李晶晶， 楊路存， 熊 豐， 肖元明， 陳 志， 周國英*

(1.青海師范大學生命科學學院，青海 西寧 810008；2.中國科學院西北高原生物研究所，青海 西寧 810008；3.青海省青藏高原藥用動植物資源重點實驗室，青海 西寧 810008)

麻花艽為龍膽科龍膽屬多年生草本植物，是2020年版《中國藥典》規(guī)定的秦艽基源植物之一，以根入藥，藏醫(yī)稱“解吉嘎?！?，是傳統(tǒng)藏藥材之一，其主要有效成分為環(huán)烯醚萜類，包括龍膽苦苷、馬錢苷酸、6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷等，具有祛風濕、清濕熱、止痹痛、退虛熱等功效，用于治療風濕痹痛，骨節(jié)酸痛，濕熱黃疸，小兒疳積發(fā)熱等癥[1]?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)，麻花艽還具有抗炎鎮(zhèn)痛、保肝、健胃利膽、抗原蟲、促進胃液分泌等功效[2]。

干燥是中藥材加工的重要環(huán)節(jié)之一，對其性狀、品質(zhì)具有重要的影響[3]。研究表明，曬干最有利于青蒿中青蒿素的保留[4]；白芍藥材微波真空干燥加工時指標成分含量最高[5]；蒸后烘干和微波干燥最有利于金銀花有效成分保留，真空干燥次之，其他方法較差[6]；陰干、晾曬是唐古特大黃最適干燥方法[7]。2020年版《中國藥典》對于麻花艽藥材的干燥方法僅有堆置“發(fā)汗”后攤開曬干，或不經(jīng)“發(fā)汗”直接曬干的簡單描述[1]，此外，對其干燥方法鮮有報道，大多側(cè)重于有效成分測定、栽培和野生藥材質(zhì)量對比、不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量對比等方面[8-9]。因此，本研究采用自然陰干、自然曬干、殺青后陰干、100 ℃烘干、微波干燥、冷凍干燥6種干燥方法對麻花艽新鮮根進行干燥，以龍膽苦苷、馬錢苷酸、6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量為內(nèi)在質(zhì)量評價指標，采用層次分析法對不同干燥方法的麻花艽藥材質(zhì)量進行綜合評價，并結(jié)合藥材有效成分含量、折干率、外觀色澤、干燥時間選擇最優(yōu)干燥方法。

1 材料

1.1 藥材 麻花艽于2019年10月中旬采自青海省互助縣東溝鄉(xiāng)藥材種植基地，經(jīng)中國科學院西北高原生物研究所周國英研究員鑒定為麻花艽GentianastramineaMaxim.。

1.2 儀器與試劑 Agilent 1260型高效液相色譜儀，配置G7114A 1260 VWD、G7129A 1260 Vialsampler、G7111A 1260 Quat Pump VL(美國Agilent公司)；KH-500DE型數(shù)控超聲儀(昆山市禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；FDU-1100型冷凍干燥機(深圳市科力易翔儀器設備有限公司)；KMZ-2006微波真空滅菌干燥機(溫州市康牌制藥機械有限公司)；DHG-9425AE型電熱鼓風干燥箱(上海捷呈實驗儀器有限公司)。龍膽苦苷(批號18051501)、獐牙菜苦苷(批號18031201)對照品購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司；馬錢苷酸(批號YRM033-200501)、6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷(批號YRP010-200501)、獐牙菜苷(批號YRZ002-190901)對照品購自成都儀睿生物科技有限公司，純度均在98%以上。甲酸(天津百世化工有限公司)；甲醇(色譜純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司)；水為自制超純水(Millipore Milli-Q system)。

2 方法

2.1 藥材干燥 為了排除藥材根系對各成分含量的影響，在干燥前首先將其清洗干凈，隨機分成質(zhì)量接近的18組，設置干燥方法為自然陰干、自然曬干、殺青后陰干、100 ℃烘干、微波干燥、冷凍干燥，平行3次，具體見表1。

表1 麻花艽干燥方法

2.2 各成分含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent 5 HC-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm)；流動相0.1%甲酸(A)-甲醇(B)(75∶25)；體積流量1.0 mL/min；柱溫28 ℃；檢測波長254 nm。

2.2.2 溶液制備

2.2.2.1 對照品溶液 精密稱取各對照品適量至5 mL量瓶中，甲醇溶解制成分別含龍膽苦苷(1.35 μg/mL)、馬錢苷酸(0.086 25 μg/mL)、6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷(0.083 75 μg/mL)、獐牙菜苦苷(0.087 5 μg/mL)、獐牙菜苷(0.048 75 μg/mL)的溶液，即得。

2.2.2.2 供試品溶液 精密稱取藥材干燥粉末(過3號篩)0.5 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入25 mL甲醇，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，取出，放至室溫，甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.2.3 折干率測定 公式為折干率=(干燥至恒重的藥材質(zhì)量/藥材鮮重)×100%。

2.2.4 方法學考察

2.2.4.1 線性關(guān)系考察 吸取對照品溶液1、2、4、6、8、10、12、14 μL，在“2.2.1”項色譜條件下進樣測定。以峰面積(Y)對進樣量(X)進行回歸，結(jié)果見表2，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4.2 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液，于0、2、4、6、8、12、24 h在“2.2.1”項色譜條件下各進樣10 μL測定，結(jié)果見表2，可知各成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4.3 精密度試驗 精密吸取同一份供試品溶液10 μL，在“2.2.1”項色譜條件下進樣測定6次，結(jié)果見表2，可知儀器精密度良好。

2.2.4.4 重復性試驗 取同一批藥材6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下進樣測定，結(jié)果見表2，可知該方法重復性較好。

2.2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取各成分含量已知的藥材粉末6份，每份0.25 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入對照品溶液適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下進樣測定，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 方法學考察結(jié)果

2.2.5 專屬性試驗 精密稱取不同干燥方法下藥材粉末各0.5 g，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下各進樣10 μL測定，結(jié)果見圖1。由此可知，各成分色譜峰分離度理想，表明該方法專屬性良好。

1. 馬錢苷酸 2.6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷 3. 獐牙菜苦苷 4. 龍膽苦苷 5. 獐牙菜苷1. loganic acid 2.6′-O-β-glucosyl gentiopicrside 3. sweroside 4. gentiopicroside 5. swertiamarin圖1 各成分HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents

2.3 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 22.0軟件進行單因素方差分析，層次分析(AHP)進行綜合評價，參考文獻[10]進行各指標重要性評分。龍膽苦苷、馬錢苷酸除了抗炎保肝、健胃利膽、祛風除痛等臨床作用外，在胃腸道疾病、腫瘤、神經(jīng)精神疾病、骨與關(guān)節(jié)疾病等方面也有應用[11]，并且兩者為2020年版《中國藥典》規(guī)定的主要成分，重要性高于其他成分；獐牙菜苦苷、獐牙菜苷在抗炎、抗癲癇、保護神經(jīng)方面有重要的臨床作用[12-13]，但含量不高，故其重要性略低。綜上所述，龍膽苦苷、馬錢苷酸、6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量的相對重要性分別計為1、3、5、7、9分，見表3。

表3 各指標重要性評分

根據(jù)表3結(jié)合相關(guān)文獻，計算指標成分權(quán)重系數(shù)及隨機一致性比率(CR)[10]，公式為CR=CI/RI，CR<0.1表示矩陣具有理想的一致性，計算綜合評分Y，公式為Y=A/A′×WA+B/B′×WB+C/C′×WC+D/D′×WD+E/E′×WE，其中A～E分別為各干燥方法下龍膽苦苷、馬錢苷酸、6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量平均值，A′～E′分別為各成分含量最高值，WA～WE分別為各成分權(quán)重系數(shù)，Y越大，藥材內(nèi)在質(zhì)量越好。

3 結(jié)果

3.1 不同干燥方法對干燥時間、外觀色澤、折干率的影響

3.1.1 干燥時間 自然陰干過程最長，耗時12 d；殺青后陰干耗時4 d，所需時間僅為陰干的1/3；100 ℃烘干、微波干燥耗時較短，1 d內(nèi)即可完成，以后者更明顯，見表4。

3.1.2 外觀色澤 不同干燥方法下藥材外觀色澤有明顯差異，見表4。

3.1.3 折干率 100 ℃烘干下折干率最高，微波干燥、殺青后陰干次之，自然陰干最低，見表4。

表4 不同干燥方法下干燥時間、折干率、外觀色澤

3.2 不同干燥方法對各成分含量的影響 2020年版《中國藥典》規(guī)定，秦艽按干燥品計算，含龍膽苦苷(C16H20O9)和馬錢苷酸(C16H24O10)總量不得少于2.5%[1]。如圖2所示，5種成分總含量由高到低依次為冷凍干燥、微波干燥、殺青后陰干、100 ℃烘干、自然陰干、自然曬干。如圖3所示，真空冷凍干燥下龍膽苦苷含量最高，殺青后陰干下馬錢苷酸含量最高，自然曬干、自然陰干下6′-O-β-葡萄糖基龍膽苦苷含量最高，殺青后陰干下獐牙菜苦苷、獐牙菜苷最高。

注：YG為自然陰干，SQ為殺青后陰干，WB為微波干燥，DG為冷凍干燥，HG為100 ℃烘干，SG為自然曬干。不同干燥方法下不同小寫字母之間兩兩比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；同一小寫字母之間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。圖2 不同干燥方法對5種成分總含量的影響Fig.2 Effects of different drying methods on total content of five constituents

3.3 層次分析綜合評價 按“2.2.5”項下方法測得隨機的一致性比率CR=0.052 9<0.1，矩陣具有理想的一致性，各指標權(quán)重系數(shù)見表5。再計算綜合評分，結(jié)果見表6，可知殺青后陰干最高，冷凍干燥次之，100 ℃烘干、傳統(tǒng)的曬干較低。

4 討論

藥材色澤是內(nèi)在質(zhì)量的重要標志之一，藥材色澤較易變化，往往會影響藥材質(zhì)量，其變化的類型主要為褪色和色澤加深。劉何春等[7]發(fā)現(xiàn)大黃加工時隨著烘干溫度逐漸升高，斷面顏色逐漸加深。秦艽不同加工品中80 ℃鼓風干燥藥材顏色最淺，直接陰干和自然曬干的秦艽色澤較深[14]。這與本研究麻花艽外觀色澤結(jié)論有差異，溫度可能是導致色澤差異最直觀的影響，盡管外觀色澤有差異，但研究發(fā)現(xiàn)100 ℃烘干比陰干、曬干更有利于有效成分保留的結(jié)果具有一致性。

藥材在干燥過程中，隨著水分的散失、生理活性、藥材性狀的變化，有效成分也會因積累或分解發(fā)生變化，含量也將隨之發(fā)生顯著的變化，這在有效成分化學性質(zhì)活潑的藥材中更為明顯。麻花艽中的主要有效成分為環(huán)烯醚萜苷類，如龍膽苦苷、馬錢苷酸等，環(huán)烯醚萜分子結(jié)構(gòu)中具有半縮醛羥基，性質(zhì)活潑，加工時有效成分易受干燥方法的影響。研究發(fā)現(xiàn)，有效成分同為環(huán)烯醚萜苷的玄參葉在室溫陰干和40 ℃干燥時，分解酶活性較大，有效成分不斷被分解，含量顯著下降，隨著干燥溫度的上升，酶活性被破壞，酶促反應被抑制，有效成分含量保留較高[15]。金銀花低溫干燥時，環(huán)烯醚萜苷類斷氧化馬錢子苷的含量增加,莫諾苷含量降低[16]。目前，對于麻花艽干燥方法加工方面的研究未見報道，僅有為數(shù)不多關(guān)于其他秦艽種類加工方面的研究作為參考。王秀芬等[14]，研究發(fā)現(xiàn)秦艽在80 ℃干燥處理時主要有效成分含量顯著高于自然曬干和直接陰干處理。張潤等[17]研究表明發(fā)汗、烘干、陰干、曬干對秦艽有效成分含量的影響存在顯著差異，特別是傳統(tǒng)發(fā)汗處理不利于有效成分含量的保存，建議秦艽加工時不必發(fā)汗，在對干燥方法進行研究時發(fā)現(xiàn)，曬干則不利于有效成分保留的方式。以上陰干、曬干秦艽有效成分含量較低的結(jié)論與本研究結(jié)果一致。

注：YG為自然陰干，SQ為殺青后陰干，WB為微波干燥，DG為冷凍干燥，HG為100 ℃烘干，SG為自然曬干。不同干燥方法下不同小寫字母之間兩兩比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；同一小寫字母之間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。圖3 不同干燥方法對5種成分含量的影響Fig.3 Effects of different drying methods on contents of five constituents

表5 各指標權(quán)重系數(shù)

表6 不同干燥方法下綜合評分

微波干燥、冷凍干燥、殺青后陰干等干燥方法在秦艽加工中未有研究。代婉瑩等[18]研究發(fā)現(xiàn)，微波干燥比其他干燥方法更有利于栓水大黃有效成分保留，冷凍干燥對成分造成的損失也較小。微波干燥與真空冷凍干燥處理后荊芥中胡薄荷酮含量最高，顯著高于其他方式，并且微波干燥與真空冷凍干燥處理后薄荷酮含量較高，其他干燥方法處理的樣品中均未檢測到[19]?！皻⑶唷笔抢酶邷匮杆倨茐孽r藥中的各類酶的活性，抑制相應化學成分的酶促氧化反應及水解反應等，有利于功效物質(zhì)保留，以保持其良好品質(zhì)[20]。殺青后寒蘭花中含有的黃酮類物質(zhì)降解酶失活，黃酮物質(zhì)降解速度減慢，殺青處理后寒蘭花總黃酮含量比不殺青高[21]。因此，本研究在100 ℃烘干、陰干、曬干的基礎上加入了冷凍干燥、微波干燥、殺青后陰干，更加全面地對麻花艽干燥方法對有效成分含量的影響進行探討。此外，根據(jù)麻花艽各成有效成分含量及臨床價值重要程度進行層次分析綜合評價，結(jié)合生產(chǎn)實踐、干燥時間及藥材性狀等多方面篩選干燥方法，增強了結(jié)果的實用性和可靠性。

5 結(jié)論

與傳統(tǒng)的曬干和陰干比較，冷凍干燥、微波干燥等新型的干燥方法更加有利于成分的保留，但此類方式對設備要求高、耗能高，不宜大規(guī)模采用。在研究中，殺青后陰干方法，有效成分含量保留好，雖然總含量略低于冷凍干燥和微波干燥，但馬錢苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷成分保留均優(yōu)于其他干燥方法，且耗時較少、耗能低、操作便利、易推廣。

綜合麻花艽外觀色澤、耗時、耗能、折干率、有效成分含量、設備要求是否適宜大規(guī)模推廣等方面因素，麻花艽干燥方法建議采用殺青后陰干。