張建軍 牟文慧

臨沂市農(nóng)業(yè)學(xué)校，山東莒南 276600

小花棘豆（Oxytropis glabra）又稱醉馬草，是豆科棘豆屬多年生草本植物，整株植物均有毒性[1-2]。Molyneux 等[3]研究認(rèn)為，苦馬豆素（Swainsonine ，SW）是小花棘豆中毒的主要有毒成分，SW 通過抑制細(xì)胞內(nèi)溶酶體α-甘露糖苷酶（α-mannosdase，AMA）活性，從而使低聚寡糖（Oligosaccharides）代謝發(fā)生障礙[4-5]，同時SW 也可以通過抑制高爾基體內(nèi)α-甘露糖苷酶Ⅱ的活性，從而影響N-糖蛋白（N-glycoprotein）的新陳代謝過程[6-7]。楊桂云等[8]、于榮敏等[9]從小花棘豆中提取出了黃花堿等8 種生物堿，并確定了生物堿是主要毒性成分。黃花堿（Thermopsine，Ts）屬于多羥基喹諾里西啶（Polyhydroxyquinolizidine）類生物堿的一種，對動物的神經(jīng)節(jié)、延髓及大腦皮層等均有抑制作用[10-11]。家畜小花棘豆中毒的臨床癥狀主要有反應(yīng)遲鈍，目光呆滯，運動失調(diào)，同時后肢向外彎曲，嚴(yán)重者癱瘓，頭部水平震顫或左右搖動，直至死亡[12-13]。此外，還會造成母畜不孕、流產(chǎn)、死胎和胎兒畸形，同時造成公畜不育，嚴(yán)重影響動物繁殖機(jī)能和品種改良[14-15]，給我國草原畜牧業(yè)的發(fā)展帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失[16]。免疫器官的臟器生長指數(shù)是衡量機(jī)體免疫功能的初步指標(biāo)[17]，胸腺和脾臟是動物機(jī)體重要的免疫器官，胸腺是機(jī)體內(nèi)T 淋巴細(xì)胞分化成熟的場所，脾臟內(nèi)的主要免疫細(xì)胞是B 淋巴細(xì)胞，T 淋巴細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫，B 淋巴細(xì)胞主要參與體液免疫[17]。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）試驗動物。昆明系小白鼠80 只，雌雄各半，體重（22±2）g，購于臨沂大學(xué)實驗動物中心。

2）試驗試劑和儀器。SW、Ts 由臨沂大學(xué)毒理實驗室從小花棘豆中提取，其純度為99.8%；生理鹽水購自安徽豐原藥業(yè)股份有限公司；BSA224S 電子分析天平購自德國賽多利斯公司。

1.2 方 法

1）動物試驗?zāi)Ｐ徒?。試驗用小白鼠隨機(jī)平均分為4 個大組（每組雌雄各半），分別是3 個試驗組（SW 組、Ts 組、H 組）和1 個對照組（D 組），每組小白鼠20 只。生物堿（SW、Ts 和二者混合物）用去離子水稀釋成0.5 mg/mL 的濃度，試驗組按照上述濃度胃內(nèi)灌服生物堿，對照組胃內(nèi)灌服去離子水。先將小白鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，空腹稱其體重，按體重的0.01 mL/g 胃內(nèi)灌服相應(yīng)濃度的生物堿或去離子水，并自由采食、飲水，每隔3 d 稱取小白鼠體重以調(diào)整灌服生物堿的量，于試驗的第7、14、21、28 和35 天每組分別隨機(jī)取4 只小白鼠稱量體重后脫頸處死，解剖取胸腺和脾臟。

2）小白鼠免疫器官臟器指數(shù)檢測。將解剖取出的胸腺和脾臟，去除其表面的血漬和多余的結(jié)締組織，用電子天平稱胸腺和脾臟的質(zhì)量（g），計算胸腺（脾臟）生長指數(shù)。胸腺（脾臟）生長指數(shù)=胸腺（脾臟）質(zhì)量（g）×103/小鼠體重（g）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 18.0 方差分析中的單因素方差分析，數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）形式表示，采用方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗，當(dāng)＜0.05 時有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 胸腺生長指數(shù)測定結(jié)果

整個試驗周期，胸腺生長指數(shù)的測定結(jié)果見表1。由表1可知，在試驗第7 天，3 個試驗組（SW組、Ts 組和H 組）的胸腺生長指數(shù)與D 組相比較均沒有產(chǎn)生明顯的差異；在試驗第14 天，SW、Ts 組與D 組相比較能夠顯著降低胸腺生長指數(shù)，而H 組與D 組相比較差異不顯著；在試驗第21 天，3 個試驗組的結(jié)果均顯著低于D 組；在試驗第28 天，SW、H組與D 組相比較胸腺生長指數(shù)極顯著降低，Ts 組與D 組相比較胸腺生長指數(shù)顯著降低；在試驗第35天，3 個試驗組與D 組相比較，結(jié)果均極顯著降低。

表1 胸腺生長指數(shù)

2.2 脾臟生長指數(shù)測定結(jié)果

整個試驗周期，脾臟生長指數(shù)的測定結(jié)果見表2。由表2可知，在第7 天，SW 組與D 組相比較，能夠顯著提高脾臟生長指數(shù)，Ts、H 組與D 組相比較沒有產(chǎn)生明顯的差異；在試驗第14 天，3 個試驗組的脾臟生長指數(shù)與D 組相比較結(jié)果均差異不顯著，但SW 組的結(jié)果比D 組要高，而Ts、H 組的結(jié)果比D 組要低；在試驗第21 天，SW 組與D 組比較差異不顯著，而Ts、H 組與D 組相比較脾臟生長指數(shù)顯著降低；在試驗第28 天，脾臟生長指數(shù)與胸腺生長指數(shù)的結(jié)果類似；在試驗第35 天，3 個試驗組與D組相比較，結(jié)果均極顯著降低。

表2 脾臟生長指數(shù)

3 討 論

家畜采食小花棘豆出現(xiàn)慢性中毒，對神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)產(chǎn)生損傷，同時對一些內(nèi)臟實質(zhì)器官（如肝臟、腎臟和脾臟等）也會帶來損傷作用[18]。臟器生長指數(shù)作為毒理學(xué)觀察亞慢性中毒的一個重要指標(biāo)，它的變化能夠說明動物的某個臟器受到毒物損傷的程度，能夠為進(jìn)一步更深入的檢查指明方向。

本試驗通過胸腺（脾臟）生長指數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，SW和Ts 都能對胸腺（脾臟）產(chǎn)生毒性作用。在試驗初期，SW 組能夠提高胸腺（脾臟）生長指數(shù)，說明SW在短時間內(nèi)能夠促進(jìn)動物胸腺（脾臟）的生長，從而促進(jìn)動物機(jī)體免疫器官的生長；隨著試驗時間的延長，胸腺（脾臟）生長指數(shù)不斷下降，到試驗第28 天，SW 組與對照組差異極顯著，表明SW 對胸腺（脾臟）生長指數(shù)產(chǎn)生了嚴(yán)重的抑制作用，從而抑制了動物機(jī)體免疫反應(yīng)的建立。Ts 組在試驗初期（≤7 d）對胸腺（脾臟）生長指數(shù)影響不顯著，這與Ts 是低毒生物堿相符；在試驗第14 天和第21 天，Ts 組胸腺（脾臟）生長指數(shù)顯著降低，從而抑制了動物機(jī)體免疫反應(yīng)的建立，但其產(chǎn)生抑制作用的時間與楊保收[19]研究的結(jié)果還存在一定的差異，這可能與進(jìn)行試驗的季節(jié)有一定關(guān)系，具體的原因還需要做進(jìn)一步研究。H 組出現(xiàn)了與SW 組類似的結(jié)果，從而說明試驗的初期主要是SW 發(fā)揮作用，能夠促進(jìn)動物機(jī)體免疫器官的生長，而在試驗的21 d 后2 種生物堿均對小白鼠臟器生長指數(shù)產(chǎn)生了抑制作用。

綜上所述，小花棘豆中的SW 和Ts 均能夠?qū)π叵伲ㄆ⑴K）生長指數(shù)產(chǎn)生抑制作用，SW 產(chǎn)生的抑制作用更加明顯，從而能夠損害動物機(jī)體的免疫器官，對動物機(jī)體產(chǎn)生毒害作用。