崔子杭，孫 昊，唐海峰，劉 歡，盤賽昆，楊 杰

(江蘇海洋大學 食品科學與工程學院，江蘇 連云港 222005)

近年來，群體性食品微生物中毒事件屢屢發(fā)生[1]，越來越多的消費者開始注重天然、綠色環(huán)保的生物保藏食品[2]，這改變了以往食品防腐劑以化學抗菌劑為主的格局。探索天然安全的抗菌物質作為食品防腐劑越來越為人們所重視，生物食品抗菌劑代替化學食品抗菌劑逐漸成為研究熱點。

作為一種生物安全菌株，乳酸菌因可以產(chǎn)生有機酸、細菌素等具有抑菌活性的物質[3]而在食品保藏領域受到極大關注，其產(chǎn)生的細菌素是由核糖體合成的、有抗菌活性的小分子多肽[4]，具有良好的熱穩(wěn)定性。將細菌素添加到食品保藏中，不僅不會對食品產(chǎn)生不良影響，還能夠延緩食品變質或病原體生長，同時改善傳統(tǒng)保存方法存在的營養(yǎng)成分流失、致癌終產(chǎn)物形成和食品風味改變等問題[5]。大多數(shù)細菌素的分子量小于10 kDa，對同種或近源的其他食品致病菌具有抗菌活性[6]。研究表明，幾乎所有乳酸菌都能產(chǎn)生細菌素，其中乳酸鏈球菌素Nisin已被應用于食品生產(chǎn)。

植物乳桿菌(Lactiplantibacillusplantarum)是自然界廣泛分布的一種乳酸菌，目前已應用于食品保健等領域。與其他種類的乳酸菌相比，植物乳桿菌在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生多種細菌素，對胃腸道應激以及其他各種應激具有良好的耐受性。植物乳桿菌細菌素因具有廣譜的抑菌活性和安全降解性而成為新型生物防腐劑研究的重點[7]。然而，植物乳桿菌細菌素的分離純化難度較大，所以需要在前期篩菌時投入大量資源和精力[8]。本研究從家庭自制泡菜鹵水中分離出可拮抗致病菌的乳酸菌，以求得到一株天然拮抗菌株，擬通過醇沉法、有機溶劑萃取法、凝膠過柱和反向高效液相色譜法等對植物乳桿菌所產(chǎn)生的拮抗物質進行分離純化，并通過研究所產(chǎn)拮抗物質的性質，為新型食品防腐劑的開發(fā)奠定理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 樣品取自貴州省黔東南苗族侗族自治州農(nóng)家自制泡菜鹵水，無菌環(huán)境下取樣。

1.1.2 指示菌 金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)CICC 23656，腐敗希瓦氏菌(Shewanella)ATCC 49138，大腸桿菌(Escherichiacoli)CICC 10003，蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)CICC 23828。

1.1.3 培養(yǎng)基和試劑 乳酸菌專用培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基。

硫酸銨，無水乙醇，pH 6.0磷酸緩沖液，乙酸乙酯，色譜級甲醇，Sephadex G50，Sephadex LH-20，1 mol/L鹽酸，1 mol/L氫氧化鈉，均為國產(chǎn)分析純。過氧化氫酶200 000 U/mg，蛋白酶K 30 U/mg，胰蛋白酶250 U/mg，胃蛋白酶3 000 U/g，購自阿拉丁生化科技股份有限公司。乳酸菌生理生化鑒定試劑盒購自海博生物技術有限公司。

1.1.4 儀器和設備 YXQ-LS-50SI立式壓力蒸汽滅菌器,上海訊博實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠；DK-S24型電熱恒溫水浴鍋,上海精宏實驗設備有限公司；DHG-9240A電熱恒溫鼓風干燥箱,上海一恒科技有限公司；DNP-9126型電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海精宏實驗設備有限公司；PHS-3CW Microprocessor pH/mV Merer,上海理大智能電子有限公司；SBS-160數(shù)控計滴自動部分收集器,上海滬西分析儀器廠有限公司；DNL-N電腦數(shù)顯定時恒流泵,上海滬西分析儀器廠有限公司；D-37520高速冷凍離心機,美國賽默飛世爾科技有限公司；3730XL測序儀,美國ABI；SH2-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵,上海越眾儀器設備有限公司；RE52-AA旋轉蒸發(fā)儀,上海亞榮生化儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 具有拮抗作用的乳酸菌的分離篩選與鑒定

(1)植物乳桿菌的分離與篩選。將鹵水樣品濾液以體積分數(shù)1%的接種量接種到MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃富集培養(yǎng)24 h。將樣品分別稀釋至10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，涂布于MRS固體培養(yǎng)基平板，37 ℃培養(yǎng)12 h。挑取表面光滑圓潤的單菌落接種到MRS液體培養(yǎng)基中發(fā)酵48 h，4 ℃條件下8 000 r/min離心20 min得到無細胞上清液[9]。根據(jù)抑菌試驗篩選出抑菌效果較強的乳酸菌。

(2)具有拮抗作用的植物乳桿菌發(fā)酵液抑菌活性的測定。采用打孔法[10]進行抑菌實驗。菌株接種前，用無菌生理鹽水調整菌體濃度至OD600 nm=0.5。以大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和腐敗希瓦氏菌為指示菌(指示菌在活化時，需在LB固體培養(yǎng)基上劃線，并傳代至5 mL LB液體培養(yǎng)基中)，在37 ℃，180 r/min條件下培養(yǎng)12 h，取1 mL接種到100 mL LB液體培養(yǎng)基中，后取100 μL涂布到LB固體培養(yǎng)基上，待菌液晾干后，用打孔器打孔，向孔中加入發(fā)酵上清液原液，用量80 μL/孔，設3組平行試驗[11]，37 ℃條件下培養(yǎng) 12 h。抑菌活性以抑菌圈直徑大小為參照[12]。獲得的具有抑菌活性的菌株保存于40%甘油管中，-80 ℃冰箱可長期保存[13]。

(3)具有拮抗作用的植物乳桿菌的形態(tài)學和生理生化鑒定。通過革蘭氏染色對分離的菌株進行初步鑒定，根據(jù)《伯杰氏細菌鑒定手冊》對篩選出的菌株進行形態(tài)觀察，并采用生理生化試劑盒對菌株進行生理生化鑒定[14]。

(4)具有拮抗作用的植物乳桿菌的16S rDNA鑒定。利用細菌基因組快速提取試劑盒提取菌株的基因組DNA,運用通用引物進行16S rDNA擴增[15]。聚合酶鏈反應(PCR)通用引物為27F和1 492R。PCR擴增方法采用常規(guī)法，反應程序為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s；54 ℃退火30 s；72 ℃延長90 s和35個循環(huán)；72 ℃最終擴展5 min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠進行電泳[16]，觀察結果并拍照。將PCR擴增的目的基因片段送至南京斯普林食品有限公司進行序列檢測。將序列與GENBANK數(shù)據(jù)庫中的序列進行比較，并用MEGA 7.0軟件對16S rDNA序列進行比較分析，構建系統(tǒng)發(fā)育樹[17]。

(5)具有拮抗作用的植物乳桿菌的生長曲線及pH測定。菌株接種前，用無菌生理鹽水調整菌體濃度至OD600 nm=0.5。以體積分數(shù)1%的接種量接種在MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)72 h，每隔2 h取樣。以空白MRS液體培養(yǎng)基為對照，在波長600 nm下測定吸光度，同步測定pH。

(6)不同濃度NaCl對植物乳桿菌生長的影響。將菌株以體積分數(shù)1%接種量分別接種到NaCl質量分數(shù)為0，4%，8%，12%，16%的MRS液體培養(yǎng)基中[13]，于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，分別在4，8，12，24，36，48 h取樣，用紫外分光光度計在600 nm波長下測定生長情況。

1.2.2 植物乳桿菌活性成分的分離純化

(1)醇沉法。取甘油管中保藏的菌株進行三區(qū)劃線活化，挑選單菌落轉入MRS液體培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)12 h后以體積分數(shù)1%接種量接入到1 L的MRS液體培養(yǎng)基中。37 ℃培養(yǎng)箱中發(fā)酵48 h，8 500 r/min離心20 min，得無細胞上清液[18]。旋蒸上清液至原體積的1/10,加入無水乙醇，使無水乙醇體積分數(shù)為75%，充分攪拌均勻。于4 ℃條件下靜置過夜，8 500 r/min離心20 min，繼續(xù)濃縮上清液至1/5體積，去除大量乙醇濃縮至原發(fā)酵液體積，所得旋蒸液中的乙醇回收。選擇未處理的濃縮發(fā)酵液為對照，以醇沉后的濃縮上清液和醇沉后的沉淀為待測樣品，以蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌作為指示菌，采取打孔法測其活性。每組樣品參考3個平行試驗，經(jīng)醇沉水提得到的粗提液約100 mL，置于冰箱4 ℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

(2)有機溶劑萃取法。加入醇沉上清液兩倍體積的乙酸乙酯，充分搖勻后轉至分液漏斗靜置4 h，將有機相旋蒸干后用pH 6.0磷酸緩沖液復溶，所得旋蒸液中的乙酸乙酯回收利用。重復以上步驟萃取6次,合并萃取所得有機相，用0.22 μm有機系濾膜過濾，獲得粗提液放置于冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(3)Sephadex G50凝膠層析柱純化。將乙酸乙酯萃取液用葡聚糖凝膠Sephadex G50層析柱(直徑2.0 cm×柱高80 cm)對有機溶劑萃取后的粗提液進一步分離純化，洗脫液選用蒸餾水洗脫，流速0.5 mL/min。使用自動收集器收集餾分，設置每管5 min，使用打孔法測定每組餾分的抑菌活性，將有活性的組分收集濃縮，用0.22 μm有機系濾膜過濾，獲得粗提液放置冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

(4)Sephadex LH-20凝膠層析柱純化。經(jīng)Sephadex G50層析后的樣品再用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20層析柱(直徑2.0 cm×柱高80 cm)進行層析純化，洗脫液選用80%色譜級甲醇進行洗脫，流速0.5 mL/min。通過打孔法測定每個組分的抑菌活性。將顯示有抑菌活性的部分匯集并進行濃縮，使用0.22 μm有機系濾膜過濾，進一步采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)純化。

(5)RP-HPLC純化。將20 μL樣品注入配備有分析柱的RP-HPLC來測試植物乳桿菌活性成分純度[19]。使用分析柱對樣品進行分析后改用制備柱收集樣品。色譜柱：Agilent C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；洗脫條件：線性雙相梯度洗脫(A：超純水，B：甲醇)；洗脫梯度為A：90%—5%，B：10%—95%；洗脫時間：35 min；流速：0.5 mL/min；檢測器：光電二極管分離陣列檢測器；檢測波長：280 nm；進樣量：100 μL[20]。收集每個峰進行活性檢測，確定有活性的峰。以活性物質發(fā)酵上清液為對照，用打孔法檢測抑菌活性。

1.2.3 植物乳桿菌活性成分的理化性質研究

(1)排除乳酸對植物乳桿菌的影響研究。取植物乳桿菌粗提液1 mL至10 mL離心管中，用1 mol/L的NaOH分別調節(jié)pH至4.5，5.0，5.5，6.0，6.5，7.0[21]，以未調節(jié)pH的粗提液作為對照，使用打孔法檢測抑菌活性。

(2)植物乳桿菌蛋白酶的穩(wěn)定性研究。取植物乳桿菌粗提液1 mL至10 mL離心管中，分別配置蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶的酶溶液，質量濃度為5 mg/mL[19]。將粗提液的pH調至各酶最適合生長的pH范圍內(蛋白酶K：7.5～8.0，胰蛋白酶：8.0～8.5，胃蛋白酶：1.5～2.0)。取酶溶液0.1 mL混勻至0.4 mL的粗提液中，水浴4 h后將其調回初始pH，以未進行處理的粗提液作為對照，使用打孔法檢測抑菌活性。

(3)植物乳桿菌的熱穩(wěn)定性研究。取植物乳桿菌粗提液1 mL至10 mL離心管中，分別在60 ℃，80 ℃，121 ℃溫度下處理30 min[22]。取出冷卻至室溫，以未進行加熱的粗提液作為對照[23]，使用打孔法檢測抑菌活性。

1.2.4 統(tǒng)計分析 所有試驗均設3次重復。采用SPSS 20統(tǒng)計學進行顯著性分析，利用Tukey法進行單因素方差分析(ANOVA)，顯著性差異在P<0.05水平上。采用Origin 2021繪圖，所有數(shù)據(jù)結果均以平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 農(nóng)家發(fā)酵食品中具有抑菌活性的乳酸菌的分離與篩選

從貴州省農(nóng)家發(fā)酵泡菜鹵水中分離純化獲得108株分離物，經(jīng)初篩復篩后得到3株抑菌活性較強的乳酸菌，分別編號為L17，C19和MMB-08。以腐敗希瓦氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和蠟樣芽孢桿菌為指示菌進行抑菌實驗，結果見表1。

表1 菌株L17，C19和MMB-08對4種指示菌抑菌活性測定

MMB-08菌株對4種指示菌的抑菌圈直徑分別為(11.75±0.35)mm，(10.3±0.71)mm，(10.2±0.42)mm，(8.3±0.28)mm，與其他菌株相比，MMB-08對4種指示菌的抑制活性較顯著。因此，選擇MMB-08作為目的菌株進行后續(xù)試驗。

2.2 菌株MMB-08的形態(tài)學鑒定

如圖1所示，菌株MMB-08在MRS平板上培養(yǎng)24 h后，菌落形態(tài)為乳白色，不透明，邊緣規(guī)則，表面光滑。經(jīng)革蘭氏染色觀察，菌株呈短桿狀或彎曲桿狀，無孢子和鞭毛，呈紫色，表明該菌株為革蘭氏陽性菌[24]。

注：A為菌落形態(tài);B為革蘭氏染色結果;C為蠟樣芽孢桿菌陽性對照;D為大腸桿菌陰性對照。

2.3 菌株MMB-08的生理生化鑒定

菌株MMB-08的生理生化鑒定結果見表2。明膠液化試驗結果呈陰性，可發(fā)酵棉子糖、甘露糖、海藻糖等多種糖。根據(jù)《伯杰氏細菌鑒定手冊》，可初步鑒定該菌株為植物乳桿菌屬。

表2 菌株MMB-08的生理生化鑒定結果

2.4 菌株MMB-08的16S rDNA序列分析與系統(tǒng)發(fā)育樹構建

如圖2所示，菌株MMB-08的16S rDNA在約1 500 bp處出現(xiàn)明亮條帶，測序結果為1 463 bp。通過BLAST程序建立發(fā)育樹對比顯示，該菌株序列與植物乳桿菌(Lactiplantibacillusplantarum)序列相似性為100%，初步認為篩選得到的MMB-08菌株為植物乳桿菌(Lactiplantibacillusplantarum)，命名為L.plantarumMMB-08。系統(tǒng)發(fā)育樹如圖3所示，顯示菌株MMB-08與植物乳桿菌在同一分支，證明該菌株為植物乳桿菌(Lactiplantibacillusplantarum)。

圖2 菌株MMB-08電泳圖

2.5 L. plantarum MMB-08生長曲線及生長過程中pH的變化

植物乳桿菌L.plantarumMMB-08的生長狀況以及pH變化如圖4所示，從延滯期到衰亡期,pH從6.0降至4.0，說明其發(fā)酵過程中不斷產(chǎn)酸，到達穩(wěn)定期后產(chǎn)酸基本保持不變。4～10 h菌株進入對數(shù)生長前期，10～12 h進入對數(shù)生長后期，20 h以后進入穩(wěn)定生長期，生長速度逐漸緩慢，48 h后菌株進入衰敗期，pH逐漸趨于平穩(wěn)，發(fā)酵結束pH為4.0±0.14，表明菌株在發(fā)酵期間能夠達到快速生長并產(chǎn)酸，使pH降低。

2.6 L. plantarum MMB-08耐鹽性研究

具備良好耐鹽性的菌株對食品防腐等有重要作用，在食品行業(yè)中可以應用于高鹽食品的生產(chǎn)[25]。L.plantarumMMB-08耐鹽性如圖5所示，隨著NaCl質量分數(shù)的增加，OD值隨之降低，生長繁殖受到抑制，在NaCl質量分數(shù)為4%和8%時生長較好，在質量分數(shù)12%和16%下OD值有所降低，較高濃度的NaCl抑制了乳酸菌的生長。

2.7 L. plantarum MMB-08活性物質的分離純化

使用醇沉法對L.plantarumMMB-08分離純化,結果見表3。醇沉得到的上清液粗提物具備明顯抑菌活性，其沉淀無活性，說明醇沉法適用于分離純化前期的粗提。

表3 L. plantarum MMB-08醇沉粗提物質抑菌活性

2.7.1 有機溶劑萃取分離活性物質 用乙酸乙酯萃取法對活性物質進一步分離提純，結果見表4。對醇沉液重復萃取6次后，水相對蠟樣芽孢桿菌的抑菌活性逐漸降低，直到第5次萃取后，水相中殘留活性物質不再發(fā)生變化，即確定萃取次數(shù)為6次。

表4 乙酸乙酯萃取L. plantarum MMB-08的抑菌活性

2.7.2 凝膠層析柱純化 發(fā)酵上清液經(jīng)乙酸乙酯萃取后，經(jīng)Sephadex G50凝膠層析得到的餾分采取打孔法測其活性。15到25管餾分具備明顯抑菌活性(見圖6a)，將這些活性物質收集合并，再經(jīng)Sephadex LH-20凝膠層析，檢測到65到81管餾分具備明顯抑菌活性(見圖6b)。該抑菌活性餾分在波長280 nm下有明顯的紫外吸收峰，所以選用280 nm作為高效液相色譜儀的檢測波長。

a Sephadex G-50

2.7.3 RP-HPLC純化 將層析柱純化后的活性物質使用RP-HPLC進行全波長分析，結果如圖7所示。在280 nm下共檢測到7個單峰，將各峰的餾分分離收集，其中，峰3具備顯著活性，保留時間為24.824 min。L.plantarumMMB-08的發(fā)酵上清液分別經(jīng)醇沉，乙酸乙酯萃取，Sephadex G-50，Sephadex LH-20層析和RP-HPLC純化，得到有抑菌活性的細菌素MMB-08。

圖7 L. plantarum MMB-08 HPLC洗脫峰的活性檢測

2.8 細菌素MMB-08的性質研究

2.8.1 排除乳酸對細菌素MMB-08 的影響 對細菌素MMB-08的乳酸排除結果如圖8所示，乳酸在pH=6.0時失去活性。為了排除酸性物質的干擾，將pH調至7.0檢測抑菌活性，結果表明此時抑菌活性依然存在，說明發(fā)酵上清液中不僅含有乳酸，還有細菌素等。

注：小寫字母表示組內顯著性差異(P<0.05)。

2.8.2 細菌素MMB-08的蛋白酶穩(wěn)定性 細菌素MMB-08的蛋白酶穩(wěn)定性測定結果如圖9所示。與對照相比，細菌素MMB-08經(jīng)胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K處理過后活性降低，分別降低28.5%，38.4%，36.4%，說明抗菌物質能夠被蛋白酶降解而不會殘留在人體內，是一種安全可降解的抗菌物質。

圖9 細菌素MMB-08的蛋白酶穩(wěn)定性

2.8.3 細菌素MMB-08的熱穩(wěn)定性 細菌素MMB-08的熱穩(wěn)定性測定結果如圖10和圖11所示。對其進行60 ℃ 30 min，80 ℃ 30 min，121 ℃ 30 min的不同處理，細菌素MMB-08在60 ℃時幾乎不受影響，80 ℃處理30 min后能保留94.3%的活性，121 ℃處理30 min后仍能保留84.5%的活性，表明細菌素MMB-08具有良好的熱穩(wěn)定性。

圖10 細菌素MMB-08的熱穩(wěn)定性試驗結果

圖11 細菌素MMB-08的熱穩(wěn)定性

3 討論

目前乳酸鏈球菌素Nisin已經(jīng)應用到食品行業(yè)中，但Nisin抗菌譜較窄，僅能針對革蘭氏陽性菌[26]，因此迫切需要開發(fā)出具有廣譜抑菌效果的細菌素。本研究從貴州發(fā)酵食品中篩選到一株具有良好抑菌活性的植物乳桿菌，通過抑菌實驗發(fā)現(xiàn)，其對常見的兩種革蘭氏陽性菌(金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌)具有明顯抑制效果，抑菌圈直徑分別達到(10.3±0.71)mm和(8.3±0.28)mm；同時，其對兩種革蘭氏陰性菌(大腸桿菌、腐敗希瓦氏菌)的抑制效果也同樣顯著，直徑分別達到(11.75±0.35)mm和(10.2±0.42)mm。因此可以認為篩選得到的MMB-08菌株為植物乳桿菌(Lactiplantibacillusplantarum)，命名為L.plantarumMMB-08。L.plantarumMMB-08在食品防腐和病原菌控制方面具有較大應用潛力。

細菌素的分離純化一般采取硫酸銨沉淀、有機溶劑萃取、凝膠層析以及反向高效液相色譜法等。張漫敏等[27]通過硫酸銨沉淀、有機溶劑萃取、pH吸附解吸、凝膠層析和反向高效液相色譜法得到L.plantarumC010。Zhu等[28]通過陽離子交換色譜、凝膠色譜和反相高效液相色譜法從鮮牛奶中分離出產(chǎn)細菌素的植物乳桿菌L.plantarumZJ008。本文在L.plantarumMMB-08產(chǎn)物的提取與純化中，使用了醇沉法、乙酸乙酯萃取法以及凝膠層析和反向高效液相色譜法。L.plantarumMMB-08發(fā)酵液中除了存在細菌素以外，還存在各種酸性物質、過氧化氫等抑菌物質[29]。為了排除酸性物質的干擾，將L.plantarumMMB-08發(fā)酵液的pH調到7.0后進行抑菌活性測定，結果表明，pH=7.0的L.plantarumMMB-08發(fā)酵液仍存在一定的抑菌效果，說明發(fā)酵上清中不僅含酸，還含有細菌素等。

相較于其他植物乳桿菌提取的抗菌物質，細菌素MMB-08的耐熱性也較為突出。高鵬[30]研究的細菌素JL-A65雖具有廣譜抑菌效果，但在溫度達到90 ℃處理10 min后抑菌活性急劇下降，處理30 min后已無抑菌活性。而細菌素MMB-08在121 ℃30 min后仍能保留84.5%的抑菌活性，這也說明L.plantarumMMB-08所產(chǎn)細菌素相較于其他細菌素應用范圍更廣，在熱加工食品的防腐保鮮領域具有較好的應用前景。

另外，本研究對細菌素的利用率較低，在1 L發(fā)酵液中最終獲得細菌素提取物僅10 mL，占整體體積的1%。提取物在凝膠層析中以及高效液相色譜中都有一定程度的損失，且實驗過程中僅選取抑菌活性最高的部分用于細菌素下一步分離純化，后續(xù)研究將注重細菌素的提取率，優(yōu)化分離純化條件，為細菌素的實際生產(chǎn)應用奠定理論基礎。

4 結論

本研究從云貴高原地區(qū)的農(nóng)家發(fā)酵食品中篩選到一株具有較強抑菌活性的菌株，并對該菌株進行了生理生化鑒定及分子生物學鑒定，結果表明，該菌株為L.plantarum，將其命名為L.plantarumMMB-08。對L.plantarumMMB-08所產(chǎn)抑菌物質進行分離純化，分別經(jīng)醇沉、乙酸乙酯萃取、Sephadex G-25和Sephadex LH-20凝膠柱層析，最后經(jīng)反相高效液相色譜分析得到一個有抑菌活性物質的單峰，名為細菌素MMB-08，保留時間在24.824 min。此外，相關的性質研究還發(fā)現(xiàn)，L.plantarumMMB-08所產(chǎn)細菌素具有較好的熱穩(wěn)定性，可以應用于熱加工食品的防腐保鮮。