徐成辰，呂 霞，楊淑嫻，吳 晗

（江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)測(cè)試中心，南京 210036）

江蘇是水稻大省，近年稻田雜草發(fā)生面積呈逐年擴(kuò)大趨勢(shì)，目前稻田雜草發(fā)生面積達(dá)12.72萬(wàn)hm2，占水稻種植面積的80%以上，防治面積達(dá)19.32萬(wàn)hm2。稗草是江蘇省稻田雜草優(yōu)勢(shì)草種，發(fā)生范圍廣，危害損失大，抗藥性上升快[1]。二氯喹啉酸一直被廣泛應(yīng)用于防治稻田稗草，其產(chǎn)品質(zhì)量直接關(guān)系到水稻安全生產(chǎn)。

二氯喹啉酸生產(chǎn)廠家眾多，市場(chǎng)抽檢結(jié)果表明部分產(chǎn)品中混有二氯喹啉酸鹽。二氯喹啉酸鹽是二氯喹啉酸與堿中和反應(yīng)的產(chǎn)物，兩者在理化性質(zhì)、劑型開發(fā)、應(yīng)用技術(shù)[2-3]、藥效[3]、殘留狀態(tài)乃至抗藥性等方面均有區(qū)別。在二氯喹啉酸產(chǎn)品中擅自添加二氯喹啉酸鹽，存在生產(chǎn)安全風(fēng)險(xiǎn)隱患，造成了一系列藥害事故。2012年，不法商人以購(gòu)進(jìn)的二氯喹啉酸鈉鹽為原料生產(chǎn)二氯喹啉酸可濕性粉劑并銷售，造成泰興稻田藥害面積達(dá)400多hm2，相關(guān)人員被追究刑事責(zé)任。農(nóng)藥產(chǎn)品脫離登記管理而進(jìn)入田間施用，各種潛在風(fēng)險(xiǎn)極大。二氯喹啉酸的田間施用對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量以及施用方法要求很高，多年來(lái)各種因素造成的二氯喹啉酸藥害事故頻頻發(fā)生[4-6]。因?yàn)槎揉岷投揉猁}在理化性質(zhì)、劑型開發(fā)、應(yīng)用技術(shù)、藥效殘留等各方面均存在著差異，若企業(yè)不經(jīng)過(guò)登記管理的各項(xiàng)安全試驗(yàn)評(píng)價(jià)而擅自添加二氯喹啉酸鹽，無(wú)疑增大了藥劑的施用風(fēng)險(xiǎn)。

《農(nóng)藥登記資料要求》明確規(guī)定：若有效成分以某種鹽的形式存在時(shí)，產(chǎn)品名稱、質(zhì)量分?jǐn)?shù)以實(shí)際存在形式表示，同時(shí)應(yīng)標(biāo)注有效部分和配對(duì)反離子含量。含有二氯喹啉酸鹽的二氯喹啉酸產(chǎn)品，未在產(chǎn)品名稱和標(biāo)準(zhǔn)中標(biāo)明鈉離子的存在和含量，明顯違反要求。目前也沒有任何二氯喹啉酸鹽劑型取得登記（或取得登記證但未體現(xiàn)鹽的特征），因此這類產(chǎn)品就可能涉及未登記生產(chǎn)甚至假農(nóng)藥的問題。

目前還沒有關(guān)于二氯喹啉酸產(chǎn)品中二氯喹啉酸鹽的鑒別方法報(bào)道，本研究建立了3種實(shí)驗(yàn)室鑒別方法，涵蓋初步判別、含量檢測(cè)以及離子定性定量等應(yīng)用場(chǎng)景，3種方法組成一整套鑒別方案，為市場(chǎng)監(jiān)管和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.0%），上海市農(nóng)藥研究所有限公司；二氯喹啉酸可濕性粉劑，二氯喹啉酸農(nóng)藥產(chǎn)品市場(chǎng)抽檢過(guò)程中的樣品。

1.2 儀器與試劑

Agilent-1100高效液相色譜儀配二極管陣列紫外檢測(cè)器及色譜工作站，美國(guó)安捷倫科技有限公司；AQ-IC離子色譜儀配電導(dǎo)檢測(cè)器，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；AS3120B超聲清洗機(jī)，天津奧特賽恩斯儀器有限公司；針筒過(guò)濾器，0.45μm濾膜，密理博（中國(guó)）有限公司。

乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純），德國(guó)默克公司；甲基磺酸（優(yōu)級(jí)純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99.0%），上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.3 含量鑒別法

1.3.1 液相色譜操作條件

色譜柱：Zorbax SB-C18不銹鋼色譜柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（60∶40，V/V）；流動(dòng)相流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：238 nm；進(jìn)樣體積：5μL。

1.3.2 配制二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液

準(zhǔn)確稱取二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品0.04 g（精確至0.000 01 g），添加適量甲醇充分超聲，使之完全溶解，冷卻至室溫，在100 mL容量瓶中用甲醇定容至刻度線，搖勻。

1.3.3 配制試樣溶液

準(zhǔn)確稱取二氯喹啉酸可濕性粉劑（精確至0.000 1 g）2份0.04 g的，分別添加至乙腈、甲醇中充分超聲，冷卻恢復(fù)至室溫，在100 mL容量瓶中分別用乙腈、甲醇定容至刻度線，搖勻并用0.45μm過(guò)濾器過(guò)濾。

1.3.4 進(jìn)樣測(cè)定

按照1.3.1中色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，當(dāng)相連2針峰面積的變化小于1.5%時(shí)，按標(biāo)準(zhǔn)品溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的順序，進(jìn)樣并分析測(cè)定。

1.3.5 二氯喹啉酸含量的計(jì)算

將相連2針試樣溶液及其前后標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的二氯喹啉酸峰面積分別算平均值，并按式（1）計(jì)算試樣中二氯喹啉酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

式中：m1、m2分別為二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品和試樣的稱樣質(zhì)量，g；F1、F2分別為二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液的峰面積平均值，mAU·min；w1為標(biāo)準(zhǔn)品中二氯喹啉酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

1.4 離子色譜法

1.4.1 離子色譜操作條件

陽(yáng)離子分析柱：250 mm×4.0 mm（i.d.）Dionex Ion Pac CS12A；淋洗液：甲基磺酸水溶液（c=12 mmol/L）；流速：1.0 mL/min；電導(dǎo)池溫度：35℃；柱溫：20℃；進(jìn)樣體積：25μL；保留時(shí)間：鈉離子約5.9 min。

1.4.2 鈉離子標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

在100 mL容量瓶中準(zhǔn)確稱取氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g（精確至0.000 1 g），用水定容搖勻。準(zhǔn)確移取上述溶液1 mL于100 mL容量瓶中，用水定容搖勻，備用。

1.4.3 試樣溶液的制備

在100 mL容量瓶中準(zhǔn)確稱取試樣0.05 g（精確至0.000 1 g），加入50 mL水，超聲振蕩10 min，冷卻至室溫，用水定容并搖勻過(guò)濾。

1.4.4 進(jìn)樣測(cè)定

按1.4.1中離子色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣鈉離子標(biāo)準(zhǔn)品溶液，當(dāng)相連2針峰面積的變化小于1.5%時(shí)，按標(biāo)準(zhǔn)品溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的順序，進(jìn)樣并分析測(cè)定。

1.4.5 鈉離子含量的計(jì)算

將相連2針試樣溶液及其前后標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的鈉離子峰面積分別算平均值，并按式（2）計(jì)算樣品中鈉離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（wNa+）。

式中：A1、A2分別為試樣溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液中鈉離子峰面積的平均值，mAU·min；m3為氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，g；w為氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)品中氯化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；m4為試樣的質(zhì)量，g；M1為鈉離子的摩爾質(zhì)量，22.99 g/mol；M2為氯化鈉的摩爾質(zhì)量，58.44 g/mol。

2 結(jié)果與分析

2.1 外觀鑒別法

稱取含二氯喹啉酸0.2 g的二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品、異常樣品二氯喹啉酸可濕性粉劑（精確至0.1 g），分別置于50 mL容量瓶中，用乙腈定容，超聲振蕩5 min，靜置觀察容器底部固體殘余物。利用二氯喹啉酸、二氯喹啉酸鹽在乙腈中溶解度差異進(jìn)行快速鑒別。二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品在乙腈中充分溶解，溶液稍渾濁，容器底部無(wú)明顯殘留物，而異常樣品二氯喹啉酸可濕性粉劑在容器底部出現(xiàn)很多不溶絮狀物。二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品、二氯喹啉酸異常樣品在乙腈的溶解圖見圖1。

圖1 二氯喹啉酸標(biāo)準(zhǔn)品、二氯喹啉酸異常樣品在乙腈中溶解圖

乙腈溶解后可以根據(jù)上述外觀初步推測(cè)樣品中是否含有二氯喹啉酸鹽。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行一步求證，首先更換前處理溶劑，將乙腈替換為甲醇，其余試驗(yàn)條件不變，結(jié)果為異常樣品溶液中沒有出現(xiàn)絮狀物，且按1.3進(jìn)行測(cè)定，甲醇前處理的二氯喹啉酸含量比乙腈前處理大幅上升。據(jù)此可以明確這些樣品中含有二氯喹啉酸鹽，且推測(cè)樣品中的二氯喹啉酸的存在形式在乙腈中的溶解度不佳，而在甲醇中溶解度較高，在流動(dòng)相的酸性條件下轉(zhuǎn)化為二氯喹啉酸，從而得以檢出。

2.2 含量鑒別法

為了在外觀鑒別的基礎(chǔ)上進(jìn)一步的確證，將樣品二氯喹啉酸可濕性粉劑、二氯喹啉酸鹽可濕性粉劑分別用乙腈、甲醇前處理后，反復(fù)試驗(yàn)的前處理，分別按1.3進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表1。

從表1可以發(fā)現(xiàn)，二氯喹啉酸樣品用乙腈、甲醇前處理后二氯喹啉酸的實(shí)測(cè)值與標(biāo)示值差別不大，而二氯喹啉酸鹽樣品用乙腈前處理測(cè)得二氯喹啉酸實(shí)測(cè)值明顯低于標(biāo)示值和甲醇前處理的結(jié)果。因此，當(dāng)產(chǎn)品用2種溶劑前處理后測(cè)定結(jié)果相差較大，結(jié)合外觀鑒別法，則檢測(cè)樣品中可能含有二氯喹啉酸鹽。需要注意的是，固體樣品可以直接用此法鑒別，含水液體樣品（懸浮劑等）需要將稱取的樣品干燥后再進(jìn)行前處理試驗(yàn)。

表1 樣品用乙腈、甲醇前處理后二氯喹啉含量實(shí)測(cè)值

2.3 離子色譜法

離子色譜法可以直接鑒定樣品中是否含有二氯喹啉酸反離子對(duì)以及反離子對(duì)品種和含量。將二氯喹啉酸鹽可濕性粉劑按1.4進(jìn)行測(cè)定，鈉離子標(biāo)準(zhǔn)品、二氯喹啉酸鹽可濕性粉劑的離子色譜圖分別見圖2、圖3。從圖中可以看出，樣品二氯喹啉酸中含有鈉離子。二氯喹啉酸鹽中鈉離子測(cè)定結(jié)果見表2。結(jié)果表明，二氯喹啉酸鹽可濕性粉劑中含有大量的鈉離子，證明樣品含有二氯喹啉酸鈉鹽。

圖2 鈉離子標(biāo)準(zhǔn)品的離子色譜圖

圖3 二氯喹啉酸鹽可濕性粉劑離子色譜圖

表2 異常二氯喹啉酸可濕性粉劑中鈉離子含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié) 論

二氯喹啉酸、二氯喹啉酸鹽兩者在理化性質(zhì)、劑型開發(fā)、應(yīng)用技術(shù)、藥效、殘留狀態(tài)乃至抗藥性等方面均有區(qū)別。由于二氯喹啉酸鹽和二氯喹啉酸在水中溶解度存在差異。二氯喹啉酸通常通過(guò)粉碎的方式配制成可濕性粉劑、懸浮劑等劑型，而二氯喹啉酸鈉鹽能溶解于水，添加適量的可溶性填料即可配制成親水性的可溶粉劑或者可溶粒劑。前者為固體小顆粒（10μm）的形態(tài)，而后者以離子的形態(tài)被雜草葉片氣孔吸收。與前者相比，后者更易被吸收，起效更快[3]。從價(jià)格看，純度較高的二氯喹啉酸鹽單價(jià)并不低于二氯喹啉酸，因此市場(chǎng)上用“鹽”代“酸”的原因較為復(fù)雜，既有控制成本的可能，用二氯喹啉酸二次提純中間產(chǎn)物鹽[7]來(lái)代替二氯喹啉酸來(lái)配制農(nóng)藥；也有可能是為了縮短見效期、減小抗性等，從而在二氯喹啉酸可濕性粉劑中添加高純度鹽。但不管出于何種因素，這樣的行為違反農(nóng)藥登記的相關(guān)規(guī)定及要求，存在很多風(fēng)險(xiǎn)隱患，也曾造成相當(dāng)大的損失。

為了配合監(jiān)管需要，本研究開發(fā)出3種實(shí)驗(yàn)室鑒別二氯喹啉酸和二氯喹啉酸鹽的方法，分別是：“外觀鑒別法”“含量鑒別法”和“離子色譜法”?！巴庥^鑒別法”快速簡(jiǎn)便，可用于應(yīng)急速測(cè)和實(shí)驗(yàn)室初步判斷；“含量鑒別法”可以在外觀鑒別的基礎(chǔ)上進(jìn)行進(jìn)一步的確證，適用于大部分農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)；“離子色譜法”準(zhǔn)確性高，可以直接鑒別鹽的種類并進(jìn)行反離子對(duì)定量，但需要實(shí)驗(yàn)室配備離子色譜儀，對(duì)儀器條件要求較高。三者結(jié)合組成一整套鑒別方案，實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)需求場(chǎng)景自行選擇適宜的鑒別方法。

根據(jù)相關(guān)研究，二氯喹啉酸鹽與二氯喹啉酸相比，在制劑安全性、藥效以及抗性問題等多方面有其優(yōu)勢(shì)，前提是將其納入正常監(jiān)管程序，確保其符合農(nóng)藥登記的各方面要求。為規(guī)范二者生產(chǎn)和施用，針對(duì)行業(yè)現(xiàn)狀提出4點(diǎn)建議。第一，加大抽查力度，做好專項(xiàng)檢測(cè)。執(zhí)法部門對(duì)含有二氯喹啉酸的可濕性粉劑加大監(jiān)督抽檢力度，同時(shí)檢測(cè)機(jī)構(gòu)配合做好專項(xiàng)鑒別方案，打擊違規(guī)添加二氯喹啉酸鹽的行為，做好風(fēng)險(xiǎn)防控工作。第二，規(guī)范二氯喹啉酸鹽農(nóng)藥登記。按照農(nóng)藥登記管理的要求，規(guī)范二氯喹啉酸鹽各劑型產(chǎn)品名稱并補(bǔ)充完善相關(guān)登記資料，特別是產(chǎn)品化學(xué)資料中需要補(bǔ)充配對(duì)反離子對(duì)的鑒別方法和含量，規(guī)范二氯喹啉酸鹽的生產(chǎn)登記工作。第三，舉一反三，排查類似農(nóng)藥的登記和生產(chǎn)。以二氯喹啉酸為例，調(diào)研排查已登記農(nóng)藥品種在生產(chǎn)過(guò)程中是否有類似情況，重點(diǎn)是酸堿類農(nóng)藥，規(guī)范其衍生鹽的農(nóng)藥登記和生產(chǎn)工作，掃除監(jiān)管盲點(diǎn)。第四，鼓勵(lì)研發(fā)。針對(duì)二氯喹啉酸各類鹽與酸的差異性，鼓勵(lì)生產(chǎn)科研單位在劑型開發(fā)、生產(chǎn)工藝、應(yīng)用技術(shù)、藥效、殘留以及抗藥性等方面深入研究，把風(fēng)險(xiǎn)消弭在源頭，同時(shí)也讓老產(chǎn)品煥發(fā)出新活力。