花玥，郭盛，2*，朱悅，朱昭穎，謝紅，陶偉偉，段金廒*

1.南京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心/江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/國家中醫(yī)藥管理局中藥資源循環(huán)利用重點(diǎn)研究室，江蘇 南京 210023

2.中國中藥協(xié)會(huì) 藥食同源物質(zhì)評(píng)價(jià)和利用專業(yè)委員會(huì)，北京 100061

酸棗仁為鼠李科植物酸棗Ziziphus jujubaMill.var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou 的干燥成熟種子，具有養(yǎng)心補(bǔ)肝、寧心安神、斂汗、生津之功，常用于虛煩不眠、驚悸多夢(mèng)、體虛多汗、津傷口渴等證的治療，是中醫(yī)臨床治療失眠癥的常用藥味[1-2]。臨床多以苯二氮?類藥物治療失眠，長期服用易出現(xiàn)成癮性、戒斷性等不良反應(yīng)[3]，而酸棗仁作為中醫(yī)臨床治療失眠的藥食同源類中藥具有安全有效的優(yōu)勢(shì)[4]?，F(xiàn)代研究表明，酸棗仁養(yǎng)心安神功效確切，其含有的黃酮類[2]、三萜皂苷類[5]、生物堿類[6]及脂肪酸類等[1]化學(xué)成分，均表現(xiàn)出一定防治失眠的作用，但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

現(xiàn)代研究表明，失眠癥的發(fā)生發(fā)展多與下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸功能紊亂、中樞神經(jīng)遞質(zhì)失衡、炎性反應(yīng)因子釋放、迷走神經(jīng)張力變化、褪黑素系統(tǒng)功能下降、邊緣皮質(zhì)系統(tǒng)環(huán)路功能或結(jié)構(gòu)異常等密切相關(guān)[7-8]。其中，應(yīng)激是導(dǎo)致失眠的重要原因，HPA軸過度興奮和亢進(jìn)，可表現(xiàn)出促覺醒作用，通過調(diào)節(jié)HPA 軸功能可改善睡眠狀態(tài)從而達(dá)到治療失眠癥的效果[9]。因此，調(diào)節(jié)HPA 軸功能亢進(jìn)已成為近年來治療失眠障礙的新靶標(biāo)[10]。

本研究選擇腹腔注射對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA）復(fù)制失眠大鼠模型，在前期考察酸棗仁提取物改善模型動(dòng)物記憶及認(rèn)知功能，并調(diào)控其內(nèi)源性代謝網(wǎng)絡(luò)及腸道菌群結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上[10]，選擇與HPA 軸功能相關(guān)的調(diào)節(jié)因子，包括下丘腦分泌的促腎上皮質(zhì)激素釋放激素（CRH）、垂體分泌的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、腎上腺分泌的皮質(zhì)酮（CORT）為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)合動(dòng)物行為、病理組織及生化指標(biāo)分析等，評(píng)價(jià)酸棗仁對(duì)HPA 軸的干預(yù)作用，進(jìn)而探討其防治失眠癥的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

無特定病原體（SPF）級(jí)雄性SD 大鼠30只，體質(zhì)量180～220 g，2 月齡，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，許可證號(hào)：SCXK（滬）2017-0005，合格證編號(hào)：20170005010252。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理學(xué)審查批號(hào)：201905A029），動(dòng)物接收后飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)內(nèi)，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，每籠3只，自由進(jìn)食、進(jìn)水。

1.2 藥物與試劑

酸棗仁飲片（批號(hào)：8017002）產(chǎn)自河北邢臺(tái)，由南京中醫(yī)藥大學(xué)段金廒教授鑒定，為鼠李科植物酸棗Ziziphus jujubaMill.var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou的干燥成熟種子。

PCPA（上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)：C10438621）；地西泮片（上海上藥信誼藥廠有限公司，批號(hào)：14181201）；戊巴比妥鈉（中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：060222）；聚山梨酯-80（Tween-80，批號(hào)：20130703，成都市科龍化工試劑廠）；羧甲基纖維素鈉（批號(hào)：20191203，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；4%多聚甲醛（批號(hào)：70085400，中國Biosharp公司）。

蘇木精-伊紅（HE）染液試劑盒、免疫組化筆、檸檬酸鈉緩沖液（江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司）；蛋白質(zhì)定量試劑盒（BCA）、磷酸鹽緩沖液（PBS，批號(hào)：GA19120085310）均購自北京索萊寶科技有限公司）；中性樹膠、二甲苯、甲醇、乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；MaxVision 試劑盒（兔）、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒、耐高溫塑料染色架（福州邁新生物科技有限公司）；蘇木精染色液（南京建成生物工程研究所）；大鼠血清白細(xì)胞介素-1β（ⅠL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、CRH、ACTH、CORT、5-羥色胺（5-HT）酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELⅠSA）試劑盒及一氧化氮（NO）試劑盒（南京建成生物工程研究所）；大鼠組織CRH、ACTH、CORT酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司）。

1.3 儀器

R-250 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi 公司）；ML204、MS105 型電子分析天平（上海Mettler-Toledo 儀器有限公司）；XO25-12DT 型超聲波清洗機(jī)（南京先歐儀器制造有限公司）；Tissuelyser-48型全自動(dòng)樣品快速研磨儀（上海凈信科技）；VX-Ⅱ型多管渦旋振蕩器（北京踏錦科技有限公司）；Microfuge 22R Centrifuge 型高速離心機(jī)（美國Beckman Coulter 公司）；ST60-4 型微孔板恒溫振蕩器（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；EnSpire 型酶標(biāo)儀（美國PerkinElmer 公司）；Direct-Q5 純水制備儀（美國Millipore 公司）；DigBehv 型動(dòng)物分析系統(tǒng)（上海吉量軟件科技有限公司）；THZ-312型臺(tái)式恒溫振蕩器（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；101AS-3型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海圣欣科學(xué)儀器有限公司）；BCD-258A/C型冰箱（海爾公司）；BX43型生物倒置顯微鏡（日本Olympus 公司）；E200A 型萬分之一電子分析天平（德安特公司）。

2 方法

2.1 供試藥物的制備

本實(shí)驗(yàn)采用筆者前期開展酸棗仁提取物改善模型動(dòng)物記憶及認(rèn)知功能實(shí)驗(yàn)用樣品[11]，其制備方法為將酸棗仁粉碎成粗粉（過二號(hào)篩），加2.5 倍量石油醚浸泡1 h 后，回流提取2 次，每次2 h，濾過。濾渣置通風(fēng)櫥揮干溶劑，得灰白色脫脂藥渣，加8倍量70%乙醇回流提取2 次，每次2 h，濾過，合并濾液，60 ℃減壓濃縮至生藥質(zhì)量濃度4 g·mL-1，得到酸棗仁醇提物。供試藥物均置于-20 ℃冰箱中備用，臨用時(shí)稀釋至所需劑量。

2.2 動(dòng)物分組與模型制備

隨機(jī)將30 只大鼠分為5 組，每組6 只，分別為正常組、模型組、地西泮陽性藥組、酸棗仁醇提物高劑量組、酸棗仁醇提物低劑量組。除正常組外，各組大鼠參照文獻(xiàn)[12-13]方法腹腔注射PCPA 混懸液（350 mg·kg-1·d-1，含0.1% Tween-80 的0.9%氯化鈉溶液配制），正常組腹腔注射等劑量的0.9%氯化鈉溶液，體積均為10 mL·kg-1體質(zhì)量，每天1 次，連續(xù)3 d。

2.3 動(dòng)物給藥

造模同期給藥，地西泮陽性藥組（1 mg·kg-1·d-1）、酸棗仁醇提物高劑量組（20 g·kg-1·d-1）、酸棗仁醇提物低劑量組（5 g·kg-1·d-1）均灌胃對(duì)應(yīng)的藥物，共給藥10 d。正常組和模型組灌胃等劑量的水，給藥體積均為10 mL·kg-1。

2.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

給藥10 d后，檢測(cè)大鼠在曠場(chǎng)環(huán)境的活動(dòng)情況，測(cè)試前將動(dòng)物放入測(cè)試房間內(nèi)30 min，以適應(yīng)環(huán)境。測(cè)試時(shí)輕輕提起尾巴，頭朝前將大鼠放入曠場(chǎng)中使其自由活動(dòng)。曠場(chǎng)規(guī)格為40 cm×40 cm，側(cè)壁高40 cm，箱體內(nèi)部為黑色。DigBehv 型動(dòng)物分析系統(tǒng)拍攝記錄大鼠5 min內(nèi)的活動(dòng)軌跡，檢測(cè)大鼠在曠場(chǎng)內(nèi)活動(dòng)的總路程，中心區(qū)域滯留時(shí)間及爬壁情況，用于評(píng)價(jià)動(dòng)物焦慮樣行為[14]。

2.5 標(biāo)本的采集及處理

曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后禁食12 h，腹腔注射2%戊巴比妥鈉（40 mg·kg-1，0.9%氯化鈉溶液配制）進(jìn)行麻醉。腹主動(dòng)脈采集血液于負(fù)壓管中，靜置30 min，699.3×g離心10 min，分取上層血清，置于-80 ℃冰箱中保存，用于血清生化指標(biāo)測(cè)定[15]。取血后，迅速摘取下丘腦、垂體、腎上腺組織，每組取部分置于4%多聚甲醛組織固定液中，用于組織病理分析，剩余用于組織生化指標(biāo)測(cè)定。

2.6 HPA軸功能分析

2.6.1組織病理分析 對(duì)固定在4%多聚甲醛中的下丘腦、垂體、腎上腺組織進(jìn)行HE染色。經(jīng)無水乙醇脫水，二甲苯透明后，將組織浸入石蠟中包埋，切片烤片，石蠟切片脫蠟，經(jīng)蘇木精、伊紅染色封片后，于400×光學(xué)顯微鏡下觀察組織形態(tài)，每個(gè)組織取3 個(gè)區(qū)域拍照，用ⅠmageJ 1.8.0 軟件統(tǒng)計(jì)每組400×圖片中所有染色細(xì)胞的數(shù)量，觀察不同組織細(xì)胞數(shù)量在給藥前后的變化。

2.6.2ELⅠSA 分析HPA 軸激素水平 根據(jù)ELⅠSA試劑盒說明書記載的操作方法，測(cè)定各組大鼠血清中HPA軸激素（CRH、ACTH、CORT）的含量。稱取適量組織（下丘腦、垂體、腎上腺）于1.5 mL 離心管中，加入鋯珠和一定量的PBS（pH 7.2～7.4），使用全自動(dòng)樣品快速研磨儀充分勻漿后，離心取上清液，得10%組織勻漿液。采用BCA 試劑盒測(cè)定勻漿液蛋白濃度，并按照相應(yīng)ELⅠSA 試劑盒的操作說明，分別測(cè)定大鼠組織下丘腦中的CRH、垂體中的ACTH 及腎上腺中的CORT 含量，并以蛋白濃度校正。

2.7 血清ⅠL-1β、TNF-α、NO水平分析

根據(jù)試劑盒說明書描述的操作方法，ELⅠSA 測(cè)定各組大鼠血清中ⅠL-1β、TNF-α水平；按NO 試劑盒說明書方法測(cè)定血清中NO的含量。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

3.1 模型驗(yàn)證結(jié)果

造模最后一天禁食12 h后，眼眶取血分取血清，用ELⅠSA 試劑盒測(cè)定5-HT 含量。5-HT 是公認(rèn)參與睡眠-覺醒機(jī)制的神經(jīng)遞質(zhì)，而PCPA 是5-HT 拮抗劑，腹腔注射PCPA 能造成晝夜節(jié)律消失，以復(fù)制失眠模型。與正常組比較，模型組大鼠血清中5-HT的含量顯著降低，說明模型復(fù)制成功[16-17]（圖1）。

圖1 正常組與模型組大鼠血清中的5-HT含量（,n=6）

3.2 酸棗仁對(duì)大鼠行為的影響

與正常組比較，模型組大鼠晝夜節(jié)律消失，毛發(fā)粗糙無光澤、對(duì)刺激敏感、興奮且攻擊性強(qiáng)等行為，表明失眠模型復(fù)制成功。末次給藥后，對(duì)失眠大鼠進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，選擇動(dòng)物曠場(chǎng)內(nèi)活動(dòng)總路程、中心區(qū)域時(shí)間和爬壁情況作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，其中總路程反映大鼠的運(yùn)動(dòng)情況，中央?yún)^(qū)域時(shí)間反映大鼠的焦慮情況；爬壁反映大鼠的探究行為。如圖2 所示，在本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠總路程、中心時(shí)間及爬壁均較正常組減少（P＜0.05），給藥酸棗仁提取物后，上述指標(biāo)均有不同程度回歸正常水平的趨勢(shì)。上述結(jié)果表明失眠大鼠有一定的焦慮狀表現(xiàn)，給藥酸棗仁提取物可以改善這些癥狀。

圖2 酸棗仁對(duì)失眠模型大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)總路程、中心區(qū)域時(shí)間和爬壁情況的影響（,n=6）

3.3 酸棗仁對(duì)HPA軸功能的影響

3.3.1酸棗仁對(duì)HPA 軸組織病理變化的影響 HE染色結(jié)果如圖3 所示，與正常組比較，模型組大鼠下丘腦中神經(jīng)元數(shù)量減少但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而各給藥組均有一定程度的回調(diào)（圖4）。模型大鼠垂體中嗜色細(xì)胞數(shù)量較正常組明顯減少，與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，取而代之的是細(xì)胞質(zhì)較少、蘇木精著色淺、細(xì)胞邊界不清的嫌色細(xì)胞，提示模型動(dòng)物垂體發(fā)生病理改變。給藥酸棗仁后，組織病理改變出現(xiàn)回調(diào)，酸棗仁醇提物高、低劑量組細(xì)胞數(shù)量均回調(diào)且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組大鼠腎上腺中束狀帶和網(wǎng)狀帶細(xì)胞均出現(xiàn)體積變大、呈圓形、核染色變淺、核仁清晰可見的病理改變，提示細(xì)胞代償性增大，腎上腺分泌功能增強(qiáng)，且造模后細(xì)胞數(shù)量與正常組相比顯著減少。酸棗仁給藥組對(duì)腎上腺的病理改變均有不同程度的回調(diào)，酸棗仁醇提物高、低劑量組細(xì)胞數(shù)量均回調(diào)且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 酸棗仁對(duì)失眠模型大鼠下丘腦、垂體、腎上腺組織HE染色的影響（400×）

圖4 酸棗仁對(duì)失眠模型大鼠下丘腦、垂體、腎上腺組織HE染色細(xì)胞數(shù)量的影響（,n=6）

3.3.2酸棗仁對(duì)HPA 軸激素水平的影響 研究結(jié)果（圖5）顯示，失眠模型大鼠血清中的HPA 軸相關(guān)激素CRH、ACTH、CORT 水平較正常組均顯著升高，酸棗仁可不同程度地改善這種變化，其中酸棗仁醇提物低劑量組可顯著降低血清中CRH 水平，酸棗仁醇提物高劑量組可顯著降低血清中ACTH 水平，酸棗仁醇提物高、低劑量組均可降低血清中CORT 水平但無顯著性差異。失眠模型大鼠下丘腦CRH 水平較正常組顯著升高，給藥酸棗仁醇提物高、低劑量均可顯著降低CRH 水平；失眠模型大鼠垂體的ACTH 水平較正常組顯著升高，給藥酸棗仁醇提物高劑量組可顯著降低ACTH 水平；失眠模型大鼠腎上腺的CORT 水平較正常組顯著升高，給藥酸棗仁醇提物高劑量可顯著降低CORT 水平，而酸棗仁醇提物低劑量組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖5 酸棗仁對(duì)失眠模型動(dòng)物血清和組織HPA軸相關(guān)激素水平的影響（,n=6）

3.4 酸棗仁對(duì)血清ⅠL-1β、TNF-α和NO水平的影響

血清生化指標(biāo)分析結(jié)果（圖6）顯示，失眠模型大鼠血清中NO 含量顯著低于正常大鼠（P＜0.05），炎癥因子ⅠL-1β、TNF-α水平均顯著高于正常大鼠（P＜0.05）。給藥酸棗仁提取物后，血清中ⅠL-1β、TNF-α水平均有顯著降低趨勢(shì)（P＜0.05），提示酸棗仁提取物可降低失眠動(dòng)物的機(jī)體炎癥水平，推測(cè)酸棗仁可通過降低機(jī)體炎癥水平發(fā)揮干預(yù)失眠的作用。

圖6 酸棗仁對(duì)失眠模型動(dòng)物血清生化指標(biāo)的影響（,n=6）

4 討論

失眠是臨床上最常見的睡眠障礙類型。現(xiàn)代研究顯示，PCPA 是一種色氨酸羥化酶（TPH）抑制劑，可選擇性抑制TPH，進(jìn)而阻斷5-HT 的合成[16]，常被用于腹腔注射建立睡眠剝奪動(dòng)物模型，進(jìn)而研究催眠藥物的藥理作用機(jī)制，但鑒于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體差異，睡眠剝奪效果不易掌控[17]。

本研究采用腹腔注射PCPA 混懸液3 d，通過觀察失眠大鼠造模后行為驗(yàn)證失眠模型復(fù)制的成功與否。模型復(fù)制期間，失眠大鼠表現(xiàn)出對(duì)刺激敏感、暴躁且攻擊性強(qiáng)等行為特征，曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)表明失眠大鼠存在一定焦慮狀表現(xiàn)。在模型建立和分組的基礎(chǔ)上，對(duì)失眠大鼠的行為、病理切片及生化指標(biāo)等進(jìn)行分析，以探討失眠大鼠的生化指標(biāo)異常及酸棗仁對(duì)失眠大鼠的調(diào)節(jié)作用。給藥不同劑量酸棗仁提取物后，失眠大鼠的焦慮樣行為一定程度得到改善，攻擊性減弱。

現(xiàn)代研究表明，HPA 軸在維持警覺和調(diào)節(jié)睡眠中起重要作用[18]，HPA 軸主要由下丘腦、垂體和腎上腺三部分組成，HPA 軸功能紊亂均會(huì)影響睡眠，其致病機(jī)制為下丘腦釋放CRH，CRH 作用于垂體后使其釋放ACTH，ACTH 通過體循環(huán)作用于腎上腺皮質(zhì)，使其釋放糖皮質(zhì)激素和CORT[19]。過量的CRH 導(dǎo)致垂體ACTH 分泌增加，進(jìn)而增加CORT 的分泌，最終造成糖皮質(zhì)激素分泌過多，過量的糖皮質(zhì)激素不能有效抑制HPA 軸的活性，使其形成惡性循環(huán)而引發(fā)應(yīng)激反應(yīng)[20]。糖皮質(zhì)激素作為HPA 軸的最終產(chǎn)物，會(huì)導(dǎo)致覺醒及失眠，睡眠對(duì)應(yīng)激系統(tǒng)有抑制作用[21-22]。

HPA 軸亢進(jìn)會(huì)導(dǎo)致睡眠障礙，當(dāng)應(yīng)激等因素使HPA 軸功能亢進(jìn)時(shí)，機(jī)體出現(xiàn)非快速眼動(dòng)（NREM）睡眠減少，快速眼動(dòng)（REM）睡眠增多[23]。失眠患者血清CRH 較正常人水平升高，疲勞、疼痛、焦慮等癥狀均可作為壓力源引起CRH分泌，CRH可引起非壓力或壓力性的覺醒，CRH 還可減少促進(jìn)睡眠的生長激素分泌[24]。ACTH 能夠提高大腦皮質(zhì)的應(yīng)激性，是睡眠-覺醒調(diào)控機(jī)制中的重要組成。應(yīng)激狀態(tài)下，ACTH 濃度會(huì)隨之升高，但應(yīng)激長時(shí)間持續(xù)，則可能使機(jī)體調(diào)節(jié)能力減弱，進(jìn)而出現(xiàn)HPA 軸功能減退[25]。CORT 被稱為“應(yīng)激性激素”，目前被認(rèn)為是應(yīng)激反應(yīng)經(jīng)典指標(biāo)，CORT 水平升高，影響機(jī)體物質(zhì)吸收及新陳代謝，進(jìn)而出現(xiàn)失眠癥狀。有文獻(xiàn)表明，中老年慢性失眠患者有HPA 軸相關(guān)的內(nèi)分泌失衡，表現(xiàn)為總睡眠時(shí)間＜5 h 時(shí)，CORT 水平明顯增高，CORT 和ACTH 水平與總睡眠時(shí)間呈負(fù)相關(guān)[26-27]。

本研究結(jié)果表明，失眠會(huì)對(duì)下丘腦、垂體及腎上腺造成一定程度的病理改變，表現(xiàn)為模型組大鼠下丘腦中非神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量增多；垂體中嗜色細(xì)胞減少，而嫌色細(xì)胞增多，嗜色細(xì)胞主要分泌生長激素、催乳素（嗜酸性細(xì)胞）、促甲狀腺素、促腎上腺素和促性腺激素等（嗜堿性細(xì)胞），嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞不易在HE染色下分辨，嫌色細(xì)胞主要是退化的嗜色細(xì)胞，或者是形成初期的嗜色細(xì)胞，提示失眠大鼠的垂體功能受到影響；腎上腺中細(xì)胞代償性增大，腎上腺分泌功能增強(qiáng)。綜上分析，失眠使HPA軸激素分泌功能紊亂。同時(shí)，失眠模型組大鼠血清中的CRH、ATCH、CORT 含量，下丘腦中的CRH、垂體中的ACTH、腎上腺中的CORT 含量均較正常組上升，HPA 功能呈亢進(jìn)狀態(tài)。上述指標(biāo)均證明，失眠模型大鼠會(huì)出現(xiàn)HPA 軸功能亢進(jìn)，長時(shí)間的應(yīng)激狀態(tài)使得垂體分泌功能減退，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[28]。

血清生化指標(biāo)分析結(jié)果表明，酸棗仁可改善失眠引起的多種生化指標(biāo)異常。HPA 軸功能亢進(jìn)可能會(huì)導(dǎo)致機(jī)體炎癥因子紊亂，已有研究證實(shí)睡眠不足會(huì)誘發(fā)先天性免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子（如ⅠL-1β和TNF-α）的表達(dá)增加。ⅠL-1β作為炎性細(xì)胞因子，廣泛參與炎癥反應(yīng)，局部高濃度ⅠL-1β主要發(fā)揮內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用，可作用于下丘腦引起發(fā)熱，刺激下丘腦釋放CRH，使垂體釋放ACTH，促進(jìn)糖皮質(zhì)激素的釋放[29-30]。本研究結(jié)果顯示，給予酸棗仁提取物后可不同程度地降低模型動(dòng)物血清ⅠL-1β和TNF-α的表達(dá)，提示其可緩解因失眠導(dǎo)致的機(jī)體炎癥反應(yīng)，同時(shí)降低促炎因子對(duì)HPA軸激素釋放作用。

NO參與了學(xué)習(xí)與記憶的調(diào)節(jié)過程，有誘導(dǎo)多種睡眠因子促進(jìn)睡眠的作用[31]，其含量與人的神經(jīng)系統(tǒng)具有密切聯(lián)系，具有第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的作用，調(diào)節(jié)多種病理生理過程[32]。本研究結(jié)果表明失眠大鼠血清NO 含量降低，酸棗仁提取物可升高失眠大鼠血清NO 含量，該作用可能為酸棗仁鎮(zhèn)靜催眠及治療失眠癥的作用機(jī)制之一。

綜上所述，本研究基于PCPA 致失眠大鼠模型，證實(shí)HPA 軸功能紊亂與失眠的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而酸棗仁可一定程度緩解失眠造成的HPA 軸過激狀態(tài)，其中酸棗仁高劑量對(duì)調(diào)節(jié)HPA 軸功能紊亂具有較好的效果，為后續(xù)基于HPA 軸研究失眠癥的作用機(jī)制提供了研究基礎(chǔ)。