李瀟瀟，李芝香，董寧，孔玉,肖剛

齲病是多因素導致的牙體硬組織慢性感染性口腔疾病，發(fā)病率高，治療率低，嚴重危害患兒口腔和全身健康[1]。唾液中含有大量有機和無機成分，以及保護宿主所需的因子，是齲病診斷、預防、病情評估的潛在生物標志物[2]。氧化應激在兒童齲病發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用，現有研究發(fā)現，齲病患者牙面可出現氧化還原負電位，導致齲變組織內超氧化物陰離子自由基含量增加，其唾液中可檢測到氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡[3-4]。免疫反應是齲病發(fā)病的主要因素，口腔致病微生物感染可激活免疫細胞并分泌促炎因子，導致局部組織炎性浸潤和牙體組織破壞、缺損，唾液中體液免疫水平與齲病發(fā)生密切相關[5-6]。鑒于此，本研究擬檢測齲病兒童唾液中氧化應激和細胞免疫指標，分析其與齲病嚴重程度的相關性，旨在為臨床診治提供參考，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年3月—2021年3月西安交通大學口腔醫(yī)院兒童口腔科收治齲病患兒107例(齲病組)，男59例，女48例，年齡3～9(6.76±2.02)歲；患齲牙數1～8(4.86±1.21)顆。另選擇同期于醫(yī)院兒童保健門診體檢的健康兒童83例為健康對照組，男50例，女33例，年齡3～10(6.71±2.05)歲。均排除口腔疾病、呼吸系統(tǒng)疾病、自身免疫疾病、過敏性疾病等。2組患兒性別和年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究已經獲得西安交通大學口腔醫(yī)院倫理委員會批準(審批號：pz201903051)，受試者家屬均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準：①齲病診斷標準參照世界衛(wèi)生組織標準[7]；②年齡3～9歲。(2)排除標準：①牙髓炎、根尖周炎、牙周病、口腔潰瘍；②上呼吸道感染、肺炎、哮喘、過敏性疾病；③血液系統(tǒng)疾病、免疫疾?。虎芙?個月使用含氟制劑；⑤近1個月服用激素、免疫抑制劑者。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 唾液標本采集：入組當日早餐后1 h采集唾液標本，采集前清水漱口，棄去第一口唾液后將唾液6 ml吐至無菌培養(yǎng)皿中，再移至 EP 管，多用途高速離心機離心(JIDI-20D臺式，廣州吉迪儀器有限公司)，取上清液待測。

1.3.2 唾液氧化應激指標檢測：取上清液50 μl，采用 PBS 緩沖液將其稀釋成 10 倍后上機檢測，當日未檢測樣本保存于液氮罐。以JC-1086A酶標分析儀(山東聚創(chuàng)華業(yè)儀器公司)采用酶聯免疫吸附試驗法檢測唾液丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(TAC)、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)水平，試劑盒購自美國賽默飛公司。

1.3.3 唾液細胞免疫指標檢測：取上清液50 μl，以免疫透射比濁法檢測唾液中分泌性免疫球蛋白A (sIgA)、免疫球蛋白G(IgG)、IgA、IgM，試劑盒購自美國Epitope Diagnostics公司。

1.4 齲病嚴重程度評價 采用乳牙齲、失、補牙面數(decayed-missing-filled teeth，dmft)評估齲病嚴重程度，dmft是指9歲以下兒童因齲缺、失、補的乳牙總和，并排除生理性脫落乳牙。根據dmft將患者分為低齲亞組(0～4，42例)、高齲亞組(≥5，65例)[8]。

2 結 果

2.1 各組唾液中氧化應激指標比較 齲病組唾液中MDA水平低于健康對照組(P<0.05)，TAC、SOD、CAT水平高于健康對照組(P<0.05)；高齲亞組唾液中MDA水平低于低齲亞組(P<0.05)，TAC、SOD、CAT水平高于低齲亞組(P<0.05)，見表1。

表1 2組及2亞組唾液中氧化應激指標比較

2.2 各組唾液中細胞免疫指標比較 齲病組唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM水平高于健康對照組(P<0.05)；高齲亞組唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM水平高于低齲亞組(P<0.05)，見表2。

表2 2組及2亞組唾液中細胞免疫指標比較

2.3 相關指標與dmft相關性分析 建立多重線性回歸方程，以dmft為因變量，MDA、TAC、CAT、SOD、sIgA、IgG、IgA、IgM為自變量，回歸分析結果顯示，MDA與dmft呈負相關(P<0.05)，TAC、CAT、SOD、sIgA、IgG、IgA、IgM與dmft呈正相關(P<0.05)，見表3。

表3 影響dmft的多重線性回歸方程

2.4 唾液氧化應激和免疫指標鑒別齲病嚴重程度的價值 以兒童齲病嚴重程度為狀態(tài)變量(賦值：0=低齲亞組，1=高齲亞組)，以MDA、TAC、CAT、SOD、sIgA、IgG、IgA、IgM為檢測變量，繪制受試者工作特征曲線(ROC)，其中MDA、TAC、sIgA具備鑒別齲病嚴重程度的價值(P<0.05)，其曲線下面積(AUC)分別為0.713、0.744、0.730，三者聯合鑒別兒童齲病嚴重程度的AUC為0.911，高于單獨指標(Z=3.750、3.581、3.580,P均=0.000)，見表4、圖1。

表4 唾液氧化應激和免疫指標鑒別兒童齲病嚴重程度的價值

圖1 唾液氧化應激和免疫指標鑒別兒童齲病嚴重程度的ROC圖

3 討 論

唾液是一種包含蛋白質、糖蛋白、電解質、有機小分子的異質液體，充當清潔溶液、離子儲存器、潤滑劑和緩沖劑的角色，在口腔穩(wěn)態(tài)和健康維持中發(fā)揮重要作用。唾液氧化應激在口腔炎性反應和齲病的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用[9]。唾液被認為是抵御自由基介導的氧化應激的第一道防線，含有多種抗氧化劑，抗氧化劑是存在于人體組織和生物液體中的各種酶或非酶化合物，可防止氧化反應產生的氧化劑或相關的潛在并發(fā)癥[10]?？谇桓腥緯r活性氧和自由基自多形核中性粒細胞釋放，抑制口腔細菌生長，同時抗氧化系統(tǒng)也被激活，避免過度氧化應激反應和氧化損傷，通過檢測唾液中抗氧化指標水平可預測口腔疾病的發(fā)生[11]。現有報道顯示，大約70%的牙周病患者唾液抗氧化水平較低，牙周炎患者唾液中氧化應激指數、總氧化狀態(tài)水平增高，TAC水平降低[12-13]。

本研究發(fā)現，齲病患者唾液氧化/抗氧化狀態(tài)與其他口腔疾病不同，齲病兒童唾液中氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡，抗氧化水平增加，氧化應激水平下降。Pani[14]報道也顯示，齲病兒童唾液中TAC水平增加，高于無齲病兒童。分析原因為齲病兒童唾液中抗氧化指標增高可能是氧化應激下的一種代償機制，以抑制氧化應激，減少牙組織氧化損傷。進一步分析發(fā)現，高齲亞組唾液中MDA水平低于低齲亞組，TAC、CAT、SOD水平高于低齲亞組，唾液中MDA水平與dmft呈負相關，TAC、CAT、SOD與dmft呈正相關，說明齲病進展可能導致更高的抗氧化水平，抗氧化水平與齲病進展有關。Jurczak等[15]報道也指出，發(fā)生空洞的齲病兒童唾液中抗氧化指標還原型/氧化型谷胱甘肽含量比值水平高于無空洞的齲病兒童和無齲兒童，唾液抗氧化水平與齲病進展有關。Araujo等[16]指出，總蛋白、TAC、SOD酶促抗氧化活性和尿酸非酶促抗氧化活性隨著齲齒嚴重程度的增加而增加，以減少唾液氧化損傷。

現有研究發(fā)現，口腔局部免疫功能障礙與齲病的發(fā)生也存在密切關系[17]，本研究結果也顯示，齲病組唾液中sIgA、IgG、IgA和 IgM水平高于健康對照組，且高齲亞組高于低齲亞組。正常人唾液中含豐富免疫球蛋白，包括sIgA、IgG、IgA和IgM等，可控制致齲口腔微生物群落的生長[18]。其中sIgA是口腔特定的局部獲得性防御機制，可有效抑制細菌黏附，中和病毒細菌使細菌酶和毒素失活，預防齲齒形成[19]。IgA、IgG、IgM參與體液免疫，在補體激活的次級反應中起到重要作用。IgM 是抗原刺激后最早出現的免疫球蛋白，IgG、IgM作為抗體激活物質參與補體經典途徑激活[20]。由此可見，齲病兒童口腔局部免疫功能發(fā)生明顯的變化，受齲齒感染影響，口腔體液免疫系統(tǒng)處于激活狀態(tài)。

本研究多重線性回歸分析結果顯示，sIgA、IgG、IgA、IgM水平與dmft呈正相關。Gornowicz等[21]研究結果同樣顯示，齲病青少年唾液sIgA水平增高，恒牙齲失補牙面數>11的患者唾液sIgA水平高于恒牙齲失補牙面數=3的患者，說明唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM水平增高與齲病的發(fā)生和進展有關?，F有研究發(fā)現，齲齒活動性增強可誘導sIgA水平升高，發(fā)揮殺菌或抑菌作用，清除口腔致病菌，sIgA可防止變形鏈球菌黏附在牙齒表面形成葡聚糖，進而抑制牙體硬組織的脫礦過程，在齲病發(fā)病過程中發(fā)揮保護作用，sIgA分泌量與齲患程度呈正相關[22-23]。ROC分析結果顯示，唾液中MDA、TAC、sIgA具備鑒別齲病嚴重程度的價值，AUC值分別為0.713、0.744、0.730，聯合3項指標后鑒別齲病嚴重程度的效能明顯提高，說明檢測唾液氧化應激和免疫指標對兒童齲病病情評估具有重要意義。

綜上，兒童齲病唾液中sIgA、IgG、IgA、IgM、TAC、CAT、SOD水平升高，MDA水平降低，且與齲病嚴重程度相關。檢測唾液中氧化指標、抗氧化指標、免疫指標水平有助于評估齲病風險和病情嚴重程度。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

李瀟瀟：設計研究方案，實施研究過程，論文撰寫；李芝香:提出研究思路，課題設計；董寧：項目指導,分析試驗數據，論文審核；孔玉：資料搜集整理，論文修改；肖剛：進行統(tǒng)計學分析