及有害元素的方法，該方法簡(jiǎn)單快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，為決明子藥材的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)，作為常用的藥食同源的品種之一，關(guān)乎消費(fèi)者的食用安全和臨床用藥安全，對(duì)決明子質(zhì)量的持續(xù)監(jiān)測(cè)和控制十分必要。試驗(yàn)通過(guò)對(duì)不同來(lái)源的24批決明子樣品中的18種重金屬及有害元素進(jìn)行分析，可以看出不同產(chǎn)地決明子中重金屬及有害元素的含量有較大差異，部分產(chǎn)地藥材重金屬含量超過(guò)美國(guó)藥典的限量要求，但均符合中國(guó)藥典限量要求。