駱海春 陳高健 姚起艷 張雪梅

北海市食品藥品檢驗所，廣西 北海 536000

珍珠明目滴眼液是由珍珠液、冰片兩味中藥組成，具有清熱瀉火、養(yǎng)肝明目作用，用于肝虛火旺引起的視力疲勞癥和慢性結(jié)膜炎，長期使用可以保護視力。該藥為二十世紀80年代由江蘇省衛(wèi)生廳批準的中藥滴眼液，目前收載于《中藥成方制劑》第17冊[1]，是基本藥物品種[2]。珍珠明目滴眼液生產(chǎn)過程中運用到乙醇作為助溶劑，《中國藥典》2020年版四部通則0861中規(guī)定，乙醇為第三類溶劑殘留，不得超過0.5%[3]。雖然目前該滴眼液的檢驗標準中乙醇殘留量并未做要求，鑒于《中國藥典》2020年版相對于前版藥典增加了許多藥品的溶劑殘留項目，可見控制溶劑殘留會成為今后醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)上的趨勢。珍珠明目滴眼液作為眼藥制劑，質(zhì)量標準還需要完善，可將乙醇殘留量作為標準提高項目。文獻資料中，只有氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量的記載[4]，此方法為直接進樣法，直接進樣法容易污染系統(tǒng)和檢測器，而且樣品基質(zhì)也可能會干擾檢測過程。因此，建立了頂空氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量，本方法采用氣體進樣，可專一性收集樣品中的易揮發(fā)性成分，避免了不揮發(fā)成分對系統(tǒng)和檢測器的污染以及對檢測的干擾，具有更高靈敏度和分析速度，可以進一步有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀(含F(xiàn)ID檢測器)；DANI HSS86.50頂空進樣器；AX205DU電子分析天平。

1.2 試藥 乙醇純度標準物質(zhì)(批號：GBW06112 15002，中國計量科學研究院，標準值：99.8%)；叔丁醇(批號：0451905，標準值99.9% )，水為娃哈哈純凈水。珍珠明目滴眼液6批次(批號：190403，北海國發(fā)海洋生物產(chǎn)業(yè)股份有限公司制藥廠；批號：191104，湖北潛江制藥股份有限公司；批號：SC201115，蘇州工業(yè)園區(qū)天龍制藥有限公司；批號：191024，蘇州太湖美藥業(yè)有限公司；批號：20100402，武漢五景藥業(yè)有限公司；批號：20080205，武漢五景藥業(yè)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：HP-INNOWAX石英毛細管柱(30 m×0.530 mm,1.00 μm)；載氣為氮氣，流速：4.0 mL/min；分流比2∶1，氫氣 30 mL/min；空氣400 mL/min。檢測器溫度：250 ℃；進樣口溫度：200 ℃；初始溫度70 ℃，保持5 min，升溫至180 ℃，保持8 min，頂空進樣，平衡溫度70 ℃，平衡時間15 min；進樣量1 mL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標溶液的制備 精密稱取叔丁醇 0.2206 g，置50 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置100 mL量瓶中，添加水至刻度，混勻，作為內(nèi)標溶液。

2.2.2 對照品儲備液的制備 精密稱取乙醇純度標準物質(zhì)1.0017 g，至100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.3 對照品溶液的制備 精密量取對照品儲備液2～25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液0.1 mL與內(nèi)標溶液0.5 mL，置 20 mL 頂空瓶中，密封，作為對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 精密稱取珍珠明目滴眼液1.0 g置5 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液0.1 mL與內(nèi)標溶液 0.5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，作為供試品溶液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性實驗 取對照品溶液、供試品溶液 ，按“2.1”項下的色譜條件分別進行測定，供試品溶液中乙醇與內(nèi)標溶液中叔丁醇峰完全分開，保留時間分別為2.07和1.89，分離度為4.17，理論塔板數(shù)乙醇為39154，叔丁醇為30302。供試品溶液如圖1所示。

圖1 供試品溶液色譜圖

2.4 專屬性試驗 取陰性對照(水)按“2.1”項下的色譜條件進行測定。結(jié)果陰性對照(水)對乙醇測定無干擾。如圖2所示。

圖2 陰性對照圖

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取2.2.2項下的對照品儲備液0.25、0.5、1、2、4、8 mL，分別置 25 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。制成0.1000、0.1999、0.3999,0.7998、1.5995、3.1990 mg/mL的系列對照品溶液。分別精密量取上述系列對照品溶液0.1 mL及內(nèi)標0.5 mL置20 mL頂空進樣瓶中，密封。按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖。以乙醇峰面積與叔丁醇的峰面積比值Y為縱坐標，以對照品溶液的濃度X為橫坐標，計算得到回歸方程：Y=1.1164X-0.0176(r=0.9999)。結(jié)果表明乙醇在0.1000～3.19990 mg范圍內(nèi)，對照品與內(nèi)標峰面積比與檢測濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 檢出限 精密量取濃度為0.1000 mg/mL的對照品溶液逐步稀釋，精密量取稀釋后的對照品溶液0.1 mL和內(nèi)標溶液0.5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，按“2.1”項下色譜條件進行測定，以基線噪音的3倍計算，得到乙醇的最低檢出量為0.0513 μg。

2.7 精密度實驗 按2.2.3項下方法制備對照品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進行，記錄色譜圖。計算待測組分乙醇峰面積與內(nèi)標物質(zhì)叔丁醇面積比值的RSD為0.78 %。實驗結(jié)果表明，本方法的穩(wěn)定性良好。

2.8 重復性實驗 精密稱取同一批珍珠明目滴眼液(批號：190403)按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進行，記錄色譜圖。按內(nèi)標法計算乙醇含量，其乙醇含量分別為：0.217%，0.214%，0.215%，0.212%，0.216%，0.218%。平均值為0.215%，RSD為0.92%。實驗結(jié)果表明，本方法的重復性良好。

2.9 穩(wěn)定性實驗 精密稱取同一批珍珠明目滴眼液(批號：190403)按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，分別于0、2、4、8、12、16、20、24 h進樣，記錄色譜圖。計算待測組分乙醇峰面積與內(nèi)標物質(zhì)叔丁醇面積比值的RSD為0.85%。實驗結(jié)果表明，本方法 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.10 加樣回收率實驗 精密稱取已知乙醇殘留量的珍珠明目滴眼液(批號：190403)約0.5 g，置5 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”項下乙醇對照品儲備液0.1、0.5、1.0 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。結(jié)果平均加樣回收率為98.28 %，RSD為1.11 %。見表1。

表1 乙醇加樣回收率實驗結(jié)果

2.11 樣品含量測定 精密稱取6批樣品按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進行，記錄色譜圖。圖譜如圖3所示，測定結(jié)果見表2。

圖3 6批樣品圖譜

表2 6批樣品乙醇殘留量

3 討論

3.1 色譜柱的選擇 在研究過程中[5-7]，進行了色譜柱的選擇研究，經(jīng)過比較FFAP、DB-1、HP-INNOWAX，最終選擇HP-INNOWAX，待測物乙醇與內(nèi)標叔丁醇可以達到較好的分離度和較高的理論塔板數(shù)，且無其他雜質(zhì)峰干擾。

3.2 內(nèi)標物質(zhì)的選擇 本實驗考查了丙酮、異丙醇、正丙醇、二氧六環(huán)、N-N二甲基甲酰胺、叔丁醇、乙酸乙酯共7種內(nèi)標物質(zhì)[8-9]，結(jié)果表明叔丁醇出峰快、無干擾，與乙醇的分離度好，故選擇叔丁醇為內(nèi)標物質(zhì)。

3.3 頂空條件的選擇 本實驗采用頂空平衡時間為15 min，比較了60、70、80、90、100 ℃的頂空平衡溫度，結(jié)果表明70 ℃時已氣化完全。故選擇70 ℃作為頂空平衡溫度。

3.4 測定結(jié)果討論 從結(jié)果可以看出6批樣品中乙醇殘留量從0.2 %到0.5 %不等，變動幅度差別較大，雖然大部樣品控制在0.5 %以內(nèi)，但有兩批樣品超出了《中國藥典》乙醇殘留量0.5 %的限值，可見該滴眼液在生產(chǎn)過程中乙醇量的控制并不嚴格，建議明確乙醇的使用量，增加珍珠明目滴眼液的乙醇殘留量的檢查項，以進一步規(guī)范珍珠明目滴眼液的生產(chǎn)，保證藥品的安全有效性。