宋江濤，諶丹丹，公旭晨，商祥明，李春龍，蔡永喜，岳建平，王帥玲，張卜芬，謝宗周，劉繼紅

人工疏果對(duì)‘愛媛28’橘橙果實(shí)糖酸含量及代謝基因表達(dá)的影響

宋江濤1，諶丹丹2，公旭晨1，商祥明1，李春龍1，蔡永喜3，岳建平3，王帥玲3，張卜芬3，謝宗周1，劉繼紅1

1華中農(nóng)業(yè)大學(xué)/園藝植物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，武漢 430070；2宜昌市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，湖北宜昌 443000；3湖北省宜都市果茶服務(wù)推廣中心，湖北宜都 443300

【背景】‘愛媛28’橘橙是雜交柑橘品種（′），因其優(yōu)良的果實(shí)品質(zhì)，受到人們的青睞。疏果是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中常用的一種提高果實(shí)品質(zhì)的技術(shù)，不僅能使果實(shí)體積明顯增大，而且還能夠增加果實(shí)可溶性固形物含量。但是，疏果增加果實(shí)可溶性固形物含量的具體機(jī)制仍然不清楚。【目的】本研究以枳（）為基砧、椪柑（）為中間砧的4年生‘愛媛28’橘橙作為試驗(yàn)材料，探索疏果影響果實(shí)糖酸含量變化的具體機(jī)制?！痉椒ā吭凇異坻?8’果實(shí)幼果期進(jìn)行疏果，每隔半個(gè)月左右測(cè)定疏果果實(shí)與未疏果果實(shí)的橫縱莖，采樣并測(cè)量單果重與糖酸含量，選擇糖酸含量差異明顯的時(shí)期測(cè)定糖酸代謝相關(guān)酶的活性及其對(duì)應(yīng)編碼基因的相對(duì)表達(dá)量。【結(jié)果】疏果顯著增加‘愛媛28’果實(shí)在生長(zhǎng)中后期的橫縱莖和單果重，顯著加快果實(shí)檸檬酸含量的降解速度，但并未影響果實(shí)成熟時(shí)最終的檸檬酸含量；顯著增加了果實(shí)的葡萄糖和蔗糖含量，但對(duì)果糖含量沒有顯著影響。疏果顯著增強(qiáng)蔗糖代謝過程中的蔗糖合成酶SSⅡ（合成方向）、蔗糖合成酶SSⅠ（分解方向）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）和檸檬酸分解代謝過程中的胞質(zhì)順烏頭酸酶（Cyt-ACO）、胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDH）和谷氨酰胺合成酶（GS）的活性。疏果顯著促進(jìn)蔗糖代謝過程中在早期的相對(duì)表達(dá)量和在所有時(shí)期的相對(duì)表達(dá)量，以及檸檬酸分解代謝過程中、、、和在早中期的相對(duì)表達(dá)量?！窘Y(jié)論】人工疏果主要通過增強(qiáng)蔗糖合成代謝過程中蔗糖磷酸合成酶的酶活來促進(jìn)果實(shí)可溶性糖的積累，提高檸檬酸分解代謝過程中相關(guān)酶的活性和基因表達(dá)水平，加快檸檬酸降解，從而在提升果實(shí)品質(zhì)中發(fā)揮重要作用。

疏果；‘愛媛28’；果實(shí)品質(zhì)；蔗糖代謝；檸檬酸代謝

0 引言

【研究意義】柑橘是世界第一大栽培果樹，同時(shí)也是僅次于小麥和玉米之后的世界第三大貿(mào)易農(nóng)產(chǎn)品，其種植面積和產(chǎn)量均位于第一位[1]。柑橘果實(shí)不僅擁有極其豐富的營(yíng)養(yǎng)元素，包括可溶性糖、有機(jī)酸、Vc、礦物質(zhì)等，還擁有化痰止咳、消腫止疼、健胃疏肝等多種保健療效的功能[2]。伴隨民眾生活條件的改善，對(duì)飲食品質(zhì)的要求也不斷提升，但是由于市場(chǎng)內(nèi)柑橘果實(shí)的品質(zhì)參差不齊，難以滿足人們對(duì)高品質(zhì)的需要，再加上化肥農(nóng)藥的過量使用，進(jìn)一步降低了果實(shí)品質(zhì)，因此亟需改善柑橘的果實(shí)品質(zhì)。提高果實(shí)品質(zhì)的技術(shù)較多，疏果是其中常用的一種?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】研究表明，疏果可以提高果實(shí)品質(zhì)，增加果樹產(chǎn)量[3-5]。在形成柑橘果實(shí)品質(zhì)的眾多因子中，糖酸含量是決定性因素[6]。柑橘果肉汁胞內(nèi)決定甜度的糖大多數(shù)是葡萄糖、果糖和蔗糖，前兩者為單糖，后者為雙糖，如果把蔗糖的糖度值定義為1，那么果糖為1.75，而葡萄糖則是0.75[7]。參與糖代謝的酶有蔗糖磷酸合成酶（SPS）、蔗糖合成酶（分解方向SSⅠ和合成方向SSⅡ）、酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性/堿性轉(zhuǎn)化酶（NI）。SS既能夠參與蔗糖的合成過程，也能夠參與蔗糖的分解過程，兩過程互為可逆反應(yīng)[8]。劉翔宇等[9]發(fā)現(xiàn)以枳殼作為砧木的砂糖橘果肉中表達(dá)量顯著增加，蔗糖合成酶（合成方向）活性顯著更高，蔗糖含量也更高。SPS主要存在于胞漿中，參與蔗糖的合成代謝，其催化效率和含量決定了植物將同化物轉(zhuǎn)化為蔗糖的能力和最終蔗糖的含量[10]。魏清江等[11]推測(cè)與金柑果實(shí)中蔗糖含量的上升有密切的聯(lián)系。參與酸代謝的酶有磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）、檸檬酸合成酶（CS）、順烏頭酸酶（ACO）、NADP-異檸檬酸脫氫酶（NADP-IDH）、ATP-檸檬酸裂解酶（ACL）、谷氨酰胺合成酶（GS）和谷氨酸脫羧酶（GAD）等。在線粒體內(nèi)磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）與二氧化碳和水分子結(jié)合后在PEPC的作用下轉(zhuǎn)化成草酰乙酸（OAA）與磷酸基團(tuán)，之后OAA和乙酰輔酶A（Ac-CoA）通過CS轉(zhuǎn)化為檸檬酸[12]。果實(shí)檸檬酸降解能夠憑借多種途徑，如乙酰輔酶A途徑或者稱ATP-檸檬酸裂解酶（ACL）途徑、谷氨酰胺合成酶（GS）途徑以及-氨基丁酸（GABA）途徑等。Guo等[13]發(fā)現(xiàn)‘紐荷爾’臍橙果實(shí)中檸檬酸的含量與Cyt-ACO活性的相關(guān)性為-0.9224，說明Cyt-ACO參與了柑橘果實(shí)檸檬酸的降解。Li等[14]發(fā)現(xiàn)CitNAC62和CitWRKY1能夠通過調(diào)節(jié)的表達(dá)來影響檸檬酸的積累。Feng等[15]發(fā)現(xiàn)楊梅果實(shí)發(fā)育過程中，檸檬酸含量逐漸降低，而和的表達(dá)量則逐漸上升，表明和可能在檸檬酸降解過程中發(fā)揮重要作用。Li等[16]發(fā)現(xiàn)在椪柑和溫州蜜柑果實(shí)發(fā)育過程中，隨著檸檬酸含量的逐漸降低，的表達(dá)水平逐漸增加，表明可能是檸檬酸降解的一個(gè)靶基因。【本研究切入點(diǎn)】柑橘是湖北省進(jìn)行商業(yè)化栽培的第一大水果，栽培面積與總產(chǎn)量都位于全省所有種植水果的第一位。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2017年湖北省柑橘種植總面積達(dá)到21.8萬hm2，總產(chǎn)量約為466萬t，總產(chǎn)值約130億元，栽培面積位于全國(guó)第6位，總產(chǎn)量名列全國(guó)第3位[17]。宜都市是湖北省的主要柑橘產(chǎn)區(qū)之一。湖北省宜都市位于亞熱帶季風(fēng)性氣候區(qū)，年均溫度高于15℃，10℃及以上的年活動(dòng)積溫超過5 300℃，霜期不到100 d，年平均日照時(shí)數(shù)超過1 600 h，非常適合寬皮柑橘的栽培種植[18]。‘愛媛28’橘橙（′）是日本學(xué)者于1990年以‘天草’為父本、‘南香’為母本，經(jīng)過雜交育種選育的一個(gè)橘橙類雜柑品種，后來被我國(guó)引入栽培。其果實(shí)成熟時(shí)果面呈現(xiàn)出美麗的深紅色，所以又被人們稱作‘紅美人’。因其優(yōu)良的品質(zhì)，受到人們的喜歡，在長(zhǎng)江三角洲水果市場(chǎng)上的銷售價(jià)格曾高達(dá)40—60元/kg，經(jīng)濟(jì)效益十分可觀[19]。近年來，‘愛媛28’在湖北省宜都市作為優(yōu)良新品種進(jìn)行栽培。但‘愛媛28’結(jié)果量大，在正常栽培條件下，每株樹結(jié)果多，導(dǎo)致果實(shí)較小，影響其商品性能?！異坻?8’易成花，且坐果率較高，為了避免果實(shí)品質(zhì)的降低，需要進(jìn)行合理的疏花疏果[20]。因此，研發(fā)應(yīng)用‘愛媛28’大果栽培技術(shù)，是生產(chǎn)上提升果品質(zhì)量的迫切需求?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過研究疏果對(duì)‘愛媛28’柑橘果實(shí)糖酸含量、糖酸代謝相關(guān)酶活性以及對(duì)應(yīng)編碼基因表達(dá)水平的影響，探索‘愛媛28’品質(zhì)提高的技術(shù)，并解析其可能機(jī)制，為生產(chǎn)上采用疏果調(diào)控雜柑果實(shí)品質(zhì)提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試材與取樣

試驗(yàn)于2020年在湖北省宜昌市宜都市漁洋河生態(tài)家庭農(nóng)場(chǎng)進(jìn)行。果樹露天栽培，果園管理水平中等。試驗(yàn)材料為4年生的‘愛媛28’高接植株，基砧為枳，‘鄂柑一號(hào)’椪柑為中間砧。選擇生長(zhǎng)狀況相似的健康樹6株，其中3株于7月20號(hào)（第二次生理落果結(jié)束后）進(jìn)行疏果，另外3株不疏果作為對(duì)照（每株為1次重復(fù)，共3個(gè)重復(fù)）。疏果時(shí)，主要疏除病果、小果、朝天果等，密集果三去二，留下生長(zhǎng)良好的果實(shí)，同一枝條上保持果距在15 cm左右，使最終葉果比達(dá)到45﹕1（對(duì)照約為30﹕1）。每株樹在東、西、南、北、中不同方向分別選擇3個(gè)果實(shí)，總共15個(gè)果實(shí)掛牌標(biāo)記。分別于7月20日、8月3日、8月17日、9月1日、9月14日、9月31日、10月16日、11月3日（對(duì)應(yīng)盛花期后87、101、115、130、143、159、175和193 d）測(cè)量掛牌果實(shí)的縱橫徑。同時(shí)，在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每株樹采6個(gè)果實(shí)帶回實(shí)驗(yàn)室拍照，并測(cè)量果實(shí)單果重（除去盛花期后87 d）。每果用刀切成兩半后，呈三角取三瓣的汁胞于液氮中研磨成細(xì)粉于-80℃留樣保存，用于測(cè)量可溶性糖和檸檬酸含量及分析糖酸代謝相關(guān)酶活性和基因表達(dá)量。

1.2 果實(shí)品質(zhì)的測(cè)定

使用數(shù)顯游標(biāo)卡尺測(cè)量果實(shí)大小；使用百分之一電子天平稱量果實(shí)重量。

1.3 果實(shí)糖酸含量測(cè)定

葡萄糖：稱取約0.1 g組織，加入1 mL蒸餾水，研磨成勻漿，95℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8 000×，25℃離心10 min，取上清液備用。

果糖、蔗糖：稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液，研磨成勻漿，80℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），振蕩3—5次，冷卻后4 000×，25℃離心10 min，取上清；加入約2 mg活性炭，80℃脫色30 min（蓋緊，以防止水分散失）；再加入1 mL提取液，4 000×，25℃離心10 min，取上清液測(cè)定。

檸檬酸：稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液，冰浴勻漿。11 000×，4℃離心10 min，取上清液置冰上待測(cè)。

分光光度法測(cè)定，試劑盒來自蘇州科銘生物技術(shù)有限公司，詳細(xì)操作見說明書，每個(gè)樣本3次重復(fù)。

1.4 果實(shí)酶活性測(cè)定

分光光度法測(cè)定，試劑盒來自蘇州科銘生物技術(shù)有限公司，選擇盛花期后101、130、159和193 d四個(gè)時(shí)期的樣本測(cè)定可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（S-AI）、蔗糖合成酶（合成方向SSⅡ和分解方向SSⅠ）、蔗糖磷酸合成酶（SPS）、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）、檸檬酸合成酶（CS）、胞質(zhì)順烏頭酸酶（Cyt-ACO）、胞質(zhì)異檸檬酸脫氫酶（ICDH）、ATP-檸檬酸裂解酶（ACL）、谷氨酸脫羧酶（GAD）和谷氨酰胺合成酶（GS）的活性，操作見說明書，每個(gè)樣本3次重復(fù)。

1.5 總RNA提取及熒光定量PCR

用PLANT pure植物總RNA快速提取試劑盒（TaKaRa公司）提取植物總RNA。利用諾唯贊反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，然后使用Nanodrop 1000紫外分光光度計(jì)（Thermo Scientific）測(cè)定濃度，稀釋到200 ng·μL-1后用于基因表達(dá)分析。利用諾唯贊qPCR試劑盒和Applied Biosystems Quant Studio 7 Flex Real-Time PCR System（ABI，USA）進(jìn)行熒光定量PCR。反應(yīng)體系共10 μL，反應(yīng)程序?yàn)?5℃預(yù)變性5 min，95℃變性10 s，60℃退火15 s，60℃延伸15 s，40個(gè)循環(huán)[21]。蔗糖代謝相關(guān)基因的qPCR引物見表1。檸檬酸代謝相關(guān)基因的qPCR引物參考Guo等[22]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用Excel 2019軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行整理分析，并繪制圖表，并用SPSS 16.0進(jìn)行差異顯著性及相關(guān)性分析。

表1 實(shí)時(shí)定量PCR引物

2 結(jié)果

2.1 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)品質(zhì)的影響

果實(shí)的大小會(huì)隨著細(xì)胞的分裂分化而逐漸增大。如圖1所示，隨著果實(shí)的發(fā)育，‘愛媛28’果實(shí)的縱橫徑和單果重都逐漸上升；且花后159 d，疏果的果實(shí)縱橫徑和單果重顯著大于對(duì)照，與對(duì)照相比，疏果組的橫徑、縱徑和單果重分別增加了5.97%、13.45%和16.61%。果實(shí)在159 d轉(zhuǎn)黃，在193 d變?yōu)榧t色。

2.2 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)糖酸含量的影響

果實(shí)可溶性糖含量和組成與甜度密切相關(guān)，是柑橘果實(shí)品質(zhì)的決定因素之一，會(huì)隨著果實(shí)的發(fā)育成熟而逐漸上升。根據(jù)圖2，隨著果實(shí)的發(fā)育，可溶性糖含量總體呈上升的趨勢(shì)。在‘愛媛28’果實(shí)成熟期，蔗糖含量最高。其中，疏果果實(shí)的蔗糖含量在101、130、175和193 d顯著高于對(duì)照，而159 d顯著低于對(duì)照；疏果果實(shí)的葡萄糖含量在101、130、159和193 d顯著高于對(duì)照。兩處理間果糖含量無顯著差異。除了可溶性糖，果實(shí)有機(jī)酸也是決定果實(shí)品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一。檸檬酸是柑橘果實(shí)含量最多的有機(jī)酸。柑橘果實(shí)有機(jī)酸含量的變化主要與檸檬酸含量的變化有關(guān)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，果實(shí)檸檬酸含量隨果實(shí)發(fā)育而逐漸下降，且疏果果實(shí)的檸檬酸含量顯著低于對(duì)照，但在成熟期沒有顯著差異（圖2-D）。因糖、酸含量主要在花后101、130、159和193 d存在顯著差異，所以選擇這4個(gè)時(shí)期的果實(shí)進(jìn)行酶活性測(cè)定和基因表達(dá)分析。

圖2 疏果對(duì)果實(shí)蔗糖（A）、葡萄糖（B）、果糖（C）和檸檬酸（D）含量的影響

2.3 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)蔗糖代謝相關(guān)酶的影響

果實(shí)可溶性糖含量與蔗糖代謝過程密切相關(guān)。參與蔗糖代謝的酶主要有轉(zhuǎn)化酶、蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶。轉(zhuǎn)化酶S-AI參與了蔗糖的分解，活性在130 d達(dá)到最高，隨后迅速下降，在成熟期略有上升，且所有時(shí)期均無顯著差異。蔗糖合成酶有合成（SSⅡ）和分解（SSⅠ）兩種，兩者互為可逆反應(yīng)。結(jié)果表明，SSⅠ和SSⅡ活性都隨著果實(shí)的發(fā)育逐漸上升，但成熟期SSⅠ活性下降，且疏果顯著增強(qiáng)二者的活性。蔗糖磷酸合成酶（SPS）是蔗糖合成的關(guān)鍵酶，活性也隨著果實(shí)發(fā)育逐漸升高，且疏果顯著增強(qiáng)SPS活性（圖3）。

圖3 疏果對(duì)果實(shí)S-AI（A）、SS I（B）、SS II（C）和SPS（D）活性的影響

2.4 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)檸檬酸代謝相關(guān)酶的影響

檸檬酸代謝過程分為合成和分解兩個(gè)部分。合成過程發(fā)生在線粒體中，分解過程于細(xì)胞質(zhì)中完成。合成過程中，隨著果實(shí)的發(fā)育，PEPC的活性逐漸降低，且兩處理間無顯著差異（圖4-A），CS活性逐漸降低，且除了在130 d疏果組的活性顯著低于對(duì)照外，其他時(shí)期兩處理間無顯著差異（圖4-B）。分解過程中，ICDH的活性隨果實(shí)的發(fā)育逐漸上升，但在成熟期有所下降，且疏果顯著增強(qiáng)ICDH活性（圖4-C）。Cyt-ACO的活性也逐漸上升，并且疏果的果實(shí)在果實(shí)膨大期活性顯著高于對(duì)照（圖4-D）。GAD和ACL的活性均隨果實(shí)的發(fā)育而逐漸降低，并且兩處理間無顯著性差異（圖4-E和4-G）。GS的活性于130 d降至最低，而后逐漸上升，且在130 d后，疏果的果實(shí)活性顯著高于對(duì)照（圖4-F）。

2.5 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)蔗糖代謝相關(guān)基因表達(dá)的影響

在4個(gè)蔗糖合成酶基因中，疏果顯著促進(jìn)在130 d的表達(dá)量，增強(qiáng)在101 d和130 d的表達(dá)量，誘導(dǎo)在130 d的表達(dá)量，但降低在101 d與159 d的表達(dá)量，對(duì)的表達(dá)量無顯著影響。蔗糖磷酸合成酶基因中，的表達(dá)量均隨果實(shí)的發(fā)育而逐漸上升，且疏果顯著促進(jìn)的表達(dá)量。轉(zhuǎn)化酶基因中，疏果組液泡轉(zhuǎn)化酶基因的表達(dá)量在159 d最低，且與對(duì)照無顯著差異，但顯著誘導(dǎo)其他時(shí)期的表達(dá)。胞漿轉(zhuǎn)化酶基因的表達(dá)量無顯著變化（圖5）。

圖4 疏果對(duì)果實(shí)PEPC（A）、CS（B）、ICDH（C）、Cyt-ACO（D）、ACL（E）、GS（F）和GAD（G）活性的影響

2.6 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)檸檬酸合成相關(guān)基因表達(dá)的影響

在檸檬酸合成相關(guān)基因中，疏果并未影響的表達(dá)量，但顯著增加和在101 d和130 d的表達(dá)量。的表達(dá)量在101 d時(shí)顯著低于對(duì)照，在130 d顯著高于對(duì)照；的表達(dá)量在101 d和193 d顯著低于對(duì)照，而在130 d時(shí)顯著高于對(duì)照（圖6）。

2.7 疏果對(duì)‘愛媛28’果實(shí)檸檬酸降解相關(guān)基因表達(dá)的影響

檸檬酸分解基因中，疏果不影響的表達(dá)水平，但顯著增加在130 d和在101 d的表達(dá)量，顯著降低在101 d和在193 d的表達(dá)量。的表達(dá)量隨果實(shí)發(fā)育逐漸升高，且在101 d疏果組的表達(dá)量顯著高于對(duì)照；疏果顯著增加在130 d的表達(dá)量，但顯著降低其在101 d的表達(dá)量；疏果不影響的表達(dá)量。ATP-檸檬酸裂解酶基因中，疏果顯著增加在130 d和159 d的表達(dá)量；疏果組的表達(dá)量在101 d顯著低于對(duì)照，而在130 d顯著高于對(duì)照；的表達(dá)量漸漸提高，且130 d和159 d疏果組的表達(dá)量顯著高于對(duì)照。谷氨酰胺合成酶基因中，疏果顯著增加在101 d和130 d的表達(dá)量。谷氨酸脫羧酶基因中，疏果顯著增加在101 d和130 d的表達(dá)量；的表達(dá)量隨果實(shí)發(fā)育逐漸升高，且所有時(shí)期疏果組的表達(dá)量顯著低于對(duì)照（圖7）。

圖5 疏果對(duì)果實(shí)蔗糖代謝相關(guān)基因SSs、SPSs和VINV表達(dá)的影響

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圖6 疏果對(duì)果實(shí)檸檬酸合成相關(guān)基因和表達(dá)的影響

Fig. 6 Effects of fruit thinning on the expression ofandrelated to citric acid synthesis

2.8 相關(guān)性分析

糖代謝中，對(duì)照組蔗糖含量與S-AI、SPS、SS I和SS II的活性都呈正相關(guān)，但均未表現(xiàn)出顯著的相關(guān)性；疏果后蔗糖含量與SPS的活性表現(xiàn)出極顯著的正相關(guān)性，與SS II的活性表現(xiàn)出顯著正相關(guān)，與SS I的活性并未表現(xiàn)出相關(guān)性。酸代謝中，對(duì)照組檸檬酸含量與CS、ACL、GAD和PEPC的活性都呈正相關(guān)，與GS無相關(guān)性，與ACO和NADP-IDH的活性表現(xiàn)出負(fù)相關(guān)，且其中只有ACL的活性與檸檬酸含量存在極顯著相關(guān)性；疏果顯著增加了檸檬酸含量與ACO活性的相關(guān)性，但顯著降低了與ACL活性的相關(guān)性，且與GS的活性呈負(fù)相關(guān)（表2）。

糖代謝基因中，蔗糖含量與對(duì)照組、和呈正相關(guān)，且均無顯著相關(guān)性，與無相關(guān)性；疏果增加了蔗糖含量與、和的相關(guān)性，且其中與達(dá)到顯著正相關(guān)。檸檬酸合成基因中，檸檬酸含量與對(duì)照組呈正相關(guān)，而與和呈負(fù)相關(guān)，但均未表現(xiàn)出顯著的相關(guān)性；檸檬酸分解基因中，檸檬酸水平與呈正相關(guān)，與、、、和均呈負(fù)相關(guān)，但其中只有表現(xiàn)出極顯著負(fù)相關(guān)。疏果后，檸檬酸含量與無相關(guān)性，而與的相關(guān)性增加，且與呈現(xiàn)出顯著的負(fù)相關(guān)，與表現(xiàn)出正相關(guān)，且與的相關(guān)性顯著降低，但和表現(xiàn)出極顯著負(fù)相關(guān)（表3）。

圖7 疏果對(duì)果實(shí)檸檬酸降解相關(guān)基因ACOs、NADP-IDHs、ACLs、GSs和GADs表達(dá)的影響

表2 疏果對(duì)蔗糖和檸檬酸含量與其對(duì)應(yīng)代謝相關(guān)酶相關(guān)系數(shù)的影響

*和**分別表示顯著相關(guān)和極顯著相關(guān)。下同

*: Correlation is significant at 0.05 level; **: Correlation is significant at 0.01 level. The same as below

3 討論

3.1 疏果顯著提高果實(shí)大小和可溶性糖含量

疏果通過降低營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)來促進(jìn)果實(shí)的膨大。與吳黎明等[23]結(jié)果一致，本研究發(fā)現(xiàn)疏果顯著增加柑橘果實(shí)縱橫徑和單果重。糖酸含量是影響柑橘果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)和風(fēng)味的重要因素。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著果實(shí)的發(fā)育，可溶性糖含量總體呈上升趨勢(shì)，并且成熟期時(shí)蔗糖含量最高，但低于果糖和葡萄糖含量之和，這與林媚和吳韶輝[24]的研究結(jié)果一致，說明‘愛媛28’主要積累還原糖。此外，疏果顯著增加蔗糖和葡萄糖含量，這與秦偉等[25]發(fā)現(xiàn)重度疏果的‘紅富士’蘋果糖含量在成熟期均高于對(duì)照的結(jié)果相一致，說明疏果確實(shí)能促進(jìn)柑橘果實(shí)可溶性糖含量的積累。此外，隨著果實(shí)的發(fā)育，檸檬酸含量逐漸減少，這與Li等[26]發(fā)現(xiàn)柑橘果實(shí)檸檬酸含量先上升后減少的變化不完全一致，可能原因是第一次采樣前檸檬酸含量就已經(jīng)到達(dá)最高值或者最高值處于第一、二次采樣之間。并且，疏果雖然顯著加快了檸檬酸的減少速度，但成熟期的含量與對(duì)照相比無顯著差異，說明疏果只影響檸檬酸含量的減少速度，但不影響其最終的含量，這與吳黎明等[23]發(fā)現(xiàn)疏果不影響桃葉橙果實(shí)酸含量的結(jié)果一致。

表3 疏果對(duì)蔗糖和檸檬酸含量與其對(duì)應(yīng)代謝相關(guān)基因相關(guān)系數(shù)的影響

3.2 疏果調(diào)控果實(shí)蔗糖代謝

果實(shí)糖代謝需要一些酶的參與，如INV、SS和SPS等。INV可以將蔗糖轉(zhuǎn)化為果糖與葡萄糖。本研究發(fā)現(xiàn)，S-AI的活性在130 d達(dá)到最高，表明其主要在果實(shí)膨大期發(fā)揮作用。但疏果并未影響其活性，說明其不是造成疏果果實(shí)葡萄糖含量顯著增加的原因。對(duì)的表達(dá)水平進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其變化趨勢(shì)與其活性相似，且疏果顯著增加其表達(dá)量，這與龔榮高和張光倫[27]發(fā)現(xiàn)酸性轉(zhuǎn)化酶不是蔗糖積累關(guān)鍵原因的結(jié)論一致。除了轉(zhuǎn)化酶外，SS也擁有分解蔗糖的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著果實(shí)的發(fā)育，SS I的活性逐漸升高，且疏果顯著增強(qiáng)其活性，這可能是疏果的果實(shí)葡萄糖含量顯著高于對(duì)照的原因。SS II的活性也隨著果實(shí)的發(fā)育而逐漸上升，并且疏果顯著增加其活性以及與蔗糖含量的相關(guān)性，這與Kubo等[28]發(fā)現(xiàn)負(fù)載量低溫州蜜柑果實(shí)SSⅡ的活性明顯高于對(duì)照的結(jié)果相一致。分析表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)疏果顯著增強(qiáng)果實(shí)膨大期的表達(dá)量，且其與蔗糖的相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.943，說明可能參與了蔗糖的積累。SPS與蔗糖的生成有關(guān)，其活性越強(qiáng)，蔗糖含量往往也越高。本研究中，隨果實(shí)的發(fā)育，SPS的活性漸漸上升，蔗糖含量也逐漸升高，并且疏果顯著增強(qiáng)其活性，這與疏果的果實(shí)蔗糖含量顯著高于對(duì)照相一致。疏果顯著提高的表達(dá)量，說明疏果通過促進(jìn)的表達(dá)來增強(qiáng)其活性，從而利于蔗糖的積累。

3.3 疏果調(diào)控果實(shí)檸檬酸代謝

果實(shí)檸檬酸是由PEPC和CS在線粒體內(nèi)催化合成而來。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著果實(shí)的發(fā)育，PEPC的活性逐漸降低，這與檸檬酸的變化趨勢(shì)相一致，說明PEPC的活性與檸檬酸的含量相關(guān)，這與張長(zhǎng)明[29]的結(jié)果一致。但是疏果并未影響其活性。分析其編碼基因，發(fā)現(xiàn)疏果顯著增加了在果實(shí)膨大期的表達(dá)量，這與疏果果實(shí)檸檬酸含量顯著低于對(duì)照的結(jié)果不相符，說明PEPC不是果實(shí)檸檬酸積累的關(guān)鍵酶，這與文濤等[30]的結(jié)果一致。疏果對(duì)CS活性影響不大，在130 d時(shí)對(duì)照酶活顯著高于對(duì)照，但和表達(dá)量則表現(xiàn)出相反趨勢(shì)，可能和并不是決定CS活性的關(guān)鍵基因，并且和與檸檬酸含量表現(xiàn)出負(fù)相關(guān)性（表3），這與其參與檸檬酸的合成相矛盾，說明CS不是果實(shí)檸檬酸積累的關(guān)鍵酶。

隨著檸檬酸含量的下降，Cyt-ACO的活性逐漸升高，說明Cyt-ACO與檸檬酸的降解相關(guān)，這與Guo等[13]的發(fā)現(xiàn)一致。且疏果顯著提高了其活性，這與疏果的果實(shí)TA和檸檬酸含量顯著低于對(duì)照相一致。對(duì)其基因表達(dá)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)疏果顯著增加了在果實(shí)膨大期的表達(dá)量，其中的表達(dá)趨勢(shì)與其活性變化幾乎一致，且與檸檬酸含量的負(fù)相關(guān)性最高，說明主要是在檸檬酸降解中起著重要作用。此外，ICDH的活性與檸檬酸的相關(guān)性達(dá)到-0.860，說明其參與了檸檬酸的降解，且疏果顯著增加了其活性。疏果也增強(qiáng)了在果實(shí)膨大期的表達(dá)，說明疏果通過促進(jìn)的表達(dá)來提高其活性，從而加快檸檬酸的降解。進(jìn)一步分析檸檬酸降解途徑發(fā)現(xiàn)，疏果對(duì)乙酰輔酶A途徑的ACL活性沒有顯著影響，但顯著增加的表達(dá)；疏果也未影響-氨基丁酸途徑的GAD活性，但顯著促進(jìn)的表達(dá)，降低的表達(dá)；疏果顯著增加了谷氨酰胺途徑中的GS的活性，且顯著促進(jìn)的表達(dá)，說明疏果通過影響谷氨酰胺途徑來影響檸檬酸的降解，這與Feng等[15]發(fā)現(xiàn)GS可能在檸檬酸降解過程中發(fā)揮重要作用的結(jié)果一致。

4 結(jié)論

研究結(jié)果證明疏果能夠有效增加‘愛媛28’果實(shí)的大小與質(zhì)量，通過增強(qiáng)蔗糖代謝過程中的SS和SPS的活性及檸檬酸代謝過程中的Cyt-ACO、ICDH和GS的活性以及對(duì)應(yīng)編碼基因的表達(dá)，從而增加果實(shí)可溶性糖含量和加快檸檬酸的降解速度。

[1] 陳仕俏, 趙文紅, 白衛(wèi)東. 我國(guó)柑橘的發(fā)展現(xiàn)狀與展望. 農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊), 2008(3): 21-24, 32.

CHEN S Q, ZHAO W H, BAI W D. The current situation and prospect of the development ofin China. Academic Periodical of Farm Products Processing, 2008(3): 21-24, 32. (in Chinese)

[2] 吳曉紅, 陳寶宏, 李小華. 柑橘類水果中總酸與總糖的測(cè)定. 食品研究與開發(fā), 2012, 33(9): 144-146.

WU X H, CHEN B H, LI X H. Determination of total acids and total sugar infruits. Food Research and Development, 2012, 33(9): 144-146. (in Chinese)

[3] 盧美英, 盧紅, 盧日林, 潘朝邦, 徐炯志, 黃桂香, 歐世金, 薛進(jìn)軍, 陳香玲, 黃永敬, 何全光. 龍眼疏果方法研究. 廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué), 2003, 22(1): 21-24, 31.

LU M Y, LU H, LU R L, PAN C B, XU J Z, HUANG G X, OU S J, XUE J J, CHEN X L, HUANG Y J, HE Q G. A study of the method of longan fruit panicle thinning. Journal of Guangxi Agricultural and Biological Science, 2003, 22(1): 21-24, 31. (in Chinese)

[4] CANO-LAMADRID M, GALINDO A, COLLADO-GONZáLEZ J, RODRíGUEZ P, CRUZ Z N, LEGUA P, BURLó F, MORALES D, CARBONELL-BARRACHINA á A, HERNáNDEZ F. Influence of deficit irrigation and crop load on the yield and fruit quality in wonderful and mollar de Elche pomegranates. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2018, 98(8): 3098-3108. doi: 10.1002/jsfa. 8810.

[5] 李創(chuàng), 張偉, 陳代全, 馬松明, 馬輝, 秦燕, 劉軍. 不同疏果處理對(duì)中國(guó)櫻桃果實(shí)品質(zhì)的影響. 南方農(nóng)業(yè), 2020, 14(25): 28-30.

LI C, ZHANG W, CHEN D Q, MA S M, MA H, QIN Y, LIU J. Effects of different fruit thinning treatments on fruit quality of Chinese cherry. South China Agriculture, 2020, 14(25): 28-30. (in Chinese)

[6] 顧建芹. 暗柳橙及其突變體紅暗柳橙果實(shí)發(fā)育過程中糖酸組分的變化[D]. 武漢: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2007.

GU J Q. Changing of sugar and acid contents of Anliu sweet orange and its mutant red Anliu sweet orange during fruit development [D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 2007. (in Chinese)

[7] 白蓓蓓, 王佳, 葉秀旭, 劉咲頔, 陳華蕊, 陳業(yè)淵. 杧果成熟過程中果肉可溶性糖組分分析. 分子植物育種, 2020, 18(13): 4457-4463.

BAI B B, WANG J, YE X X, LIU X D, CHEN H R, CHEN Y Y. Analysis of soluble sugar components in mango flesh during ripening. Molecular Plant Breeding, 2020, 18(13): 4457-4463. (in Chinese)

[8] 房經(jīng)貴, 朱旭東, 賈海鋒，王晨．植物蔗糖合酶生理功能研究進(jìn)展．南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 40(5): 759-768．

Fang J G, Zhu X D, Jia H F, Wang C. Research progress on physiological function of plant sucrose synthase. Journal of Nanjing Agricultural University, 2017, 40(5): 759-768. (in Chinese)

[9] 劉翔宇, 李娟, 黃敏, 梁春輝, 陳杰忠. 柑橘砧木對(duì)砂糖橘果實(shí)糖積累的影響. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 48(11): 2217-2228.

LIU X Y, LI J, HUANG M, LIANG C H, CHEN J Z. Research on influences of rootstock on sugar accumulation in ‘Shatangju’ tangerine fruits. Scientia Agricultura Sinica, 2015, 48(11): 2217-2228. (in Chinese)

[10] Li Y Y, Yao Y, Yang G S, Tang J, Ayala G J, Li X M, Zhang W L, Han Q Y, Yang T, Wang H, Mayo K H, Su J Y. Co-crystal structure ofsucrose phosphate synthase with UDP and sucrose-6-phosphate provides insight into its mechanism of action involving an oxocarbenium ion and the glycosidic bond. Front Microbiology, 2020, 11: 1050.

[11] 魏清江, 馬張正, 勒思, 雷常玉, 馬巧利, 辜青青. 柑橘磷酸蔗糖合酶基因CsSPS的鑒定和表達(dá). 園藝學(xué)報(bào), 2020, 47(2): 334-344.

WEI Q J, MA Z Z, LE S, LEI C Y, MA Q L, GU Q Q. Identification and expression analysis of sucrose-phosphate synthase(SPS) genes in. Acta Horticulturae Sinica, 2020, 47(2): 334-344. (in Chinese)

[12] 歐金梅, 楊許, 單春苗, 張聲祥, 施圓圓, 吳家文, 黃璐琦, 王瑞. 榔梅果實(shí)轉(zhuǎn)錄組分析及其檸檬酸生物合成途徑關(guān)鍵酶基因結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測(cè). 中國(guó)中藥雜志, 2020, 45(19): 4606-4616. doi: 10.19540/ j.cnki.cjcmm.20200627.102.

OU J M, YANG X, SHAN C M, ZHANG S X, SHI Y Y, WU J W, HUANG L Q, WANG R. Transcriptome analysis of ‘Langmei’ fruits and key enzyme genes structure and function prediction involved in citric acid biosynthesis. China Journal of Chinese Materia Medica, 2020, 45(19): 4606-4616. doi: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20200627.102. (in Chinese)

[13] Guo L X, Liu Y Z, Luo L J, Hussain S B, Bai Y X, Alam S M. Comparative metabolites and citric acid-degrading enzymes activities in citrus fruits reveal the role of balance between ACL and Cyt-ACO in metabolite conversions. Plants, 2020, 9(3): 350.

[14] LI S J, YIN X R, WANG W L, LIU X F, ZHANG B, CHEN K S.CitNAC62 cooperates withCitWRKYto participate in citric acid degradation via up-regulation of. Journal of Experimental Botany, 2017, 68(13): 3419-3426. doi: 10.1093/jxb/ erx187.

[15] FENG C, CHEN M, XU C J, BAI L, YIN X R, LI X, ALLAN A C, FERGUSON I B, CHEN K S. Transcriptomic analysis of Chinese bayberry () fruit development and ripening using RNA-Seq. BMC Genomics, 2012, 13: 19. doi: 10.1186/1471-2164- 13-19.

[16] LI S J, WANG W L, MA Y C, LIU S C, GRIERSON D, YIN X R, CHEN K S. CitrusCitERFcontributes to citric acid degradationupregulation of, encoding ATP-citrate lyase subunit Α. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2020, 68(37): 10081- 10087. doi: 10.1021/acs.jafc.0c03669.

[17] 王志靜, 吳黎明, 何利剛, 宋放, 蔣迎春. 湖北柑橘主產(chǎn)區(qū)主要病蟲害種類及發(fā)生期調(diào)查. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué), 2019, 58(S2): 295-297.

Wang Z j, Wu l m, He L g, Song F, Jiang Y c. Investigation on the species and occurrence period of major diseases and pests in the main citrus producing areas in Hubei. Hubei Agricultural Science, 2019, 58 (S2): 295-297. (in Chinese)

[18] 易青, 蔡永喜, 王血紅. 湖北省宜都市柑橘產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展對(duì)策. 中國(guó)果樹, 2009(6): 67-69.

YI Q, CAI Y X, WANG X H. Current situation and development countermeasures of citrus industry in Yidu city, Hubei province. China Fruits, 2009(6): 67-69. (in Chinese)

[19] 姜翔鶴, 楊波, 王登亮, 吳雪珍, 盧志成, 劉春榮. 預(yù)防雜柑品種紅美人早衰栽培技術(shù). 果樹實(shí)用技術(shù)與信息, 2018(1): 29-32.

JIANG X H, YANG B, WANG D L, WU X Z, LU Z C, LIU C R. Cultivation techniques for preventing premature senescence of hybrid citrus varieties Hongmeiren. Practical Technology and Information of Fruit Trees, 2018(1): 29-32. (in Chinese)

[20] 馬監(jiān)生, 周志虎, 向進(jìn), 宋文化, 向舜德. ‘愛媛28’在秭歸縣的引種表現(xiàn)及栽培技術(shù)要點(diǎn). 中國(guó)園藝文摘, 2017(4): 203-204.

MA J S, ZHOU Z H, XIANG J, SONG W H, XIANG S D. Introduction performance and cultivation techniques of ‘Ehime 28’ in Zigui county. Chinese Horticulture Abstracts, 2017(4): 203-204. (in Chinese)

[21] 鄧曉東, 焦國(guó)柱, 劉聰, 韋同路, 郭大勇, 謝宗周, 劉繼紅. 亞精胺在椪柑果實(shí)留樹保鮮中的作用及其對(duì)離層形成的影響. 園藝學(xué)報(bào), 2018, 45(4): 669-677.

DENG X D, JIAO G Z, LIU C, WEI T L, GUO D Y, XIE Z Z, LIU J H. Role of exogenous spermidine in keeping on-tree ponkan fruits fresh and its effect on formation of abscission zone. Acta Horticulturae Sinica, 2018, 45(4): 669-677. (in Chinese)

[22] GUO L X, SHI C Y, LIU X, NING D Y, JING L F, YANG H, LIU Y Z. Citrate accumulation-related gene expression and/or enzyme activity analysis combined with metabolomics provide a novel insight for an orange mutant. Scientific Reports, 2016, 6: 29343. doi: 10.1038/ srep29343.

[23] 吳黎明, 蔣迎春, 何利剛, 王志靜, 仝鑄, 吳述勇, 廖勝才, 王菊平. 疏果對(duì)桃葉橙果實(shí)品質(zhì)的影響及效益分析. 中國(guó)南方果樹, 2015, 44(6): 34-34, 37.

WU L M, JIANG Y C, HE L G, WANG Z J, TONG Z, WU S Y, LIAO S C, WANG J P. Effect of fruit thinning on fruit quality and benefit analysis of ‘Taoye Cheng’. South China Fruits, 2015, 44(6): 34-34, 37. (in Chinese)

[24] 林媚, 吳韶輝. 浙江省12個(gè)柑橘品種果實(shí)品質(zhì)分析與評(píng)價(jià). 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2019, 60(6): 963-966.

LIN M, WU S H. Analysis and evaluation on fruit quality of 12 citrus varieties. Journal of Zhejiang Agricultural Sciences, 20199, 60(6): 963-966. (in Chinese)

[25] 秦偉, 劉立強(qiáng), 司宏章, 楊新峰, 李建貴. 疏果摘葉對(duì)紅富士蘋果果實(shí)發(fā)育及其品質(zhì)的影響. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 52(8): 1419-1431.

QIN W, LIU L Q, SI H Z, YANG X F, LI J G. Effects of fruit thinning and leaves priming on the fruit growth and qualities of red Fuji apple. Xinjiang Agricultural Sciences, 2015, 52(8): 1419-1431. (in Chinese)

[26] Li S J, Liu X J, Xie X L, Sun C D, Grierson D, Yin X R, Chen K S., a PH-like gene, contributes to citric acid accumulation in citrus fruit. Scientia Horticulturae, 2015, 197: 212-217.

[27] 龔榮高, 張光倫. 柑橘果實(shí)糖代謝的研究進(jìn)展. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2003, 21(4): 343-346.

GONG R G, ZHANG G L. Advances in research on sugar metabolism infruit. Journal of Sichuan Agricultural University, 2003, 21(4): 343-346. (in Chinese)

[28] Kubo T, Hohjo I, Hiratsuka S. Sucrose accumulation and its related enzyme activities in the juice sacs of satsuma mandarin fruit from trees with different crop loads. Scientia Horticulturae, 2001, 91(3/4): 215-225.

[29] 張長(zhǎng)明. 不同施肥處理對(duì)秭歸臍橙土壤和葉片養(yǎng)分及檸檬酸代謝的影響[D]. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2013.

ZHANG C M. The effects of different fertilization treatments on the soil and leaf nutrients and the metabolism of citric acid of navel orange in Zigui[D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 2013. (in Chinese)

[30] 文濤, 熊慶娥, 曾偉光, 劉遠(yuǎn)鵬. 臍橙果實(shí)有機(jī)酸代謝調(diào)控措施的初步研究. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2001, 19(2): 144-147.

WEN T, XIONG Q E, ZENG W G, LIU Y P. Study on the regulation of organic acid synthesize during fruit development of navel orange (sinesis osbeck). Journal of Sichuan Agricultural University, 2001, 19(2): 144-147. (in Chinese)

Effects of Artificial Fruit Thinning on Sugar and Acid Content and Expression of Metabolism-Related Genes in Fruit of Beni-Madonna Tangor

SONG JiangTao1, SHEN DanDan2, GONG XuChen1, SHANG XiangMing1, LI ChunLong1, CAI YongXi3, YUE JianPing3, WANG ShuaiLing3, ZHANG PuFen3, XIE ZongZhou1, LIU JiHong1

1Key Laboratory of Horticulture and Botany, Ministry of Education, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070;2Yichang Academy of Agricultural Sciences, Yichang 443000, Hubei;3Service and Extension Centre of Fruit Trees and Tea in Yidu City, Yidu 443300, Hubei

【Background】Beni-Madonna tangor (′), a hybrid cultivar of citrus, is favored by consumers because of its excellent quality. Fruit thinning is a technique commonly used to improve fruit quality in the process of agricultural production. It can not only significantly increase the fruit volume, but also increase the content of soluble solids in the fruit. However, the specific mechanism of fruit thinning to increase the content of soluble solids in the fruit of Beni-Madonna is still unclear. 【Objective】 In this study, four-year-old Beni-Madonna tangor plants, with trifoliate orange () as a base rootstock and Ponkan as an intermediate stock, were used as experimental materials to explore the specific mechanism of fruit thinning on affecting the change of sugar and acid content in fruit. 【Method】Fruit thinning was carried out at the young fruit stage of Beni-Madonna fruit. The horizontal and vertical stems of fruit thinning and non-fruit thinning were measured every half a month or so. The samples were taken back and the single fruit weight and sugar and acid content were measured. The activities of sugar and acid metabolism related enzymes and the relative expression of their corresponding coding genes were measured when the sugar and acid content were significantly different. 【Result】The fruit thinning significantly increased the horizontal and vertical stems and single fruit weight of Beni-Madonna fruit in the middle and late stages of fruit growth, significantly accelerated the degradation rate of citrate content, but did not affect the final citrate content at fruit maturity, significantly increased the fruit glucose and sucrose content, but had no significant effect on fructose content. The fruit thinning significantly increased the activities of sucrose synthase SSⅡ (synthesis direction), sucrose synthase SSⅠ (decomposition direction), sucrose phosphate synthase (SPS) in sucrose metabolism and cytosolic aconitase (Cyt-ACO), cytoplasmic isocitrate dehydrogenase (ICDH) and glutamine synthetase (GS) implicated in citric acid catabolism. In addition, fruit thinning significantly promoted the early relative expression ofand the relative expression ofs at all stages in the process of sucrose metabolism, and the relative expression of,,,ands in the process of citric acid metabolism in the early and middle stages. 【Conclusion】The artificial fruit thinning mainly promoted the accumulation of soluble sugar in fruit by enhancing the enzyme activity of sucrose phosphate synthase in the process of sucrose anabolism, improved the activity and gene expression level of related enzymes in the process of citric acid catabolism, and accelerated citric acid degradation, thus playing an important role in improving fruit quality.

fruit thinning; Beni-Madonna; fruit quality; sucrose metabolism; citric acid metabolism

10.3864/j.issn.0578-1752.2022.23.010

2022-02-28；

2022-06-15

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2019YFD1001402）、湖北省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2020BBA036，2022BBA0073）、湖北省農(nóng)業(yè)創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃

宋江濤，E-mail：912104398@qq.com。通信作者劉繼紅，E-mail：liujihong@mail.hzau.edu.cn

（責(zé)任編輯 趙伶俐）