●高子陽(yáng) 姜 鵬 詹常森（上海和黃藥業(yè)有限公司 上海 201499）

中華大蟾蜍（Bufo gargarizans gargarizans）俗稱癩蛤蟆，隸屬于兩棲綱（Amphibia）無(wú)尾目（Anura）蟾蜍科（Bufonidae）蟾蜍屬（Bufo）。在我國(guó)東北、華北、華東、華中、西北、西南等省區(qū)均有分布，國(guó)外分布在俄羅斯、朝鮮[1]。蟾蜍不但是農(nóng)作物、牧草和森林害蟲(chóng)的天敵，而且是動(dòng)物藥蟾酥的藥源[2-3]。蟾酥是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，是中華大蟾蜍耳后腺分泌漿液經(jīng)干燥加工后制成。蟾酥所含成分復(fù)雜，通過(guò)對(duì)蟾酥的分離鑒定，已確定的化學(xué)成分主要包含蟾蜍毒素類、甾醇類、蟾毒色胺類、氨基酸、有機(jī)酸等[4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，蟾酥具有抑制腫瘤細(xì)胞、強(qiáng)心、抗心肌缺血、升壓、局部麻醉、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用，且在臨床上應(yīng)用廣泛[5]。由于環(huán)境破壞和不合理利用，中華大蟾蜍的野生資源日益枯竭，開(kāi)展規(guī)范化人工養(yǎng)殖才能滿足日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求[6]。

當(dāng)前，蟾酥市場(chǎng)缺口大，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，而中華大蟾蜍的人工養(yǎng)殖技術(shù)仍未成熟，現(xiàn)有的蟾蜍養(yǎng)殖戶多以探索性為主，養(yǎng)殖效益較低、規(guī)模小。研究學(xué)者已經(jīng)對(duì)中華大蟾蜍及其蝌蚪的食性[7]、變態(tài)與發(fā)育[8]、養(yǎng)殖密度[9]、蟾蜍耳后腺分子生物學(xué)、組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)[10]及蟾蜍適宜的生態(tài)環(huán)境[11]等方面進(jìn)行了大量的基礎(chǔ)性研究。而對(duì)中華大蟾蜍養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖病害防治、人工育種、人工配合飼料和投喂模式等研究較少。

攝食節(jié)律是動(dòng)物不同時(shí)間內(nèi)攝食強(qiáng)度變化的規(guī)律，是動(dòng)物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中對(duì)光周期、溫度、餌料豐度等周期性變化主動(dòng)適應(yīng)的結(jié)果?？茖W(xué)投喂模式的建立要以養(yǎng)殖動(dòng)物自身的攝食節(jié)律為基礎(chǔ)[12]。中華大蟾蜍的攝食節(jié)律研究有利于調(diào)整養(yǎng)殖蟾蜍投喂時(shí)間和投喂量，減少飼料浪費(fèi)，提高餌料利用率。龔雙姣等[13]研究了中華大蟾蜍蝌蚪階段（孵出后54日齡）的攝食節(jié)律，而中華大蟾蜍幼蟾階段攝食節(jié)律的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究觀察中華大蟾蜍幼蟾在不同投喂頻率下的攝食情況，總結(jié)其攝食節(jié)律，為中華大蟾蜍幼蟾養(yǎng)殖最佳投喂模式的確定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在塑料養(yǎng)殖盒中進(jìn)行，塑料養(yǎng)殖箱規(guī)格為長(zhǎng)、寬、高70 cm×40 cm×20 cm，將養(yǎng)殖箱傾斜放于地面，箱底與地面呈15°夾角，養(yǎng)殖箱內(nèi)注入曝氣自來(lái)水，水面占箱底面積的1/3，水深5 cm。在水中鋪設(shè)空心蓮子草和瓦片，便于幼蟾棲息隱蔽。試驗(yàn)期間，每天更換一次水體，每次更換水體的1/2左右。水溫維持在23.2～24.1℃，環(huán)境濕度保持在60%～80%，氨氮濃度低于0.1 mg/L，pH 7.0～7.6。試驗(yàn)在12 h白天、12 h夜晚的自然光周期下進(jìn)行。塑料養(yǎng)殖箱放置于光照良好、通風(fēng)和安靜的室內(nèi)實(shí)驗(yàn)室中。

1.2 蟾蜍

所用幼蟾為山東中華大蟾蜍蝌蚪經(jīng)人工飼養(yǎng)變態(tài)得到的個(gè)體。試驗(yàn)前7 d選取規(guī)格基本一致，體重為0.6～1.0 g的健康幼蟾，每個(gè)養(yǎng)殖箱隨機(jī)放10只幼蟾，在相同環(huán)境下飼養(yǎng)馴化7 d后，開(kāi)始試驗(yàn)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)計(jì)了每日不同時(shí)間點(diǎn)8次投喂（組1）和每日不同時(shí)間點(diǎn)1次投喂（組2）2個(gè)組別，組1是 每 天 在05:00、08:00、11:00、14:00、17:00、20:00、23:00、02:00 8個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)幼蟾定量投喂適口的黃粉蟲(chóng)，2.5 h后收集殘餌稱重，每個(gè)養(yǎng)殖箱每天投喂8次，設(shè)3個(gè)重復(fù)組，共3個(gè)養(yǎng)殖箱；組2是在與組1相同的8個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)幼蟾投喂適口的黃粉蟲(chóng)，2.5 h后收集殘餌稱重，每個(gè)養(yǎng)殖箱每天投喂1次，設(shè)3個(gè)重復(fù)組，每個(gè)重復(fù)組8個(gè)養(yǎng)殖箱，共24個(gè)養(yǎng)殖箱。試驗(yàn)開(kāi)始前停食1 d并稱量每個(gè)重復(fù)組幼蟾的初始總體重，每次投喂各重復(fù)組幼蟾總體重10%的黃粉蟲(chóng)。試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)行7 d，試驗(yàn)結(jié)束后停食1 d并稱取每個(gè)重復(fù)組幼蟾終末總體重。取后5 d數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

使用攝食率作為評(píng)估攝食節(jié)律的指標(biāo)，其計(jì)算公式按照楊瑞斌等[14]所提供的方法進(jìn)行處理。

運(yùn)用Excel 2019進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，利用SPSS 22軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。不同時(shí)間點(diǎn)的攝食率經(jīng)單因素方差分析（ANOVA），進(jìn)行多重比較，評(píng)估各時(shí)間點(diǎn)攝食率的差異顯著性情況。使用t檢驗(yàn)比較分析2種投喂處理下相同時(shí)段攝食率的差異性。

2 結(jié)果與分析

2.1 日投喂 8 次條件下的攝食節(jié)律

攝食率是指攝食的餌料占動(dòng)物體重的百分比，在生產(chǎn)中，通常使用攝食率來(lái)衡量動(dòng)物的攝食情況。試驗(yàn)過(guò)程中，幼蟾的活動(dòng)正常，沒(méi)有死亡發(fā)生。如圖1所示，一日8次組幼蟾全天在不同時(shí)段均有攝食，并且在一天的攝食中呈現(xiàn)出明顯的節(jié)律性。日投喂8次條件下的試驗(yàn)結(jié)果表明，08:00幼蟾攝食率比其他各時(shí)段攝食率高，與除17:00、20:00時(shí)段外的其他時(shí)段存在顯著差異性（P＜0.05），17:00時(shí)段幼蟾攝食率比除08:00時(shí)段以外的其他組高，且與各時(shí)段差異均不顯著（P＞0.05），幼蟾在08:00和17:00出現(xiàn)攝食高峰，其余時(shí)間點(diǎn)攝食量較少；經(jīng)多重比較發(fā)現(xiàn)，幼蟾在夜晚投喂時(shí)段攝食率之和與白天投喂時(shí)段攝食率之和相比明顯較高。日投喂8次條件下，中華大蟾蜍幼蟾的單次攝食率為0.65%～5.75%，日平均攝食率為（15.22±0.56）%。本研究結(jié)果表明，在餌料豐盈時(shí)中華大蟾蜍幼蟾的攝食強(qiáng)度高，在餌料豐盈的條件下更趨向于早晨和傍晚攝食，這與其自然狀況下的生活習(xí)性是密不可分的，屬于比較典型的晨昏攝食型。

2.2 日投喂 1次條件下的攝食節(jié)律

圖1 所示一日1次組，中華大蟾蜍幼蟾在一天中的不同時(shí)間點(diǎn)均有攝食活動(dòng)，02:00和23:00投喂時(shí)段幼蟾攝食率比其他時(shí)段組攝食率低，與05:00、08:00、11:00、17:00時(shí)間段存在顯著差異（P＜0.05），08:00時(shí)段幼蟾攝食率比20:00攝食率高，但差異不顯著（P＞0.05），幼蟾在05:00、08:00、17:00出現(xiàn)攝食高峰，其他時(shí)間點(diǎn)攝食率較低，但在02：00攝食率最低。日（次）攝食率為3.24%～8.83%，日平均攝食率為（6.09±0.26）%，與一日8次投喂頻率時(shí)的日平均攝食率相比較低。本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，餌料豐富程度對(duì)中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律產(chǎn)生了影響，同時(shí)腸胃容量、腸胃排空時(shí)間、腸胃消化率等因素會(huì)對(duì)幼蟾攝食量產(chǎn)生影響。

2.3 2種投喂處理下同一時(shí)段的攝食率比較

如圖1所示，一日1次投喂頻率時(shí)，幼蟾每一時(shí)段的攝食率與一日8次投喂頻率條件下，同一時(shí)段的攝食率相比，日投喂1次幼蟾攝食率明顯較高，經(jīng)過(guò)t檢驗(yàn)后，結(jié)果表明，2種不同投喂處理下相同時(shí)段的攝食率差異顯著（P＜0.05），攝食率能夠反映幼蟾的攝食情況，說(shuō)明中華大蟾蜍幼蟾的攝食是受餌料豐度和腸胃容量雙重因素的影響。

圖1 不同投喂條件下中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律

3 結(jié)論與討論

3.1 中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律分析

本研究采用日攝食率法，探討了中華大蟾蜍幼蟾在一日1次投喂頻率和一日8次投喂頻率下的攝食節(jié)律。結(jié)果表明，幼蟾全天不同時(shí)段都有攝食，并且表現(xiàn)出明顯的節(jié)律性。攝食主要集中在05:00～08:00以及17:00左右，而在11:00～14:00和23:00～02:00，攝食處于低迷狀態(tài)，這與中華大蟾蜍蝌蚪攝食節(jié)律有相似趨勢(shì)[13]。在泰國(guó)虎紋蛙的規(guī)?；B(yǎng)殖中，飼料的投喂主要在06:00～07:00時(shí)和17:00～18:00[15]。在自然界內(nèi)，野生蟾蜍的攝食活動(dòng)主要集中在傍晚和清晨[16]，與本試驗(yàn)結(jié)論相似。多數(shù)動(dòng)物的攝食活動(dòng)都有明顯的日周期變化規(guī)律，根據(jù)動(dòng)物的攝食規(guī)律，可以將動(dòng)物攝食節(jié)律分為白天攝食、晚上攝食、晨昏攝食和無(wú)明顯節(jié)律型[17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，中華大蟾蜍幼蟾的攝食節(jié)律屬于晨昏攝食型。

結(jié)果表明，中華大蟾蜍幼蟾的攝食受餌料豐度和胃充塞度的影響，在相同的攝食時(shí)間，一日1次組的單次攝食率都顯著高于一日8次組的單次攝食率，而一日8次組的日攝食率顯著高于一日1次組的日攝食率。動(dòng)物的攝食節(jié)律是長(zhǎng)期進(jìn)化而來(lái)的內(nèi)源性節(jié)律，受光照、溫度、餌料豐度及不同發(fā)育時(shí)期等因素的影響[18-20]。李鵠鳴等[21]報(bào)道了水溫升高時(shí)棘胸蛙蝌蚪和牛蛙蝌蚪食量增加。蟾蜍在秋季時(shí)攝食量增大，為冬眠補(bǔ)足營(yíng)養(yǎng)[16]。本試驗(yàn)2種投喂模式下，相同時(shí)間段幼蟾的攝食率差異顯著，但是總體仍然呈現(xiàn)出晨昏攝食的規(guī)律。

3.2 中華大蟾蜍幼蟾投喂模式分析

投喂模式是由投飼量、投飼時(shí)間、投飼頻率、投飼模型等環(huán)節(jié)相互關(guān)聯(lián)組成的有機(jī)整體，是集約化養(yǎng)殖管理的核心之一，以獲得最優(yōu)生長(zhǎng)速率、最小飼料浪費(fèi)和最低水質(zhì)污染為目標(biāo)[18]。以養(yǎng)殖動(dòng)物內(nèi)源性攝食節(jié)律為生物學(xué)基礎(chǔ)，確定最佳投喂時(shí)間、最適投喂量，有利于提高動(dòng)物的飼料利用率，適宜的投喂時(shí)間應(yīng)該避免攝食低谷，選擇在動(dòng)物攝食高峰階段[22]。根據(jù)本研究結(jié)果，幼蟾在早晨和黃昏時(shí)段攝食率要顯著高于其他時(shí)段，因此每天可以分別在早晨和傍晚對(duì)幼蟾進(jìn)行投喂，投喂頻率2次/d。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，幼蟾的日平均攝食率約為15%，根據(jù)之前的養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，每天對(duì)幼蟾投喂幼蟾體重10%的黃粉蟲(chóng)即可獲得較好的養(yǎng)殖效果，幼蟾對(duì)黃粉蟲(chóng)的消化較好，而按15%投喂時(shí)，糞便中存在較多未完全消化的黃粉蟲(chóng)，因此每天早晚各投喂1次，每次的投喂量應(yīng)在5%左右。蟾蜍的攝食受溫度、季節(jié)、生長(zhǎng)階段的影響[16]。投喂量能顯著影響?zhàn)B殖動(dòng)物的生長(zhǎng)，需要根據(jù)蟾蜍的最高生長(zhǎng)率和最低飼料系數(shù)來(lái)綜合評(píng)定最適投喂量[12]，因此，養(yǎng)殖蟾蜍各階段的最適投喂量需要進(jìn)一步的研究探討。