張 穩(wěn)，黃心慧，楊星瑞，周婷婷，高建義，李勇枝（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 安徽 合肥 001；.海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系,上海 004；.中國航天員科研訓(xùn)練中心,北京 100094）

在長期空間飛行特殊環(huán)境中，保持航天員的健康是航天任務(wù)成功的首要目標(biāo)。因此，安全有效的藥物治療和藥品保障對航天員的健康至關(guān)重要。然而用于長期太空飛行的藥物的穩(wěn)定性變化，不能用陸地環(huán)境穩(wěn)定性評價結(jié)果來判斷[1]，在陸地上藥物穩(wěn)定性主要受處方、溫度、光線、濕度和水分及包裝材料等因素影響。而航天環(huán)境受微重力、硬真空、濕度變化、溫差和輻射影響[2]，這些都可能導(dǎo)致藥物的不穩(wěn)定，其主要影響因素為空間輻射。空間輻射主要包括空間天然產(chǎn)生的非電離輻射和由人工產(chǎn)生的電離輻射。當(dāng)藥物暴露于任何電離輻射時，輻射導(dǎo)致藥物分子發(fā)生價層電子躍遷，與賦形劑發(fā)生相互作用，導(dǎo)致藥物的結(jié)構(gòu)發(fā)生一定變化，從而喪失藥理活性。

酒石酸唑吡坦(zolpidem tartrate)主要通過作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的苯二氮?受體，增強γ -氨基丁酸(GABA)系統(tǒng)的抑制機制，具有較強的鎮(zhèn)靜、催眠作用[3-4]。在載人航天特殊作業(yè)環(huán)境中，酒石酸唑吡坦可以用于治療睡眠障礙，緩解由其導(dǎo)致的焦慮等情緒，是“太空藥箱”的常用藥品之一[2]。

為了考察酒石酸唑吡坦片在太空環(huán)境中的穩(wěn)定性，以60Co 輻射為輻射源模擬太空的射線環(huán)境。輻射技術(shù)是20 世紀(jì)興起的一種滅菌及保鮮技術(shù)，是以Χ 射線、γ 射線等電離輻射產(chǎn)生的高能射線抑制病原生物的生長而達(dá)到殺蟲、殺菌等目的[5-6]。根據(jù)原中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布的《60Co 輻射中藥滅菌劑量標(biāo)準(zhǔn)》[7]和《美國藥典》42[8](USP42)對輻射滅菌的規(guī)定，選定了8、25、80 kGy 這3 個劑量，建立UHPLC 法測定不同劑量輻射下的酒石酸唑吡坦片的含量變化。實驗通過60Co 輻射因素對航天藥物穩(wěn)定性的影響，從而預(yù)測太空環(huán)境中藥品的有效期，為今后航天藥品的制劑工藝、包裝儲存等提供必要的研究資料。

1 儀器與試劑

LC-2030 PLUS 高效液相色譜儀（日本島津公司）包括LC-20ADXR 溶劑輸送泵，SPD-20A 紫外檢測器，SIL-20AXR 自動進樣器和CTO-20A 柱溫箱；60Co 輻照裝置（海軍軍醫(yī)大學(xué)輻照中心）。

酒石酸唑吡坦片 (思諾思，杭州賽諾菲制藥有限公司，批號ET098)，酒石酸唑吡坦對照品(純度99.8%，武漢賽維爾生物科技有限公司，批號201921)；甲醇(Merck 公司)，磷酸(上海安譜實驗科技股份有限公司)，三乙胺(上海安譜實驗科技股份有限公司)，均為色譜純;水為自制純化水（上海和泰儀器有限公司）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 輻射樣品制備

將酒石酸唑吡坦片（含包裝）置于輻照環(huán)境中，設(shè)定輻射劑量，按照接收劑量為0、8、25、80 kGy進行60Co 輻射，每天受輻照一次，于1 個月后取樣。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱定酒石酸唑吡坦對照品約10 mg，置10 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得酒石酸唑吡坦對照品儲備液；再精密量取1 ml，置100 ml 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為10 μg/ml 的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取0、8、25、80 kGy 輻射后的酒石酸唑吡坦片各10 片，精密稱定并研細(xì)成藥粉。精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于酒石酸唑吡坦10 mg）置于10 ml 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液1 ml，置100 ml 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱 為Inertsil C18柱(3.0 mm×150 mm，3.0 μm)，流動相為乙腈-甲醇-0.05 mol/L 磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH 值至5.5) (18∶26∶56)，檢測波長為254 nm，流速為0.7 ml/min，柱溫30℃，進樣量為10 μl，色譜圖中酒石酸唑吡坦的保留時間為3.92 min，理論塔板數(shù)按酒石酸唑吡坦峰計算大于5 000。精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度約為10 μg/ml 的對照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進樣6 次，測定峰面積，計算峰面積RSD 為0.06%，表明儀器精密度良好。每個輻射強度取1 批供試品，按照“2.3”項下配制供試品溶液，在上述色譜條件下進樣分析，對照品溶液及供試品溶液的色譜結(jié)果見圖1。

圖1 酒石酸唑吡坦超高效液相色譜圖（254 nm）

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取對酒石酸唑吡坦對照品儲備液適量置100 ml 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為5、10、20、40、80 μg/ml 的工作曲線溶液。按“2.4”項下色譜條件分別進樣10 μl 進行測定，記錄色譜圖。以酒石酸唑吡坦對照品濃度 (X，μg/ml)為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為0.999 6，結(jié)果表明酒石酸唑吡坦在5～80 μg/ml 濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取同一批未受輻射的酒石酸唑吡坦片樣品粉末（約相當(dāng)于酒石酸唑吡坦10 mg）6 份，照“2.3”項下制成供試品溶液，按“2.4”項下色譜條件分別進樣10 μl 測定，記錄峰面積，計算含量，其平均含量104.2%，RSD 為0.87%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取輻射強度為8 kGy 的供試品溶液，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按含量測定方法測定，在0、1、2、5、8、12 h 分別進樣10 μ1，記錄峰面積，峰面積RSD 為0.06%，表明溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取同一批未輻射酒石酸唑吡坦片樣品粉末（約相當(dāng)于酒石酸唑吡坦10 mg）3 份，分別置于10 ml 量瓶中，再精密稱取酒石酸唑吡坦對照品約8、10、12 mg 各3 份，分別置于上述3 個10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液1 ml，置 100 ml 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，每個濃度制備3 份。按“2.4”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算平均加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 酒石酸唑吡坦片加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.9 含量測定

每個輻射強度取1 批供試品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，平行3 份，在“2.4”項的色譜條件下進樣分析，記錄色譜峰面積，按照外標(biāo)法計算酒石酸唑吡坦含量，其 0、8、25 和80 kGy 輻射量下酒石酸唑吡坦平均含量分別為105.1%、106.4%、102.7%和105.4%（表2）。

表2 酒石酸唑吡坦片含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 含量測定方法及流動相確定

研究表明測定酒石酸唑吡坦原料藥和片劑含量的方法主要有分光光度法[9]、高效液相色譜法[10]和毛細(xì)管區(qū)帶電泳法[11]等。本實驗采用超高效液相色譜法，相比于傳統(tǒng)的高效液相色譜法，其色譜柱粒徑更小，柱效更高，出峰較快，大大提高了靈敏度和檢測效率。

在建立超高效液相色譜法方法過程中，曾選用乙腈-0.05 mol/L 磷酸溶液和甲醇-0.05 mol/L 磷酸溶液，但是色譜峰不能完全分離，干擾性大。最終選用乙腈-甲醇-0.05mol/L 磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH 值至 5.5) (18∶26∶56)，試驗結(jié)果表明，流動相中加入適量三乙胺調(diào)節(jié)其pH 值，在pH4.0～6.5 的范圍內(nèi)，分離度隨pH 值增大而增大[12]，pH值<4.5 時，酒石酸唑吡坦峰形較差，pH 值>6.0 時，酒石酸唑吡坦峰拖尾嚴(yán)重。經(jīng)優(yōu)化，選擇pH5.5，其唑吡坦峰的對稱性好，理論塔板數(shù)高，柱效更高。

3.2 輻射對藥物穩(wěn)定性影響

實驗選定了8、25、80 kGy 不同輻射劑量下對酒石酸唑吡坦片穩(wěn)定性影響進行考察，結(jié)果顯示隨著輻射劑量逐步增大，在其他條件相同的情況下，酒石酸唑吡坦片的主藥含量并沒有明顯變化，酒石酸唑吡坦片能保持相對穩(wěn)定。藥物含量指在制劑中藥物量是否符合要求，在藥物含量不變的情況下，藥物的有效性還與劑型的相關(guān)特性有關(guān)，如溶出度等。有研究表明，藥物受到一定劑量的輻射后，藥物的溶出度會發(fā)生改變[13]。后續(xù)將從不同輻射劑量的酒石酸唑吡坦片的溶出度、水分等做進一步研究。