高欣 程靜

梅毒是一種常見(jiàn)的傳染病，一般通過(guò)母嬰傳播和性傳播，傳染性較強(qiáng)。在生活中，梅毒主要被稱(chēng)為變態(tài)梅毒，梅毒是指人體內(nèi)發(fā)生梅毒時(shí)，會(huì)出現(xiàn)早產(chǎn)、流產(chǎn)或死產(chǎn)等情況，即使正確分娩，嬰兒也有出現(xiàn)先天性梅毒的危險(xiǎn)[1-2]，對(duì)孕婦和家庭生活都有影響。當(dāng)患者發(fā)展成梅毒時(shí)，體內(nèi)的梅毒螺旋周期會(huì)干擾中樞神經(jīng)系統(tǒng)，導(dǎo)致患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)提高，在嚴(yán)重情況下甚至?xí)?dǎo)致患者死亡和癡呆。梅毒是一種危害性很強(qiáng)的疾病，臨床上對(duì)梅毒的篩查和診斷迫在眉睫。梅毒特異性抗體的產(chǎn)生和消退要早于非特異性抗體，有的患者在整個(gè)生命過(guò)程中都會(huì)產(chǎn)生特異性的抗體，因而特異性抗體的檢測(cè)對(duì)于梅毒的診斷具有重要的意義，是一種很好的輔助診斷方法。因?yàn)椴煌臋z驗(yàn)手段，其誤檢率和錯(cuò)誤率也會(huì)存在差異[3-4]，本研究結(jié)合筆者多年的實(shí)際工作和現(xiàn)階段的臨床需要，運(yùn)用多種方法對(duì)梅毒進(jìn)行聯(lián)合檢驗(yàn)，建立一套合理的檢驗(yàn)流程，目的是對(duì)梅毒螺旋體（treponema pallidum，TP）進(jìn)行檢測(cè)[5]，對(duì)比i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫微粒子分析儀的化學(xué)發(fā)光性能試驗(yàn)（chemiluminescencemicroparticle immunoassays，CMIA）和CentaurXP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA），降低臨床中出現(xiàn)漏診和誤診幾率。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取南京醫(yī)科大學(xué)友誼整形外科醫(yī)院2020年1月—2021年12月疑似梅毒患者90例，作為本次研究對(duì)象，對(duì)90例患者分別使用i2000自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析（CMIA）和Centaur XP自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）對(duì)TPPA抗體進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。樣品吸光度與臨界值之比（S/CO）≥1.0為陽(yáng)性，并將結(jié)果與梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）結(jié)果進(jìn)行比較。其中患者男43例，女47例，平均年齡（58.21±11.29）歲，90例患者中有90份血清標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者無(wú)其他性疾病；I2000型全自動(dòng)分析儀對(duì)患者的首次陽(yáng)性樣品進(jìn)行分析；Centaur XP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀對(duì)患者的首次陽(yáng)性樣品進(jìn)行分析。排除標(biāo)準(zhǔn)：言語(yǔ)溝通障礙者；患有傳染性性疾病者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

本次儀器除了要采用Architect I2000自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀與匹配的TPPA抗體診斷試劑盒。Centaur XP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司）和TPPA抗體檢測(cè)試劑盒；TPPA梅毒抗體檢測(cè)試劑（日本富士日立株式會(huì)社）。對(duì)90例梅毒患者的血清標(biāo)本分別進(jìn)行CMIA、CLIA和TPPA并行梅毒血清學(xué)檢測(cè)。嚴(yán)格按照套件說(shuō)明書(shū)和儀器工作說(shuō)明書(shū) [標(biāo)準(zhǔn)操作流程（standard operating procedure，SOP）]進(jìn)行操作，并進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制和積極的室內(nèi)控制，操作方法按照《梅毒非特異性抗體檢測(cè)操作指南》[6]中的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

（1）結(jié)果評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：CMIA、CLIA儀器測(cè)試以S/CO值≥1.0為陽(yáng)性，S/CO＜1.0為陰性；如果敏感顆粒的孔隙呈不規(guī)則的集合，說(shuō)明TPPA檢測(cè)是陽(yáng)性的。3種測(cè)試方法的結(jié)果應(yīng)該嚴(yán)格記錄。

（2）為了計(jì)算TPPA的正確性，將CMIA與CLIA按不同的S/CO進(jìn)行比較，結(jié)果以CMIA與CLIA的S/CO值為1.00～2.99，3.00～4.99，5.00～6.99，7.00～8.99，9.00～10.99，＞10.99為界定，以計(jì)算TPPA的陽(yáng)性符合率。陽(yáng)性符合率計(jì)算公式為：陽(yáng)性符合率=[陽(yáng)性例數(shù)/（陽(yáng)性+陰性）例數(shù)]，比較兩種方法的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度。靈敏度=真陽(yáng)性/(真陽(yáng)性+假陰性)×100%;特異度=真陰性/(真陰性+假陽(yáng)性)×100%。準(zhǔn)確度=(真陽(yáng)性+真陰性)/總病例數(shù)×100%。分別用CMIA和CLIA的S/CO值繪制受試者的工作特性曲線(xiàn)（receiver operating characteristic curve，ROC），計(jì)算（ROC）曲線(xiàn)下面積（area under curve，AUC），確定兩種方法診斷梅毒的最佳截?cái)嘀怠?/p>

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 20.0軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（±s）表示，行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 比較患者TPPA、CMIA、CLIA的檢測(cè)結(jié)果

90例患者中，77例（85.56%）CMIA陽(yáng)性；78例CLIA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為86.67%；87例TPPA陽(yáng)性率為96.67%。以TPPA作為確診方法，CMIA和TPPA的陽(yáng)性率相比較后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.860，P＜0.05），CLIA和TPPA的陽(yáng)性率相比較后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.891，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 比較患者TPPA、CMIA、CLIA的檢測(cè)結(jié)果（%）

2.2 患者不同S/CO值分段CMIA和TPPA陽(yáng)性符合率

當(dāng)S/CO值為1.00～8.99時(shí)，CMIA和TPPA均有陰性的結(jié)果。當(dāng)S/CO值為≥9.00時(shí)，所有CMIA組的TPPA均呈陽(yáng)性，見(jiàn)表2。

表2 不同S/CO值分段CMIA和TPPA陽(yáng)性符合率

2.3 90例患者不同S/CO值分段CLIA和TPPA陽(yáng)性符合率

當(dāng)S/CO值為1.00～4.99時(shí)，CLIA和TPPA均有陰性的結(jié)果。當(dāng)S/CO值＞5.00時(shí)，所有CLIA組的TPPA均為陽(yáng)性，見(jiàn)表3。

表3 不同S/CO值分段CLIA和TPPA陽(yáng)性符合率

3 討論

梅毒是一種由梅毒螺旋引起的慢性疾病，近年來(lái)有向系統(tǒng)系疾病蔓延的趨勢(shì)，梅毒可以通過(guò)性傳播、母嬰傳播或者通過(guò)侵襲子宮黏膜危及孕婦健康。此外，通過(guò)輸血可能會(huì)引發(fā)一定程度細(xì)菌感染，對(duì)疾病的恢復(fù)極其不利?；加忻范镜脑袐D通過(guò)胎盤(pán)將先天性梅毒傳播給胎兒。一般來(lái)說(shuō)，在懷孕的前四個(gè)月，滋養(yǎng)層起到保護(hù)作用，使梅毒不易侵入，所以在妊娠的前4個(gè)月內(nèi)不能感染胎兒[7-8]，但4個(gè)月后滋養(yǎng)層萎縮，導(dǎo)致梅毒螺旋體侵入后，感染胎兒，因此，快速準(zhǔn)確的診斷非常重要。

早期梅毒的體液及細(xì)胞免疫反應(yīng)對(duì)梅毒的清除有一定的影響，但后期的細(xì)胞免疫應(yīng)答可能造成組織損害?；颊呗菪械谋砻娴鞍卓乖煞譃椴煌?lèi)型的抗原，具有稱(chēng)為特殊抗原的特定特征，致病性螺旋體也有非特異性的脂質(zhì)抗原，當(dāng)螺旋藻進(jìn)入體內(nèi)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生許多抗體，這些抗體可能對(duì)梅毒螺旋體的各種成分具有特殊性質(zhì)，細(xì)胞免疫和體液免疫在梅毒螺旋感染在不同時(shí)期發(fā)生作用[9-10]。兩種免疫的協(xié)同效應(yīng)使人體免于再次感染，但與梅毒的臨床表現(xiàn)相關(guān)聯(lián)，血清學(xué)通過(guò)檢查血液中是否存在特殊試劑和抗體來(lái)檢測(cè)梅毒，信任度測(cè)試是一種檢測(cè)抗脂蛋白的非特異性測(cè)試，稱(chēng)為初級(jí)篩選測(cè)試，CCIA和CLIA是對(duì)梅毒抗體的直接檢測(cè)[11-12]，因此可用于試驗(yàn)。

人是TP存在的唯一載體。梅毒患者未接受任何治療，一年之內(nèi)是最具傳染力的。因此，梅毒的血清學(xué)檢測(cè)在臨床上是非常有價(jià)值的。目前，臨床中主要采用血清學(xué)對(duì)梅毒進(jìn)行診斷。TP抗原會(huì)在被TP病毒感染時(shí)，激活機(jī)體的免疫應(yīng)答。導(dǎo)致身體產(chǎn)生梅毒相關(guān)抗體?；瘜W(xué)發(fā)光法是近幾年在臨床上廣泛使用的一種簡(jiǎn)便、自動(dòng)化程度高、成批檢驗(yàn)的新技術(shù)，已廣泛用于TP檢測(cè)。TPPA將TP菌株的菌體組成明膠微粒[13]，使其與血漿中TP特異性的結(jié)合，具有較高的敏感性和特異性。本研究采用CMIA法和CLIA法對(duì)所有患者進(jìn)行檢測(cè)，然后使用TPPA方法驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果，以評(píng)估血清學(xué)診斷技術(shù)的準(zhǔn)確性。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，CMIA和CLIA在診斷方面具有高度的準(zhǔn)確性。在本次研究過(guò)程中，為了體現(xiàn)CMIA和CLIA血清學(xué)檢測(cè)中的準(zhǔn)確度，先將TPPA診斷作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，再與CMLA核CLIA血清學(xué)進(jìn)行比較。 90例患者中，77例（85.56%）CMIA陽(yáng)性；78例CLIA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為86.67%；87例TPPA陽(yáng)性率為96.67%。以TPPA作為確診方法，CMIA和TPPA的陽(yáng)性率相比較后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.860，P＜0.05），CLIA和TPPA的陽(yáng)性率相比較后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.891，P＜0.05）。當(dāng)S/CO值為1.00～8.99時(shí)，CMIA和TPPA均有陰性的結(jié)果。當(dāng)S/CO值為≥9.00時(shí)，所有CMIA組的TPPA均呈陽(yáng)性。當(dāng)S/CO值為1.00～4.99時(shí)，CLIA和TPPA均有陰性的結(jié)果。當(dāng)S/CO值＞5.00時(shí)，所有CLIA組的TPPA均為陽(yáng)性。有研究表示[14-15]，因?yàn)門(mén)PPA較為麻煩，而且不能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，所以會(huì)給工作人員帶來(lái)更大的壓力，而且在某種程度上延長(zhǎng)了報(bào)告的周期。本研究結(jié)果表明，CMIA和CLIA都是理想的篩查方法。當(dāng)儀器制造商提供的S/CO值為1.00作為臨界值時(shí)，CMIA和CLIA的陽(yáng)性符合率分別為57.14%和66.67%。當(dāng)S/CO值為10.00時(shí)，兩者的陽(yáng)性符合率可達(dá)100%，當(dāng)S/CO值＞10.00時(shí)，無(wú)需重新檢查[16-19]。

綜上所述，當(dāng)梅毒的S/CO值＞10.00時(shí)，兩種自動(dòng)免疫化學(xué)發(fā)光分析顯示出敏感性和特異性。當(dāng)CMIA的S/CO值介于1.00至10.00之間，建議使用CLIA技術(shù)縮短樣品的持續(xù)時(shí)間，并添加TPPA系統(tǒng)，以確保CLIA的S/CO值小于4.70時(shí)結(jié)果的準(zhǔn)確性。