李佳雪，陳曉梅，陳 娟，曾 旭，郭順星

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193）

黃芪 （Astragalus membranaceus） 和黨參 （Codonopsis pilosula） 同為我國(guó)傳統(tǒng)補(bǔ)益類(lèi)中藥材。黃芪味甘，性溫，歸脾、肺經(jīng)，具有健脾補(bǔ)中、益胃固表、利水消脾、生津養(yǎng)血之功效[1-2]，中醫(yī)臨床上常用于治療氣血虧虛、脾氣虛證[3-4]。黃芪藥材含有皂苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、多糖類(lèi)等活性成分，現(xiàn)代研究證明，黃芪具有調(diào)節(jié)免疫、促進(jìn)膠原合成、抑制腫瘤、保護(hù)心血管等作用[5-6]。黨參是桔?？贫嗄晟荼局参?，以根入藥，具有健脾益肺、養(yǎng)血生津的功效，中醫(yī)臨床上常用于治療脾肺氣虛、咳嗽虛喘或氣血不足等癥[2]。黨參含有生物堿類(lèi)、聚炔類(lèi)、木脂素類(lèi)、黃酮類(lèi)和多糖類(lèi)活性成分，具有保護(hù)神經(jīng)、調(diào)節(jié)血糖血脂、抗炎、抗腫瘤、抗氧化、治療心力衰竭等作用[7]。2種藥材均為傳統(tǒng)大宗藥材，且年產(chǎn)量在5萬(wàn)噸以上，每年采收后有大量地上的莖葉部分被遺棄[8-9]。研究表明，黃芪、黨參的莖葉中也富含與藥材相類(lèi)似的活性成分，可作為資源進(jìn)行開(kāi)發(fā)[8-10]。

平菇（Pleurotus ostreatus），學(xué)名為糙皮側(cè)耳，隸屬擔(dān)子菌綱 （Basidiomycetes） 傘菌目 （Agaricales） 側(cè)耳科（Pleurotaceae），是我國(guó)產(chǎn)量最高的食用菌品種之一[1]。平菇味道鮮美，含有蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸、維生素、膳食纖維、多糖等營(yíng)養(yǎng)成分，具有增強(qiáng)人體免疫力、抗癌、降糖降脂、抗氧化等功效[1]。金針菇（Flammulina velutipes） 隸屬于擔(dān)子菌 （Basidiomycetes） 傘菌目 （Agaricales） 口蘑科（Tricholomataceae）[11]，其營(yíng)養(yǎng)豐富、味道鮮美，富含蛋白質(zhì)、維生素、氨基酸、纖維素等營(yíng)養(yǎng)成分，其中金針菇多糖具有很好的抗腫瘤功效，還可延緩衰老、抗疲勞、降低膽固醇[12]。因此，食藥兼用真菌具有廣泛的開(kāi)發(fā)前景。

目前平菇、金針菇等食用菌的栽培基質(zhì)主要以玉米芯、木屑為主，且不同培養(yǎng)基對(duì)食用菌的營(yíng)養(yǎng)成分含量及活性成分含量有影響[13]。利用不同基質(zhì)栽培食用菌已經(jīng)廣泛開(kāi)展，如柑橘皮渣、咖啡渣、中藥渣、茶樹(shù)樹(shù)渣等，并對(duì)其安全性進(jìn)行了評(píng)價(jià)[14-16]。黃芪、黨參均收錄于《按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材物質(zhì)名單》的9種試點(diǎn)品種[17]，使用安全性較高。前期利用黃芪、黨參莖葉作為基質(zhì)，已成功培養(yǎng)出多種食用菌產(chǎn)品，并研究了其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與活性成分，但未開(kāi)展安全性評(píng)價(jià)。因此，通過(guò)對(duì)黃芪、黨參莖葉栽培的平菇、金針菇進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，探索利用大宗中藥材的非藥用部位栽培食用菌的安全性和可行性。

1 材料與方法

1.1 供試材料

黨參、黃芪地上莖葉部分采收自山西振東制藥股份有限公司，種植園位于山西長(zhǎng)治。秋季藥材采收后，地上部分的莖葉經(jīng)清洗，干燥，粉碎，過(guò)20目篩后，取過(guò)篩粉末備用。

糙皮側(cè)耳菌種（夏灰一號(hào)）、聚丙烯栽培袋（規(guī)格18 cm×38 cm，厚0.05 mm）、封底、封口蓋、出菇環(huán)等，購(gòu)自山東澤海菌業(yè)有限公司。

食用菌栽培的基礎(chǔ)基質(zhì)配方：玉米芯75%、麩皮20%、石膏粉2%、黃豆面1%、過(guò)磷酸鈣1%、白糖1%。將玉米芯、麩皮、黃豆面、過(guò)磷酸鈣、白糖等按比例混合，拌勻，石膏粉溶于水后添加，再調(diào)節(jié)培養(yǎng)料含水量至60%～65%。將黃芪、黨參莖葉粉末與基礎(chǔ)基質(zhì)，各250 g混合，并調(diào)節(jié)補(bǔ)充水分至含水量為60%～65%，將栽培料裝入栽培袋，每袋裝濕料500 g，121℃滅菌3 h，取出放置至冷卻。

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：每組試驗(yàn)SPF級(jí)KM種小鼠20只，雌雄各10只，體重為18 g～22 g，由斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)儀器

Agilent 5110 VDVICP-OES電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀，安捷倫科技有限公司；Zeenit 700P原子吸收分光光度計(jì)，德國(guó)耶拿公司；AFS-230原子熒光分光光度計(jì)，北京海光儀器有限公司；GC MS-2010 Plus氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，島津制作公司；分析天平JY5002，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；VORTEX-GENIE2渦旋混合器，美國(guó)Scientific Industries公司；N-1300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海愛(ài)朗儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

重金屬測(cè)定：黃芪和黨參莖葉栽培平菇和金針菇的鉛、鉻、鎘、總汞、總砷、銅等重金屬含量依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)。鉛依據(jù)GB 5009.12-2017第一法[18]，鎘依據(jù)GB 5009.15-2014[19]，鉻依據(jù)GB 5009.123-2014[20]，總汞依據(jù)GB 5009.17-2014第一篇第一法[21]，總砷依據(jù)GB 5009.11-2014第一篇第二法[22]，銅依據(jù)GB 5009.13-2017第四法[23]。

農(nóng)藥殘留測(cè)定：檢測(cè)方法依據(jù)GB 23200.113-2018[24]，對(duì)黃芪、黨參莖葉栽培平菇、金針菇的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。共檢測(cè)217種，如丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、除草醚等。

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：依據(jù)GB 15193.3-2014[25]，采用限量試驗(yàn)法，對(duì)供試小鼠一次性經(jīng)口給予平菇、金針菇樣品。灌胃劑量為10 000 mg·kg-1體重劑量。平菇、金針菇經(jīng)研磨、打碎、過(guò)篩后制備成待測(cè)樣品，稱(chēng)取樣品10.0 g，加去離子水至40.0 mL，充分混勻備用。給予小鼠平菇樣品前禁食4 h，不禁水，試驗(yàn)當(dāng)日稱(chēng)重、標(biāo)記，灌胃體積為40.0 mL·kg-1體重劑量，單次經(jīng)口灌胃給予小鼠平菇、金針菇樣品，灌胃小鼠樣品2 h后給予飼料。灌胃樣品后連續(xù)觀察2 h～4 h，之后每天觀察1次，觀察期為14 d。觀察是否存在服用平菇、金針菇樣品的動(dòng)物死亡，確定2種樣品的經(jīng)口毒性，并確定是否有必要采用霍恩氏法進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。記錄小鼠中毒體征、癥狀出現(xiàn)和消失，以及動(dòng)物死亡時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 重金屬含量測(cè)定結(jié)果

黃芪、黨參栽培的平菇、金針菇，其重金屬鉛、鉻、鎘、總汞、總砷、銅的含量見(jiàn)表1和表2。

表1 黃芪栽培的平菇、金針菇重金屬含量Tab.1 The heavy metal contents of Pleurotus ostreatus and Flammulina velutipes cultivated by Astragalus membranaceus

表2 黨參栽培的平菇、金針菇重金屬含量Tab.2 The heavy metal contents of Pleurotus ostreatus and Flammulina velutipes cultivated by Codonopsis pilosula

由表1和表2可知，大部分重金屬未檢出。黃芪、黨參栽培平菇、金針菇的汞、鉛、鎘、砷的含量均符合或者低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 7096-2014食用菌及其制品[26]。因此，黃芪、黨參栽培的平菇、金針菇不會(huì)產(chǎn)生重金屬富集，子實(shí)體屬于安全食用范圍。

2.2 農(nóng)藥殘留含量測(cè)定結(jié)果

對(duì)黃芪、黨參莖葉栽培平菇、金針菇中丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、除草醚等217種農(nóng)藥殘留及其代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。其中僅在黃芪栽培的平菇中檢測(cè)到了莎稗磷，為0.026 mg·kg-1，其余農(nóng)藥殘留均未檢出（＜0.01 mg·kg-1）。莎稗磷是20世紀(jì)70年代后期發(fā)明的一種有機(jī)磷類(lèi)除草劑，是選擇性內(nèi)吸傳導(dǎo)型除草劑，能有效防除稗草、千金子、稻稗等一年生禾本科雜草和碎米莎草、異型莎草等，殺草譜較廣，藥效時(shí)間長(zhǎng)，合理使用對(duì)作物安全。依據(jù)GB 2763-2019食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)[27]規(guī)定，參考莎稗磷在谷物中殘留量應(yīng)在0.1 mg·kg-1，說(shuō)明黃芪栽培的平菇符合規(guī)定要求。

2.3 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果

黃芪、黨參栽培的平菇、金針菇的急性經(jīng)口毒性（LD50）試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表3 黃芪栽培的平菇、金針菇急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 The results of acute oral toxicity test of Pleurotus ostreatus and Flammulina velutipes cultivated by Astragalus membranaceus

表4 黨參栽培的平菇、金針菇急性經(jīng)口毒性結(jié)果Tab.4 The results of acute oral toxicity test of Pleurotus ostreatus and Flammulina velutipes cultivated by Codonopsis pilosula

由表3和表4可知，給樣后各組小鼠未見(jiàn)有中毒反應(yīng)，飲食活動(dòng)正常，體重變化正常，觀察期內(nèi)試驗(yàn)動(dòng)物無(wú)死亡。獲得雌性、雄性小鼠經(jīng)口 LD50>10.0 g·kg-1體重劑量，說(shuō)明黃芪、黨參栽培的平菇、金針菇為無(wú)毒級(jí)食品。

3 討論

黃芪、黨參為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，各地黃芪、黨參在種植過(guò)程中有修剪枝條打尖等管理措施，并且在秋季根部采收后，大量的莖、葉等非藥用部位被丟棄或焚燒，未得到有效的利用。有研究表明[8-10]，黃芪、黨參莖葉中富含萜類(lèi)、黃酮、揮發(fā)油、皂苷、多糖等活性成分，可用于醫(yī)藥、飼料、食用菌等生產(chǎn)加工過(guò)程中。同時(shí)，黃芪、黨參均已納入2020年頒布的《按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物質(zhì)管理》的9種試點(diǎn)材料，其食用或制成加工食品的安全性高[17，28]。但黃芪、黨參在種植生產(chǎn)過(guò)程中，產(chǎn)生的地上部分廢棄物，用于食用菌的栽培，是否會(huì)產(chǎn)生重金屬、農(nóng)藥等有害物質(zhì)的累積，是本文研究的目的。因此選用平菇、金針菇2種常見(jiàn)食用菌，進(jìn)行黃芪、黨參栽培后檢測(cè)，以給其他食用菌栽培進(jìn)行示范。

通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，黃芪、黨參栽培的平菇、金針菇食用的安全性高，不會(huì)有重金屬、農(nóng)藥等有害物質(zhì)富集的現(xiàn)象。首先，重金屬檢測(cè)結(jié)果均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 7096-2014食用菌及其制品[26]規(guī)定，重金屬含量極低，日常食用不影響健康。其中，銅的含量以往GB 15199-94食品中銅限量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[29]規(guī)定應(yīng)在10 mg·kg-1以下，之后該標(biāo)準(zhǔn)廢除；農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)NY 861-2004規(guī)定糧食及制品中，銅的含量應(yīng)在10 mg·kg-1以下。其次，217種農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，僅發(fā)現(xiàn)莎稗磷有微量殘留，但符合GB 2763-2019食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)[24]的規(guī)定。作為常用除草劑，有機(jī)磷類(lèi)在作物種植中大量使用，常年積累于植物莖葉和土壤之中，若采用其他安全性高的生物消殺劑，可進(jìn)一步提高黃芪、黨參莖葉在食用菌生產(chǎn)中的安全性。最后，急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示為無(wú)毒級(jí)，表明平菇、金針菇食用安全。證明了黃芪、黨參非藥用部位作為基質(zhì)栽培食用菌切實(shí)可行。