◎ 王 森,李國(guó)烈,陳緯成
(南充農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)中心,四川 南充 637000)
唑螨酯化學(xué)名稱為(E)-α-(1,3-二甲基-5-苯氧基吡唑-4-基亞甲基氨基氧)對(duì)甲苯甲酸異丁酯,又名Kiron、Ortus、殺螨王和霸螨靈[1]。唑螨酯作為廣譜殺螨劑,速效性好,持效期長(zhǎng),與其他藥物無(wú)交互抗性,主要用于防治紅蜘蛛、銹壁虱等病害[2]。
桑葚,又名桑果,富含維生素、氨基酸和人體所需的微量元素,既可直接食用,也可用于加工制作桑果汁、桑果酒等。近年來(lái),桑果市場(chǎng)發(fā)展前景廣闊[3-5]。在桑果生產(chǎn)中,主要通過使用化學(xué)藥物來(lái)防治病蟲害,不規(guī)范的使用化學(xué)藥物可能會(huì)造成桑葚中農(nóng)藥殘留超標(biāo),危害人體健康[6]。朱興江等[7]采用高效液相色譜法測(cè)定了柑桔和白菜中唑螨酯的殘留量。李國(guó)烈等[8]報(bào)道了桑葚中醚菌酯等藥物的殘留測(cè)定。
Waters Xevo TQS超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀;Sigma3-18KS離心機(jī);Mettler ToledoML802分析天平;IKA Vortex Genius 旋渦混合器;安捷倫石墨化炭黑氨基復(fù)合柱500 mg/6 mL。
唑螨酯標(biāo)準(zhǔn)品;甲醇和乙腈(質(zhì)譜級(jí),霍尼韋爾);甲苯(色譜級(jí),霍尼韋爾),甲酸(色譜級(jí),阿拉?。怀兯ㄇ际希?。
稱取10 g樣品(精確至0.05 g)至50 mL離心管中,加入5 g氯化鈉、1顆均質(zhì)子,再加入20.00 mL乙腈,渦旋振蕩提取 15 min,高速離心 5 min(6 000 r·min-1),吸取上清液10.00 mL過柱(預(yù)先用10 mL乙腈+甲苯(75+25)活化小柱,棄去廢液),再用20 mL乙腈+甲苯(75+25)洗脫,收集所有流出液,40 ℃水浴旋蒸至近干,用5.00 mL 85%甲醇溶液溶解殘?jiān)瑴u旋混勻后過濾膜,裝入樣品瓶待檢測(cè)。
色譜柱:Waters Xbridge C18(3.0 mm×50 mm×3.5 μm)。采用0.1%甲酸乙腈溶液(A)、0.1%甲酸水溶液(B)作為流動(dòng)相,梯度洗脫程序見表1。柱溫:35 ℃;進(jìn)樣量:1.00 μL;掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM);霧化氣流速:1 200 L·h-1;錐孔氣流速:200 L·h-1;碰撞氣流速:0.10 mL·min-1;鞘氣溫度為500 ℃。其他相關(guān)參數(shù)見表2。
表1 流動(dòng)相及梯度洗脫程序表
表2 質(zhì)譜參數(shù)表
取唑螨酯標(biāo)準(zhǔn)品 1 mL(1 000 μg·mL-1)于 10 mL容量瓶,用色譜級(jí)甲醇定容,得100 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,-20 ℃保存,3個(gè)月內(nèi)可使用。根據(jù)需要,將儲(chǔ)備液用桑葉空白基質(zhì)配制為一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照1.3中儀器條件進(jìn)行分析。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、對(duì)應(yīng)色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過添加一系列已知質(zhì)量濃度的樣品進(jìn)行測(cè)定,以3倍信噪比(S/N=3)時(shí)的樣品質(zhì)量濃度為檢出限。
在桑葚空白樣品中,選擇 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-13個(gè)濃度的添加水平進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)水平進(jìn)行6個(gè)平行實(shí)驗(yàn),計(jì)算回收率和精密度。
使用85%甲醇水溶液配制的標(biāo)液稱為試劑標(biāo)液(A),使用桑葚空白基質(zhì)配制的標(biāo)液稱為基質(zhì)標(biāo)液(B),以兩者峰面積比值來(lái)評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。
桑葚樣品經(jīng)前處理、上機(jī)分析,得色譜圖見圖1-圖4。結(jié)果表明,采取該方法檢測(cè)樣品凈化效果好、基質(zhì)干擾小、峰形及分離度良好,同時(shí)可獲得較強(qiáng)的信號(hào)響應(yīng)。
圖1 唑螨酯標(biāo)液圖譜(1.00 μg·L-1,試劑標(biāo))圖
圖4 唑螨酯加標(biāo)樣品圖譜(1.00 μg·kg-1)圖
該試驗(yàn)條件下,唑螨酯在質(zhì)量濃度1.00~100.00 μg·L-1時(shí)線性關(guān)系良好,標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=2.042 55×107x+2 719.46,R2=0.999。 檢 測(cè) 限(S/N=3)為 0.25 μg·kg-1,以 4倍檢測(cè)限為定量限,則定量限為 1.00 μg·kg-1[9]。
在 1 μg·kg-1、10 μg·kg-1、100 μg·kg-1共 3 個(gè)添加濃度水平下,唑螨酯的回收率為83.9%~89.2%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.13%~4.31%,見表3。結(jié)果表明,該方法具有較高的回收率和準(zhǔn)確度。日內(nèi)精密度RSD(n=6)為2.99%~4.39%,日間精密度RSD(n=3)為2.76%~3.26%,見表4。結(jié)果表明,該方法具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性,滿足質(zhì)量控制要求。
表3 方法回收率表(n=6)
表4 方法精密度表(n=6)
基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見表5。在不同濃度條件下,唑螨酯在桑葚中的基質(zhì)效應(yīng)分別為80.38%~84.50%,即基質(zhì)抑制作用。因此為了提高方法的準(zhǔn)確性和靈敏度,采用本方法測(cè)定桑葚中的唑螨酯時(shí)應(yīng)采用桑葚基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行定量。
表5 方法基質(zhì)效應(yīng)表(n=5)
圖2 桑葚空白樣品圖譜圖
圖3 唑螨酯標(biāo)液圖譜(1.00 μg·L-1,桑葚基質(zhì)標(biāo))圖
本試驗(yàn)建立了測(cè)定桑葚中唑螨酯殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法,樣品經(jīng)乙腈提取,固相萃取小柱凈化,超高效液相色譜分離,質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè),外標(biāo)法定量。方法檢出限為0.25 μg·kg-1,定量限為 1.00 μg·kg-1,符合殘留限量的要求(0.1 mg·kg-1),平均回收率為83.9%~89.2%,精密度為2.76%~4.39%,適用于桑葚中唑螨酯殘留量的測(cè)定。