何杉杉，王曉蕊，彭禹熙，馬立娟，杜麗平

（天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市工業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300457）

益生菌是寄生于宿主體內(nèi)活的微生物，當(dāng)達(dá)到一定數(shù)量后會(huì)對(duì)宿主健康產(chǎn)生有益作用的一類(lèi)微生物。益生菌可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，促進(jìn)有害物質(zhì)的代謝以及產(chǎn)生抑菌物質(zhì)和益生物質(zhì)（如維生素、多糖等）等發(fā)揮益生作用[1]，也可以通過(guò)增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)吸收改善腸道微生物平衡[2]。益生菌的益生特性包括腸道定植、抑菌[3]、抗氧化能力[4]和安全性等[5-6]。研究最多的益生菌主要是能在胃腸道中存活的雙歧桿菌和乳酸菌。乳酸菌是一類(lèi)可以利用碳水化合物，并能產(chǎn)生乳酸的革蘭氏陽(yáng)性、無(wú)芽孢的一類(lèi)細(xì)菌總稱(chēng)。乳酸菌是重要的發(fā)酵菌群，廣泛存在于傳統(tǒng)發(fā)酵食品中。趙圣明等[7]從發(fā)酵酸菜中篩選出疏水性、黏附性和自凝聚特性較好的植物乳桿菌A4，其作為輔助發(fā)酵劑可以明顯提高發(fā)酵乳的活菌數(shù)和黏度。孫寧等[8]從自然發(fā)酵酸筍中篩選出6 株耐酸、耐膽鹽性能好且抗氧化活性強(qiáng)的乳酸菌。鄭柳青[9]從嬰兒腸道中分離篩選出鼠李糖乳桿菌LR-ZB 1107-01的益生特性最好，并優(yōu)化了菌株高密度培養(yǎng)條件使得活菌數(shù)達(dá)到了9.08×108CFU/mL。陳美瑄[10]從40 份母乳樣品中篩選出2 株益生特性好的乳酸菌分別為乳雙歧桿菌Probio-M8和鼠李糖乳桿菌Probio-M9，之后將2 株菌與基礎(chǔ)發(fā)酵劑（嗜熱鏈球菌和保加利亞乳桿菌）復(fù)配發(fā)酵山羊乳，制備得到具有優(yōu)良風(fēng)味和口感的發(fā)酵乳。Yu Zhihui等[11]從發(fā)酵酸菜中篩選得到的植物乳桿菌S2-5和S4-1具有良好的益生特性，且能有效降低小鼠體內(nèi)膽固醇含量。

雪蓮菌作為傳統(tǒng)發(fā)酵食品在西藏、青海地區(qū)有長(zhǎng)期食用歷史[12-13]。雪蓮菌作為天然混菌發(fā)酵系統(tǒng)，在長(zhǎng)期自然馴化過(guò)程中逐步形成由乳酸菌、酵母菌和醋酸菌等多種微生物組成的群落[14]，其中乳酸菌包括副干酪乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、鏈球菌和腸球菌等。課題組前期對(duì)雪蓮菌中的微生物進(jìn)行分離，得到20 株乳酸菌，本研究對(duì)其耐酸能力、模擬胃腸液耐受能力、黏附能力、抗氧化能力和抑菌能力等益生特性進(jìn)行研究，旨在從中篩選得到具有潛在益生特性的菌株，為其在益生產(chǎn)品中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

20 株乳酸菌為本實(shí)驗(yàn)室從雪蓮菌中分離得到，于-80 ℃條件下保存。

MRS培養(yǎng)基：蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、葡萄糖20 g、無(wú)水乙酸鈉5 g、酵母提取物5 g、檸檬酸三胺2 g、磷酸氫二鉀2 g、硫酸鎂0.1 g、吐溫-80 1 mL，蒸餾水1 000 mL，pH 6.5，115 ℃滅菌20 min。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g、酵母粉5 g、氯化鈉10 g，pH 7.0～7.2，115 ℃滅菌20 min。

胃蛋白酶、胰蛋白酶、豬膽鹽 上海源葉生物科技有限公司；抗生素 北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司；脫脂棉羊血（無(wú)菌） 北京索萊寶科技有限公司；哥倫比亞血培養(yǎng)基 青島高科園海博生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-1200紫外分光光度計(jì) 上海美普達(dá)儀器有限公司；L530ZXJD-A1270培養(yǎng)箱、ZHJH-C1115B超凈工作臺(tái) 上海智城分析儀器制造有限公司；Centrifuge 5430R離心機(jī) 德國(guó)艾本德有限公司。

1.3 方法

1.3.1 菌株和培養(yǎng)條件

將乳酸菌菌株在MRS培養(yǎng)基中于37 ℃靜置培養(yǎng)24 h，活化3 代。

1.3.2 菌懸液的制備

將1.3.1節(jié)活化3 代的菌液離心，棄上清液，用pH 7.4磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗3 次，再加入PBS振蕩均勻制成懸浮液，調(diào)節(jié)菌體濃度至1.0×108CFU/mL（OD595nm＝1.0）。

1.3.3 乳酸菌的酸耐受性測(cè)定

按體積分?jǐn)?shù)1%取菌懸液接種到MRS液體培養(yǎng)基中（用2 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH 3.0或2.5），37 ℃靜置培養(yǎng)24 h后，取100 μL涂布于MRS瓊脂板上，置于37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察平板菌落生成情況。

1.3.4 乳酸菌在模擬消化液下的存活率

1.3.4.1 乳酸菌在模擬胃液下的存活率

選取耐pH 2.5的乳酸菌按1.3.2節(jié)制成菌懸液，取1 mL菌懸液與9 mL pH 3.0模擬胃液混勻，37 ℃靜置培養(yǎng)，分別在0、3 h后取樣梯度稀釋后涂布于MRS瓊脂平板上，按式（1）計(jì)算存活率[15]。選擇活菌數(shù)在106CFU/mL以上的乳酸菌進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

式中：Nm和Nn分別表示模擬胃液或腸液消化前后活菌數(shù)/（CFU/mL）。

1.3.4.2 乳酸菌在模擬腸液下的存活率

取1 mL菌懸液與9 mL pH 3.0模擬胃液混勻，37 ℃靜置培養(yǎng)3 h后，取1 mL經(jīng)模擬胃液消化后的菌液與9 mL pH 8.0模擬腸液混勻，37 ℃靜置培養(yǎng)，分別在0、4 h取樣，梯度稀釋后涂布于MRS瓊脂平板上，按式（1）計(jì)算存活率。

1.3.5 乳酸菌的體外黏附能力測(cè)定

1.3.5.1 疏水性測(cè)定

將乳酸菌懸液OD595nm調(diào)整為0.8～1.0。1 mL溶劑（正己烷、二氯甲烷、乙醚或乙酸乙酯）中加入3 mL乳酸菌懸液，在37 ℃反應(yīng)10 min，進(jìn)行溫度平衡，振蕩混勻，在37 ℃培養(yǎng)3 h。取1 mL水相溶液，用紫外分光光度計(jì)于595 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD595nm。疏水性按式（2）計(jì)算[16]。

式中：ODi為培養(yǎng)0 h的OD595nm；ODj為培養(yǎng)3 h的OD595nm。

1.3.5.2 自聚集性測(cè)定

將乳酸菌懸液OD595nm調(diào)整為0.9～1。在37 ℃培養(yǎng)0 h時(shí)，測(cè)定菌懸液OD595nm，培養(yǎng)3 h后小心吸取溶液的上層相測(cè)定OD595nm。按式（3）計(jì)算自凝聚率[16]：

式中：ODi為培養(yǎng)0 h的OD595nm；ODj為培養(yǎng)3 h的OD595nm。

1.3.6 乳酸菌的抗氧化活性測(cè)定

1.3.6.1 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除活性

將2 mL OD595nm為0.9～1的乳酸菌懸液與1 mL 0.2 mmol/L DPPH-無(wú)水乙醇溶液混勻，37 ℃于暗處反應(yīng)30 min，6 000 r/min離心10 min，取上清液，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度A1；空白組以等體積無(wú)水乙醇代替DPPH-無(wú)水乙醇溶液，對(duì)照組則以等體積蒸餾水代替樣品溶液，等體積的蒸餾水-無(wú)水乙醇混合液用于空白調(diào)零。DPPH自由基清除率按式（4）計(jì)算[17]：

式中：A0為空白組吸光度；A1為樣品組吸光度；A2為對(duì)照組吸光度。

1.3.6.2 羥自由基清除活性

取5 mmol/L硫酸亞鐵溶液、5 mmol/L水楊酸乙醇溶液、3 mmol/L過(guò)氧化氫溶液各1 mL加入10 mL具塞試管中，加2 mL OD595nm為0.9～1的乳酸菌懸液，用蒸餾水補(bǔ)齊至刻度，37 ℃水浴中反應(yīng)15 min，6 000 r/min離心10 min，取上清液，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，蒸餾水為空白對(duì)照[18]。羥自由基清除率按式（5）計(jì)算：

式中：A0為空白組吸光度；A1為樣品組吸光度。

1.3.6.3 超氧陰離子自由基清除活性

取4.5 mL 0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液（pH 8.2，含2 mmol/L乙二胺四乙酸），25 ℃水浴反應(yīng)20 min，加2.3 mL OD595nm為0.9～1的乳酸菌懸液和2.2 mL 25 mmol/L鄰苯三酚溶液，混合均勻后，25 ℃水浴反應(yīng)4 min，加1 mL 10 mol/L HCl溶液終止反應(yīng)，6 000 r/min離心10 min，取上清液，于320 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，蒸餾水為空白對(duì)照[19]。超氧陰離子自由基清除率按式（5）計(jì)算。

1.3.6.4 還原能力的測(cè)定

采用鐵氰化鉀法[20-21]，取0.5 mL OD595nm為0.9～1的乳酸菌懸液，加0.2 mol/L PBS及1 g/100 mL鐵氰化鉀溶液各0.5 mL，混合均勻。50 ℃水浴20 min，驟冷。加0.5 mL 10 g/100 mL三氯乙酸溶液，4 000 r/min離心5 min，取上清液1 mL，加超純水、0.1 g/100 mL三氯化鐵溶液各1 mL，混勻，靜置10 min，于700 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。用PBS代替菌懸液為空白對(duì)照，還原能力按式（5）計(jì)算。

1.3.7 乳酸菌的抗菌活性測(cè)定

利用雙層瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定菌株的抗菌活性[22]。3種食源性病原體包括大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌被用作指示菌。在滅菌平板中加入10 mL 2 g/100 mL水瓊脂培養(yǎng)基，待水瓊脂凝固后放入滅菌的牛津杯。在20 mL LB瓊脂培養(yǎng)基中加入106～107CFU/mL的指示菌，充分混勻后倒入平板內(nèi)，待培養(yǎng)基凝固后，將牛津杯取出，在孔內(nèi)分別加入8 株乳酸菌菌懸液180 μL，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并測(cè)量抑菌圈直徑大小。

1.3.8 乳酸菌的安全性評(píng)價(jià)

1.3.8.1 抗生素敏感性

將100 μL 106～107CFU/mL乳酸菌菌株均勻涂布于MRS培養(yǎng)基，將抗生素紙片貼在表面。37 ℃培養(yǎng)24 h，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑，并將結(jié)果與美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）標(biāo)準(zhǔn)2012進(jìn)行比較，評(píng)估抗生素敏感性[23]。

1.3.8.2 溶血活性

將乳酸菌在添加5%無(wú)菌脫纖維羊血的哥倫比亞血瓊脂表面劃線，37 ℃培養(yǎng)24～48 h。根據(jù)不同的光暈評(píng)估平板的溶血活性。沒(méi)有明確的透明區(qū)域被確定為非溶血性[24]。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 雪蓮菌中乳酸菌的酸耐受性

耐酸性是選擇益生菌菌株的重要標(biāo)準(zhǔn)。益生菌進(jìn)入消化道后首先會(huì)遇到惡劣的胃腸道環(huán)境，它們必須能夠在酸性環(huán)境下生存。人體胃液的pH值處于不斷變化的過(guò)程中，通常維持在pH 3.0左右。大多數(shù)候選菌株的體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)發(fā)展為能夠耐受pH 3.0以下的低pH值條件[25]，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇pH 2.5和3.0作為篩選候選益生菌菌株的耐酸性指標(biāo)。由表1可知，從雪蓮菌中分離出的20 株乳酸菌除FQ菌株，其余19 株菌株都能在pH 3.0下存活，但是只有11 株菌株能在pH 2.5的酸性條件下生長(zhǎng)。

表1 雪蓮菌中乳酸菌在pH 2.5和pH 3.0條件下生長(zhǎng)情況Table 1 Growth status of lactic acid bacteria isolated from Tibetan kefir grains at pH 2.5 and 3.0

2.2 雪蓮菌中乳酸菌在模擬胃液中的存活率

選取能在pH 2.5酸性條件下生長(zhǎng)的11 株乳酸菌用于測(cè)定模擬胃液的存活率。由圖1可知，11 株乳酸菌在pH 3.0模擬胃液中處理3 h后，菌株均具有一定的耐受能力，但是差異較大。菌株BG-1、B5-27、RG、GG-2、GG-1、KF2-5在模擬胃液中存活率較高，均大于100%。CQ-2、NC-1、BG-2、B5-29存活率中等，MQ-1存活率最低為1.67%，但活菌數(shù)仍高于106CFU/mL。

圖1 模擬胃液中乳酸菌活菌數(shù)的測(cè)定結(jié)果Fig. 1 Viable counts of LAB cultured in simulated artificial gastric fluid

2.3 雪蓮菌中乳酸菌在模擬腸液中的存活率

由圖2可知，經(jīng)耐酸性篩選出的11 株乳酸菌，在pH 3.0模擬胃液中處理3 h后繼續(xù)用pH 8.0的模擬腸液處理4 h，除菌株B5-27、B5-29和MQ-1，其余8 種菌株均具有一定的耐受能力。菌株BG-2在模擬腸液中存活率較高，為119.56%。其余8 株菌株經(jīng)模擬胃腸液消化后存活率由大到小依次為GG-1、BG-1、CQ-2、NC-1、B5-29、KF2-5、GG-2、RG，活菌數(shù)均高于106CFU/mL。

圖2 模擬腸液中乳酸菌活菌數(shù)的測(cè)定結(jié)果Fig. 2 Viable counts of LAB cultured in simulated artificial intestinal fluid

2.4 雪蓮菌中乳酸菌的自凝聚性

選擇經(jīng)模擬胃腸液消化后活菌數(shù)仍在106CFU/mL以上的8 株乳酸菌菌株進(jìn)行后續(xù)益生特性分析。自凝聚指細(xì)胞之間的聚集，與沒(méi)有自凝聚性的微生物相比，具有自凝聚性的微生物細(xì)胞在惡劣環(huán)境（如人類(lèi)胃腸道）中具有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)[26]。自凝聚的形成使中心細(xì)胞屏蔽了外界有害環(huán)境[27]。由圖3可知，菌株RG和GG-2有較高的自凝聚性，自凝聚率分別為65.70%和63.67%。BG-1和GG-1自凝聚率分別為37.47%和35.59%，NC-1、KF2-5、BG-2和CQ-2自凝聚率分別為32.33%、30.28%、28.61%和23.99%。

圖3 雪蓮菌中乳酸菌的自凝聚性Fig. 3 Auto-aggregation capacity of LAB

2.5 雪蓮菌中乳酸菌的疏水性

疏水性對(duì)于益生菌黏附在胃腸道上皮細(xì)胞上至關(guān)重要，菌株可以提供預(yù)防性和治療性的益生作用[28]。由圖4可知，BG-2、GG-2、KF2-5和RG對(duì)乙酸乙酯有較高的疏水性，分別為76.95%、73.01%、65.45%和64.66%。BG-1和RG對(duì)乙醚（47.90%和36.59%）和二氯甲烷（32.36%和32.61%）的疏水性處于中等水平。8 株乳酸菌對(duì)乙醚的疏水性都處于中等水平，對(duì)正己烷和二氯甲烷的疏水性都處于較低水平。

圖4 雪蓮菌中乳酸菌菌株的疏水性Fig. 4 Hydrophobicity of LAB

2.6 雪蓮菌中乳酸菌的抗氧化活性

由圖5可知，8 株乳酸菌的DPPH自由基清除活性差異較大，菌株RG的DPPH自由基清除活性較高，為72.93%，BG-2、KF2-5和NC-1處于中等水平，分別為34.24%、32.13%和43.23%，BG-1、GG-1、GG-2和CQ-2均小于30%。8 株乳酸菌的羥自由基清除活性均大于36%，KF2-5的羥自由基清除活性最高，達(dá)60.39%，其余7 株乳酸菌羥自由基清除活性均在36%～56%。8 株乳酸菌的超氧陰離子自由基清除活性均較差，僅KF2-5和RG大于30%，其余6 株菌株均小于30%。但是8 株乳酸菌的還原能力都較強(qiáng)，均大于61%，RG還原能力最強(qiáng)，達(dá)到115.48%。

圖5 雪蓮菌中乳酸菌菌株的抗氧化活性Fig. 5 Antioxidant activity of LAB

2.7 雪蓮菌中乳酸菌的抑菌性

乳酸菌可以抑制病原菌的生長(zhǎng)繁殖，有助于胃腸道環(huán)境健康[29]。8 株乳酸菌對(duì)3種指示菌的抑菌結(jié)果如表2所示。8 株乳酸菌對(duì)3種病原菌均有一定的抑制作用。8 株菌株對(duì)大腸桿菌的抑制效果較金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌高，其中菌株KF2-5和RG對(duì)3種病原菌抑制效果均最好。綜上，KF2-5和RG具有較好的益生特性。

表2 雪蓮菌中乳酸菌菌株的抑菌活性Table 2 Antibacterial activity of LAB

2.8 雪蓮菌中乳酸菌的安全性

2.8.1 抗生素敏感性

耐藥性是乳酸菌在應(yīng)用安全方面的重要問(wèn)題[30]?？股仉m然具有抑菌作用，但是也會(huì)使人體產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致腸道菌群紊亂[31]。根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)2012對(duì)KF2-5和RG菌株進(jìn)行抗生素敏感性評(píng)價(jià)，結(jié)果見(jiàn)表3。KF2-5和RG對(duì)紅霉素、卡那霉素、氯霉素和四環(huán)素均敏感。KF2-5對(duì)鏈霉素和慶大霉素中度敏感，RG對(duì)環(huán)丙沙星、青霉素和頭孢曲松中度敏感。KF2-5對(duì)環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟和萬(wàn)古霉素耐藥，RG對(duì)鏈霉素、慶大霉素、頭孢噻肟和萬(wàn)古霉素耐藥。據(jù)報(bào)道很多乳酸菌對(duì)鏈霉素、萬(wàn)古霉素的耐藥性是先天固有的，且這種耐藥性一般不會(huì)轉(zhuǎn)移傳遞給致病菌[32]。

表3 雪蓮菌中乳酸菌菌株的抗生素敏感性Table 3 Antibiotic susceptibility of LAB

2.8.2 溶血活性

由圖6可知，KF2-5和RG菌株均沒(méi)有溶血現(xiàn)象，說(shuō)明這2 株乳酸菌均是安全的，可以為之后進(jìn)一步發(fā)酵提供安全性保障。

圖6 雪蓮菌中乳酸菌菌株的溶血活性Fig. 6 Hemolytic activity of LAB

3 討 論

本研究從實(shí)驗(yàn)室已有雪蓮菌中分離得到的20 株乳酸菌中篩選出8 株具有胃腸液耐受性能力的乳酸菌，進(jìn)一步對(duì)其益生特性研究，得到2 株具有潛在益生特性的乳酸菌。

目前關(guān)于益生菌的研究受到越來(lái)越多的關(guān)注，然而胃腸道系統(tǒng)復(fù)雜，益生菌進(jìn)入胃腸道后首先要能夠耐受胃腸道的惡劣環(huán)境[33]，同時(shí)應(yīng)具有良好的腸道黏附性能才能定植于腸道，進(jìn)而發(fā)揮其益生作用，因此益生菌應(yīng)該同時(shí)具有胃腸液耐受性能力與腸道黏附能力，自凝聚性和疏水性是表征益生菌腸道表皮黏附能力的重要指標(biāo)。目前，從傳統(tǒng)發(fā)酵食品中篩選益生菌是一個(gè)研究的熱點(diǎn)。Gunyakti等[23]從發(fā)酵食品、水果、蔬菜中篩選得到戊糖片球菌CHIG、NAG1和植物乳桿菌V3F對(duì)低pH值和高膽鹽均有較好的耐受性。Yu等[34]從泡菜中篩選到魏斯氏菌D29具有較強(qiáng)的耐酸和耐膽鹽能力。本研究篩選得到8 株對(duì)胃腸液耐受性較好的乳酸菌，這些菌經(jīng)過(guò)模擬胃腸液消化后活菌數(shù)均能達(dá)到106CFU/mL以上。

自凝聚性和疏水性是細(xì)菌黏附在腸道表皮的重要指標(biāo)，通常認(rèn)為自凝聚性和疏水性高的菌株對(duì)細(xì)胞的黏附性也高。趙雪婷等[35]對(duì)3 株人源干酪乳桿菌進(jìn)行益生特性研究，結(jié)果表明3 株干酪乳桿菌自凝聚率均為70%以上，疏水性均為86%以上。趙圣明等[7]從發(fā)酵酸菜中篩選出植物乳桿菌A44，其對(duì)氯仿和二甲苯的疏水性均大于80%。本研究篩選出的鼠李糖乳桿菌RG的自凝聚性和對(duì)乙酸乙酯的疏水性均較高，分別為65.70%和64.66%，表明其具有較好的黏附性。

腸道微生物群的生理平衡非常重要，因?yàn)樵S多疾病與腸道微生物群的失調(diào)有關(guān)。已有報(bào)道表明乳酸菌可通過(guò)其抗氧化活性調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生物群的穩(wěn)態(tài)[4]。本研究中KF2-5的羥自由基清除活性最高（60.39%），RG的DPPH自由基清除活性最高（72.93%），且2 株菌的還原能力也較強(qiáng)，RG的還原能力最強(qiáng)，達(dá)到115.48%，KF2-5的還原能力為77.98%。Yu等[34]從泡菜中篩選到魏斯氏菌D30具有較強(qiáng)的抗氧化能力，為29.53%～67.81%。后續(xù)可對(duì)益生菌調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激，改善腸道抗氧化防御系統(tǒng)方面[36]作進(jìn)一步研究。

在健康的腸道微生物群中，有益微生物產(chǎn)生的抗菌化合物可以防止病原體過(guò)度生長(zhǎng)[3,37]。本研究中KF2-5和RG對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌抑制效果最好。高云云等[38]從新疆傳統(tǒng)乳品中篩選出植物乳桿菌1-3和1-6對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制效果最好，其抑菌圈直徑與本研究接近。抑菌作用一方面是因?yàn)楫a(chǎn)生有機(jī)酸而達(dá)到抑菌效果，另一方面可能和其產(chǎn)生的其他非酸性化合物有關(guān)。

抗生素敏感性和溶血活性是體外測(cè)定益生菌安全性的指標(biāo)，不同菌株對(duì)抗生素的耐藥性不同。目前的研究發(fā)現(xiàn)，大部分乳酸菌都沒(méi)有溶血活性。本研究中KF2-5和RG對(duì)紅霉素、卡那霉素、氯霉素和四環(huán)素均敏感，對(duì)頭孢噻肟和萬(wàn)古霉素耐藥。Nami等[24]從酸奶中篩選出的植物乳桿菌YS5對(duì)紅霉素、卡那霉素和四環(huán)素等敏感，對(duì)萬(wàn)古霉素和環(huán)丙沙星耐藥，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。有研究稱(chēng)一些乳酸菌有溶血活性，Argyri等[39]從發(fā)酵橄欖中篩選出71 株乳酸菌進(jìn)行溶血實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有4 株菌有溶血活性。本實(shí)驗(yàn)中篩選出的2 株乳酸菌均無(wú)溶血活性，說(shuō)明可以用于后續(xù)發(fā)酵。

目前，益生菌的概念已被廣泛熟知和認(rèn)可，然而對(duì)于益生菌的功能機(jī)理、遺傳轉(zhuǎn)化及代謝調(diào)控[40]仍需不斷深入研究。

4 結(jié) 論

本研究對(duì)分離自雪蓮菌的乳酸菌進(jìn)行益生特性研究，篩選出2 株潛在益生特性較好的乳酸菌，分別為副干酪乳桿菌KF2-5和鼠李糖乳桿菌RG。菌株RG的自凝聚性、疏水性、抗氧化能力和抑菌性能均較好，菌株KF2-5的疏水性、抗氧化能力和抑菌性能較好。2 株菌對(duì)紅霉素、卡那霉素、氯霉素和四環(huán)素敏感，對(duì)頭孢噻肟和萬(wàn)古霉素耐藥，并且均無(wú)溶血活性。

近年來(lái)，在國(guó)家“健康中國(guó)”戰(zhàn)略驅(qū)動(dòng)下，人們對(duì)營(yíng)養(yǎng)健康的需求進(jìn)一步提升，對(duì)益生菌調(diào)節(jié)健康的需求日益增多，益生菌產(chǎn)業(yè)增長(zhǎng)較快，本研究從雪蓮菌中分離的乳酸菌中篩選出2 株潛在益生特性較好的乳酸菌，后期可將這2 株乳酸菌進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究其具體的益生性能，并應(yīng)用于發(fā)酵制品或其他益生產(chǎn)品中。