高靜，王彥紅，許邦禮

（1.鄭州兒童醫(yī)院/河南省兒童醫(yī)院內(nèi)分泌遺傳代謝科，鄭州 450000；2.河南省兒童醫(yī)院/河南省兒童醫(yī)院新生兒科，鄭州 450000）

性早熟為兒童常見(jiàn)的一種青春期發(fā)育異常疾病，以女孩特發(fā)性性早熟最多見(jiàn)，且其對(duì)兒童身心健康帶來(lái)的不良影響以及逐年增加的發(fā)病趨勢(shì)，均日益受人們關(guān)注。據(jù)報(bào)道[1]，性早熟患兒下丘腦-垂體-性腺軸（HPGA）功能啟動(dòng)過(guò)早，導(dǎo)致其骨齡超前發(fā)育，影響其生長(zhǎng)潛力與最終身高，加上第二性征與月經(jīng)初潮提前出現(xiàn)，容易出現(xiàn)社交退縮、抑郁等心理行為異常。Eugster等[2]報(bào)道促性腺激素釋放激素（GnRH）的長(zhǎng)效類似物已成為全球治療中樞性性早熟的常用藥，但長(zhǎng)期隨訪以及比較數(shù)據(jù)均有限，在臨床使用中存在不確定性。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，性早熟患兒往往形體偏胖，食欲旺盛，有面赤口渴、怕熱、便秘、急躁易怒等癥狀，呈痰火互結(jié)征象。劉志偉等[3]通過(guò)挖掘中藥治療性早熟的組方用藥特點(diǎn)及規(guī)律發(fā)現(xiàn)知母為應(yīng)用頻次最高的藥物。目前，關(guān)于兒童性早熟中醫(yī)藥研究集中于中藥方劑上，其中知母有清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥之功效，主治熱病煩渴、腸燥便秘，為該病治療常用藥材。知母總皂苷為知母主要成分，近年來(lái)被發(fā)現(xiàn)有降壓、平衡血糖、抗炎、抗性抑郁等功效，但用于性早熟治療中的作用方面報(bào)道鮮見(jiàn)[4]。本研究擬通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討知母總皂苷治療雌性性早熟大鼠的作用及其機(jī)制，為中醫(yī)藥研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)雌性SD大鼠，50只，5日齡，體質(zhì)量8～10 g，購(gòu)自北京斯貝福生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2019-0010，共同飼養(yǎng)在自然光照環(huán)境中，自由攝食飲水，21日齡離乳。本實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物處置方法符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 藥物、主要試劑和儀器 知母總皂苷[遼寧生物醫(yī)藥科技有限公司，黃色粉末，UV法測(cè)純度＞80%，主要成分：知母皂苷原B-II（58%），知母皂苷原E1（4%），知母皂苷原 B（1%）等]，達(dá)那唑膠囊（江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)H20023116），曲普瑞林（Ferring GmbH，批準(zhǔn)文號(hào)H20090256）。卵泡生成激素（FSH）、黃體生成激素（LH）、雌二醇（E2）促性腺激素釋放激素（ELISA）試劑盒（上海雙贏生物科技有限公司），兔抗大鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因親吻素-1（KiSS-1）、G 蛋白偶聯(lián)受體 54（GPR54）、GnRH及其受體（GnRHR）、β-actin一抗（ABcam），辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。PowerPac型號(hào)電泳儀（美國(guó)Bio-Rad公司）。

1.2 方法

1.2.1 造模、分組和干預(yù) 取40只大鼠建立性早熟模型[5]：在大鼠出生后5 d一次性皮下注射300 μg達(dá)那唑（取300 μg膠囊溶于體積比為1∶1的乙二醇/乙醇25 μL中制成混合液）誘導(dǎo)性成熟。剩余10只設(shè)為正常組，皮下注射等體積生理鹽水。造模大鼠隨機(jī)分為模型組、知母總皂苷低劑量組（知低組）、知母總皂苷高劑量組（知高組）、陽(yáng)性對(duì)照組，每組各10只，造模15日齡起開(kāi)始給藥：知低組、知高組分別灌胃100、200 mg/kg知母總皂苷（以生理鹽水將知母總皂苷粉末配制為相應(yīng)濃度）[6]，模型組、正常組灌胃等體積生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組皮下注射曲普瑞林100 μg/kg[7]，平均每日1次，連續(xù)干預(yù)16 d，記錄各組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間。

1.2.2 標(biāo)本采集 大鼠20日齡起，每日上午9點(diǎn)準(zhǔn)時(shí)觀察陰門開(kāi)啟情況，并在模型組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間作為處死時(shí)間點(diǎn)（約21～23日齡），同時(shí)一并處死其余4組大鼠，留取外周血、子宮、卵巢、下丘腦，下丘腦液氮冷凍保存。稱取子宮、卵巢濕質(zhì)量，計(jì)算子宮、卵巢指數(shù)。子宮指數(shù)=子宮質(zhì)量（mg）/大鼠體質(zhì)量（g），卵巢指數(shù)=兩側(cè)卵巢總質(zhì)量（mg）/大鼠體質(zhì)量（g）。

1.2.3 蘇木精-伊紅（HE）染色觀察大鼠卵巢形態(tài)學(xué)變化 取大鼠卵巢置于10%多聚甲醛中固定，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋等常規(guī)操作后，制備4 μm后的組織病理切片，進(jìn)行HE染色后光鏡下觀察大鼠卵巢形態(tài)學(xué)，并計(jì)算各組大鼠卵巢黃體數(shù)量。

1.2.4 ELISA檢測(cè)大鼠血清性激素水平 取大鼠外周血，3 000 r/min離心10 min，離心半徑8 cm，取上清液，-20℃保存。參考FSH、LH、E2 ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)吸光度值，檢測(cè)血清FSH、LH、E2水平。

1.2.5 qPCR 檢測(cè) KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA表達(dá) 取一半下丘腦組織，Trizol法提取總RNA，測(cè)定RAN濃度、純度，以總RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，反應(yīng)體系20 μL，依次加入5×Prime Script Buffer緩沖液 2 μL，Prime Script RT Enzyme Mix 0.5 μL，Oligo Dt Primer 0.5 μL，Random 6 mers 0.5 μL，RNA 樣品原液 200 ng，最后用 RNzse Free dH2O補(bǔ)足至20 μL。將上述PCR反應(yīng)液加入PCR反應(yīng)管內(nèi)，混勻后放入擴(kuò)增儀，引物序列為Kiss-1：上游 5′-GCGTGCTGCTTCTCCTCTGTGT-3′，下游 5′-CTGTTGGCCTGTGGGTTCA-3′；GPR54：上游 5′-GCGGCCCACAGATGTCACTTT-3′，下游 5′-AGGTGGGCAGCGGATAGAG-3′；GnRH：上游 5′-GGAGCTCTGGAACGTCTGATT-3′，下游 5′-CAGCGTCAATGTCACACTCG-3′；GnRHR： 上 游 5′-CAGGACCCACGCAAACTACA-3′，下游 5′-GGGAGTCCAGCAGATGACAA-3′；β-actin：上游 5′-TGACAGGATGCAGAAGGAGA-3′，下游 5′-TAGAGCCACCAATCCACACA-3′。PCR反應(yīng)條件：預(yù)變性95℃30 s，PCR 反應(yīng) 95℃ 5 s，60℃ 30 s，94℃變性 6 min，55℃退火，72℃延伸，共55個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，用2-△△Ct公式計(jì)算目的基因。

1.2.6 Western blot 檢測(cè) KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR蛋白表達(dá) 取另一半下丘腦，RIPA裂解，離心取上清，離心機(jī)半徑8 cm，BCA檢測(cè)蛋白濃度，加上樣緩沖液，沸水浴5 min變性，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，電轉(zhuǎn)PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2 h。加兔抗大鼠 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR、β-actin 一抗（稀釋1∶1 000），4℃過(guò)夜孵育，次日加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（稀釋1∶2 000）室溫孵育2 h，ECL發(fā)光顯色，用Gel-pro Application軟件分析目的條帶灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較進(jìn)行單因素方差分析，兩兩比較進(jìn)行LSD-t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間 與正常組比較，模型組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間較短（P＜0.05）；與模型組比較，知低組、知高組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間較長(zhǎng)（P＜0.05）；與知低組比較，知高組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間較長(zhǎng)（P＜0.05）；與知高組比較，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間較長(zhǎng)（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間（±s）Tab.1 Vulva opening time and first estrus interval time of rats（±s）

表1 大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間（±s）Tab.1 Vulva opening time and first estrus interval time of rats（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與知低組比較，▲P＜0.05；與知高組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 陰門開(kāi)啟時(shí)間（d） 首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間（d）正常組 10 32.01±2.89 42.65±2.57模型組 10 23.48±0.21* 33.28±1.49*知低組 10 25.49±0.74*# 35.96±1.15*#知高組 10 27.63±0.67*#▲ 38.11±1.28*#▲陽(yáng)性對(duì)照組 10 29.82±1.45*#▲△ 40.12±1.16*#▲△

2.2 大鼠子宮、卵巢指數(shù) 與正常組比較，模型組大鼠子宮、卵巢指數(shù)較高（P＜0.05）；與模型組比較，知低組、知高組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠子宮、卵巢指數(shù)較低（P＜0.05）；與知低組比較，知高組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠子宮、卵巢指數(shù)較低（P＜0.05）；與知高組比較，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠子宮、卵巢指數(shù)較低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 大鼠子宮、卵巢指數(shù)（±s）Tab.2 Uterus and ovarian indexes of rats（±s）

表2 大鼠子宮、卵巢指數(shù)（±s）Tab.2 Uterus and ovarian indexes of rats（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與知低組比較，▲P＜0.05；與知高組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 子宮指數(shù)（×10-4） 卵巢指數(shù)（×10-4）正常組 10 2.11±0.16 2.13±0.36模型組 10 7.46±0.87* 4.17±0.11*知低組 10 5.30±0.42*# 3.49±0.13*#知高組 10 4.13±0.35*#▲ 2.98±0.14*#▲陽(yáng)性對(duì)照組 10 3.24±0.22*#▲△ 2.41±0.12*#▲△

2.3 大鼠卵巢形態(tài)學(xué)及黃體數(shù)量 正常組大鼠卵巢形態(tài)正常。與正常組比較，模型組大鼠卵巢明顯增大。與模型組比較，知低組、知高組、陽(yáng)性對(duì)照組卵巢形態(tài)改善，見(jiàn)圖1。在黃體數(shù)量上，模型組、知低組、知高組、陽(yáng)性對(duì)照組、正常組逐漸減少（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

圖1 大鼠卵巢形態(tài)病理學(xué)圖（HE染色，×100）Fig.1 Morphological and pathological map of the ovary of rats(HE staining,×100)

表3 大鼠卵巢黃體數(shù)量（±s）Tab.3 Number of the ovarian corpus luteum of rats（±s）

表3 大鼠卵巢黃體數(shù)量（±s）Tab.3 Number of the ovarian corpus luteum of rats（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與知低組比較，▲P＜0.05；與知高組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) 黃體數(shù)量（個(gè)）正常組 10 0模型組 10 4.48±0.25*知低組 10 2.97±0.19*#知高組 10 2.05±0.12*#▲陽(yáng)性對(duì)照組 10 0.86±0.21*#▲△

2.4 大鼠血清性激素水平 與正常組比較，模型組大鼠血清 FSH、LH、E2 水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，知低組、知高組、陽(yáng)性對(duì)照組血清FSH、LH、E2水平降低（P＜0.05）；與知低組比較，知高組、陽(yáng)性對(duì)照組血清 FSH、LH、E2 水平降低（P＜0.05）；與知高組比較，陽(yáng)性對(duì)照組血清FSH、LH、E2水平降低（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 大鼠血清性激素水平（±s）Tab.4 Serum sex hormone levels of rats（±s）

表4 大鼠血清性激素水平（±s）Tab.4 Serum sex hormone levels of rats（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與知低組比較，▲P＜0.05；與知高組比較，△P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) FSH（ng/mL） LH（mg/mL） E2（pg/mL）正常組 10 34.49±1.25 2.05±0.11 16.52±0.68模型組 10 55.67±2.92* 8.66±0.34* 34.85±2.15*知低組 10 43.18±1.75*# 6.21±0.25*# 29.42±1.75*#知高組 10 40.35±1.58*#▲ 5.23±0.18*#▲ 24.13±1.58*#▲陽(yáng)性對(duì)照組 10 37.46±0.94*#▲△ 3.97±0.12*#▲△ 20.10±1.27*#▲△

2.5 大鼠下丘腦 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA表達(dá) 與正常組比較，模型組大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA 表達(dá) 上 調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，知低組、知高組 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA 表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；與知低組比較，知高組 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA 表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA表達(dá)（±s）Tab.5KISS-1,GPR54,GnRH,GnRHR mRNA expression in hypothalamus of rats（±s）

表5 大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA表達(dá)（±s）Tab.5KISS-1,GPR54,GnRH,GnRHR mRNA expression in hypothalamus of rats（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與知低組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) KISS-1 GPR54 GnRH GnRHR正常組 10 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00模型組 10 1.98±0.21* 1.75±0.24* 1.79±0.13* 1.45±0.11*知低組 10 1.56±0.12*#1.42±0.16*#1.63±0.15*#1.33±0.11*#知高組 10 1.21±0.15*#▲ 1.14±0.11*#▲ 1.34±0.13*#▲ 1.10±0.12*#▲

2.6 大鼠下丘腦 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR蛋白表達(dá) 與正常組比較，模型組大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR 蛋白表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；與模型組比較，知低組、知高組KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR 蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；與知低組比較，知高組 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。見(jiàn)表6和圖2。

表6 大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR蛋白表達(dá)（±s）Tab.6KISS-1,GPR54,GnRH,GnRHR protein expression in hypothalamus of rats（±s）

表6 大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR蛋白表達(dá)（±s）Tab.6KISS-1,GPR54,GnRH,GnRHR protein expression in hypothalamus of rats（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與知低組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù) KISS-1 GPR54 GnRH GnRHR正常組 10 0.42±0.04 0.22±0.01 0.39±0.03 0.28±0.02模型組 10 1.23±0.09* 1.04±0.09* 1.25±0.08* 0.99±0.07*知低組 10 1.02±0.06*#0.84±0.03*#0.72±0.06*#0.66±0.05*#知高組 10 0.65±0.07*#▲ 0.63±0.05*#▲ 0.58±0.05*#▲ 0.47±0.04*#▲

圖2 大鼠下丘腦KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR蛋白電泳圖Fig.2 KISS-1,GPR54,GnRH,GnRHR protein electrophoresis diagram in hypothalamus of rats

3 討論

性早熟為兒童生長(zhǎng)發(fā)育期間因HPGA軸功能提前啟動(dòng)、功能亢進(jìn)而發(fā)生的發(fā)育障礙性疾病。中醫(yī)學(xué)者對(duì)性早熟進(jìn)行了大量研究，認(rèn)為其病機(jī)為相火偏旺、陰陽(yáng)失調(diào)，病位在沖任，源在肝腎，是因腎陰不足，無(wú)法制陽(yáng)，致陰虛火旺，相火妄動(dòng)，則天葵早至，生長(zhǎng)發(fā)育加速[8]。中醫(yī)學(xué)中腎之推動(dòng)作用類似現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中HPGA刺激生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)制。知母味苦甘，性寒，歸肺、胃、腎三經(jīng)，為清熱瀉火、滋陰潤(rùn)燥之要藥，可瀉肝火而滋腎，宜用于性早熟治療中。知母總皂苷為知母主要藥效成分，故以其為實(shí)驗(yàn)用藥，分析其對(duì)性早熟大鼠模型的作用及可能機(jī)制，為性早熟相關(guān)中藥研發(fā)提供借鑒。

陰門開(kāi)啟是雌性性發(fā)育啟動(dòng)的外在標(biāo)志，也是判斷青春期啟動(dòng)的標(biāo)準(zhǔn)[9]。結(jié)果顯示：知低組、知高組大鼠陰門開(kāi)啟時(shí)間與首個(gè)動(dòng)情間期時(shí)間長(zhǎng)于模型組，提示知母總皂苷可延緩大鼠性發(fā)育進(jìn)程。性早熟主要病理表現(xiàn)為內(nèi)生殖器官增大，第二性征提前出現(xiàn)，故子宮、卵巢指數(shù)可反應(yīng)大鼠性早熟程度：知低組、知高組大鼠子宮、卵巢指數(shù)低于模型組，提示知母總皂苷可緩解大鼠性器官發(fā)育過(guò)度；結(jié)合大鼠卵巢HE染色結(jié)果可知，知母總皂苷不僅能改善大鼠卵巢形態(tài)，還可減少黃體生成數(shù)量，進(jìn)一步提示其可控制性早熟發(fā)展程度。FSH、LH由垂體前葉合成，對(duì)青春期發(fā)育、性腺、生殖能力有重要影響，分泌過(guò)早可導(dǎo)致性腺過(guò)早激活[10]。E2由卵巢分泌，其受體分布于乳房、卵巢等部位，對(duì)性器官成熟有促進(jìn)作用[11]。下丘腦分泌GnRH，從而刺激垂體前葉釋放FSH、LH，并作用于性腺（卵巢），分泌雌激素E2，形成HPGA軸[12]。子宮、卵巢均為促性腺激素的器官，F(xiàn)SH、LH分泌增加，結(jié)合性腺受體，可增加雌性子宮、卵巢體積。結(jié)果顯示：知低組、知高組大鼠血清FSH、LH、E2水平低于模型組，提示知母總皂苷可降低FSH、LH水平，從而減少E2分泌，進(jìn)而改善子宮、卵巢病理。Hu等[13]報(bào)道促性腺激素釋放激素類似物如曲普瑞林等可通過(guò)抑制FSH、LH，抑制第二性行為發(fā)展。本研究結(jié)果提示知母總皂苷在調(diào)節(jié)性早熟大鼠性激素水平方面的效果僅次于促性腺激素釋放激素類似物，而與Hu等研究結(jié)果不同之處在于本研究證實(shí)高劑量知母總皂苷治療性早熟的效果更佳。

迄今關(guān)于性早熟的確切病因、分子機(jī)制尚未闡明。Xu等[14]報(bào)道KISS-1/GPR54基因與生殖系統(tǒng)發(fā)育密切相關(guān)，故KISS-1/GPR54基因?yàn)樾栽缡煅芯康淖罴押蜻x基因，對(duì)HPGA軸啟動(dòng)十分重要。KISS-1是由54個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的多肽，其編碼產(chǎn)物轉(zhuǎn)移抑制素與其受體結(jié)合種植于胎盤，在調(diào)控胎盤發(fā)育和HPGA軸上發(fā)揮著重要作用[15]。GPR54是一個(gè)膜結(jié)合蛋白受體家族，轉(zhuǎn)移抑制素為其天然配體，主要存在于下丘腦、中腦等中樞神經(jīng)系統(tǒng)，若其功能突變或缺失可導(dǎo)致性腺發(fā)育不全、機(jī)能減退[16]。性早熟大鼠血清性激素濃度與GnRH密切相關(guān)，而GnRH、GnRHR的合成與釋放受KISS-1/GPR54基因影響，羅小娟等[17]證明雌性大鼠性早熟發(fā)生機(jī)制中涉及中樞性關(guān)鍵基因KISS-1/GPR54 mRNA提前表達(dá)，激活了下丘腦神經(jīng)元細(xì)胞合成GnRH，從而啟動(dòng)HPGA軸，導(dǎo)致性發(fā)育提前。結(jié)果提示：模型組、知低組、知高組、正常組，大鼠 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR mRNA與蛋白均逐漸下調(diào)，提示知母總皂苷可能通過(guò)抑制 KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR 蛋白表達(dá)，抑制HPGA軸發(fā)揮性早熟治療作用。

綜上所述，知母總皂苷可降低性早熟大鼠性激素水平，可能對(duì)HPGA軸有抑制作用。