段亞彤，王燕，郝爽，王艷

（遼寧省疾病預(yù)防控制中心免疫規(guī)劃所，沈陽(yáng) 110005）

麻疹是由麻疹病毒引起的常見(jiàn)的兒童急性呼吸道傳染病，具有很強(qiáng)的傳染性，容易在人口密集且未普種疫苗的地區(qū)流行。隨著公共衛(wèi)生事業(yè)的進(jìn)步及宣傳力度的加大，人們對(duì)麻疹的危害有了深刻認(rèn)識(shí)。2006年至2012年中國(guó)消除麻疹行動(dòng)計(jì)劃［1］指出提高疫苗免疫覆蓋率與進(jìn)行麻疹流行病學(xué)監(jiān)測(cè)的同時(shí)，也要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)。2000年，WHO全球麻疹和風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)（WHO Global Measlesand Rubella Laboratory Network，GMRLN）正式成立，為監(jiān)測(cè)工作提供高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)室支持［2］。遼寧省麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)于2001年建立，包括1個(gè)省級(jí)及14個(gè)市級(jí)疾病預(yù)防控制中心麻疹實(shí)驗(yàn)室，每年接受WHO及省級(jí)實(shí)驗(yàn)室考核。本研究分析了2015年至2019年遼寧省麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)運(yùn)轉(zhuǎn)情況及監(jiān)測(cè)效果，旨在為做好麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測(cè)工作，結(jié)合流行病學(xué)有效控制麻疹提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

麻疹疑似病例血清標(biāo)本、尿液及咽試子標(biāo)本均由縣（區(qū)）級(jí)采集，血清標(biāo)本由市級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。遼寧省2015年至2019年麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)來(lái)自遼寧省疾病預(yù)防控制中心麻疹專報(bào)系統(tǒng)。病毒分離標(biāo)本由省級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，尿液及咽試子標(biāo)本均由市級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室提供。麻疹和風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自德國(guó)維潤(rùn)（塞潤(rùn)）試劑研發(fā)公司，檢測(cè)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 疑似病例血清IgM抗體檢測(cè)：采集遼寧省2015年至2019年疑似麻疹病例血標(biāo)本，分離血清。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linleed immunosorbent assay，ELISA）分別對(duì)麻疹I(lǐng)gM和風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)，麻疹和風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體檢測(cè)方法和步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，測(cè)定結(jié)果以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。判定標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)樣本光密度（optical density，OD）值Cut-off上限為陽(yáng)性（+），檢測(cè)樣本OD值＜Cut-off 下限為陰性（-），檢測(cè)樣本OD值Cut-off下限～Cut-off上限為可疑（±），在7～10 d后采第二份血復(fù)測(cè)。

1.2.2 病毒分離和基因分型：省級(jí)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)疑似麻疹病例標(biāo)本病毒分離工作，采集疑似麻疹病例尿液和咽拭子標(biāo)本，利用Vero-Slam細(xì)胞，對(duì)市級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行病毒分離。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR）和核酸測(cè)序?qū)Ψ蛛x物進(jìn)行病毒基因序列測(cè)定及基因分型。

1.2.3 麻疹I(lǐng)gG抗體水平監(jiān)測(cè)：省級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)根據(jù)麻疹發(fā)病趨勢(shì)，在常規(guī)免疫規(guī)劃工作薄弱和流動(dòng)人口聚集的地區(qū)開(kāi)展健康人群免疫水平調(diào)查。按照預(yù)防接種工作規(guī)范及監(jiān)測(cè)工作計(jì)劃，2015年在遼陽(yáng)市、盤(pán)錦市開(kāi)展健康人群麻疹抗體水平監(jiān)測(cè)，年齡分組為＜1歲、1～2歲、3～4歲、5～6歲、7～14歲、15～19歲、≥20歲，每組采集血樣≥30份，每份血清≥1 mL。采用ELISA檢測(cè)血標(biāo)本麻疹I(lǐng)gG抗體，檢測(cè)試劑由德國(guó)維潤(rùn)（塞潤(rùn)）試劑研發(fā)公司提供，檢測(cè)結(jié)果的判定以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。判定標(biāo)準(zhǔn)：檢測(cè)樣本OD值≥Cut-off上限為陽(yáng)性（+），檢測(cè)樣本OD 值＜Cut-off下限為陰性（-）。

1.2.4 實(shí)驗(yàn)室考核及質(zhì)量控制：國(guó)家麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)由國(guó)家、省、市三級(jí)疾病預(yù)防控制中心麻疹實(shí)驗(yàn)室組成，國(guó)家實(shí)驗(yàn)室每年對(duì)省級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行考核及質(zhì)量評(píng)估，麻疹、風(fēng)疹盲樣考核標(biāo)本量為20份，由WHO提供；省級(jí)實(shí)驗(yàn)室每年對(duì)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行考核及質(zhì)量評(píng)估，麻疹、風(fēng)疹盲樣考核標(biāo)本量為10份。省級(jí)對(duì)市級(jí)實(shí)驗(yàn)室采集的麻疹、風(fēng)疹疑似病例標(biāo)本進(jìn)行麻疹、風(fēng)疹血清IgM抗體復(fù)核。通過(guò)即刻法結(jié)合質(zhì)控圖進(jìn)行內(nèi)部質(zhì)量控制，檢測(cè)標(biāo)本正確率為100%，并且在規(guī)定時(shí)間內(nèi)反饋結(jié)果為合格。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用 Excel 2010 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，應(yīng)用 SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清IgM監(jiān)測(cè)結(jié)果

2015年至2019年遼寧省14個(gè)市共報(bào)告麻疹疑似病例5 774例，采集血標(biāo)本5 395份，采集率為93.44%；共檢測(cè)血標(biāo)本5 345份，麻疹I(lǐng)gM陽(yáng)性365份，陽(yáng)性率為6.83%，風(fēng)疹I(lǐng)gM陽(yáng)性670份，陽(yáng)性率為12.54%，見(jiàn)表1。

表1 2015年至2019年遼寧省麻疹、風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室血清監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.2 病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2015年至2019年全省5 774例麻疹疑似病例中，采集病原學(xué)標(biāo)本1 589份，采集率為27.52%，分離到麻疹病毒226份，麻疹病毒檢出率為14.22%；省級(jí)實(shí)驗(yàn)室每年對(duì)分離到的麻疹病毒進(jìn)行基因測(cè)序，2015年至2019年麻疹病毒基因型鑒定共90株，其中H1a基因型87株，占96.67%，其他基因型3株，占3.33%。2015年基因測(cè)序24株，基因型均為H1a；2016年測(cè)序4株，基因型均為H1a；2018年測(cè)序7株，基因型為4株H1a、1株D8、2株A；2019年測(cè)序55株，基因型均為H1a，見(jiàn)表2。

表2 麻疹、風(fēng)疹實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果

2.3 麻疹I(lǐng)gG抗體水平監(jiān)測(cè)結(jié)果

遼陽(yáng)和盤(pán)錦兩市共檢測(cè)標(biāo)本430份，陽(yáng)性標(biāo)本385份，陽(yáng)性率為89.53%。其中遼陽(yáng)市檢測(cè)標(biāo)本210份，陽(yáng)性標(biāo)本188份，陽(yáng)性率為89.52%；盤(pán)錦市檢測(cè)標(biāo)本220份，陽(yáng)性標(biāo)本197份，陽(yáng)性率為89.55%。

1～2歲組抗體陽(yáng)性率最高，為96.67%，其次是3～4歲組、＜1歲組，陽(yáng)性率分別為95%、90%。按學(xué)齡前后年齡組進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.253，P＜0.05）見(jiàn)表3、4。

表3 遼寧省健康人群麻疹抗體監(jiān)測(cè)

表4 遼寧省健康人群學(xué)齡前后麻疹抗體比較

2.4 實(shí)驗(yàn)室考核及質(zhì)量控制

2015年至2019年遼寧省疾病預(yù)防控制中心麻疹實(shí)驗(yàn)室每年接受?chē)?guó)家麻疹實(shí)驗(yàn)室組織的麻疹、風(fēng)疹血清盲樣標(biāo)本職能考核，結(jié)果符合率均為100%；遼寧省14個(gè)市級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室每年接受省級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室盲樣標(biāo)本職能考核，結(jié)果符合率均為100%；2015年至2019年省級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室對(duì)市級(jí)麻疹實(shí)驗(yàn)室共抽樣復(fù)檢血清672份，其中 2015年至2017年每年抽樣復(fù)檢120份、2018年抽樣復(fù)檢125份、2019年抽樣復(fù)檢187份，結(jié)果符合率均為100%。

3 討論

WHO西太平洋地區(qū)確定消除麻疹目標(biāo)以來(lái)，我國(guó)將消除麻疹作為擴(kuò)大國(guó)家免疫規(guī)劃的一項(xiàng)重要內(nèi)容，WHO監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示，2020年1月至4月全球仍有166個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)告麻疹病例［3］。本研究結(jié)果證實(shí)我省仍有麻疹病例發(fā)生，麻疹病毒基因型以H1基因型的 H1a基因亞型為主，這與H1a在國(guó)內(nèi)外廣泛分布且逐漸成為優(yōu)勢(shì)亞型的流行病學(xué)特征一致［4-7］。

健康人群抗體陽(yáng)性率1～2歲組最高，分析可能與麻疹類疫苗接種的免疫程序有關(guān)，麻疹類疫苗8月齡接種第1劑次，18月齡接種第2劑次，接種疫苗后抗體水平增高，說(shuō)明疫苗免疫效果良好，0～1歲年齡組抗體陽(yáng)性率維持較高水平可能與接種第一劑次的麻疹類疫苗及母?jìng)骺贵w有關(guān)。本研究結(jié)果顯示學(xué)齡后人群抗體陽(yáng)性率低于學(xué)齡前人群，說(shuō)明麻疹抗體隨著年齡增長(zhǎng)會(huì)下降，但也可能有部分人群恢復(fù)到之前水平。我國(guó)＜8月齡的嬰兒是麻疹發(fā)病的主要人群，鑒于現(xiàn)有免疫策略是對(duì)8月齡兒童開(kāi)始首劑次含麻疹成分疫苗的接種，因此，降低＜8月齡兒童麻疹發(fā)病只能通過(guò)減少傳染源，提高含麻疹成份疫苗接種覆蓋率和提高母?jìng)骺贵w的方式進(jìn)行防控［8-9］。有研究［10］表明，人群中95%具備麻疹免疫力才可有效阻斷麻疹傳播，通過(guò)提高疫苗接種率維持高水平人群免疫力是實(shí)現(xiàn)消除麻疹的基礎(chǔ)，也可降低發(fā)生大范圍暴發(fā)或流行的風(fēng)險(xiǎn)，所以全人群高質(zhì)量麻疹疫苗接種是消除麻疹的重要策略。研究［11-12］顯示，根據(jù)各地區(qū)的麻疹發(fā)病趨勢(shì)，定期開(kāi)展健康人群抗體水平調(diào)查，針對(duì)重點(diǎn)年齡組和薄弱地區(qū)適時(shí)開(kāi)展含麻疹成分疫苗補(bǔ)充免疫可減少易感人群。

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室管理的重要組成。質(zhì)量控制體系健全的病原微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果可靠、特異性和靈敏性高，能及時(shí)診斷傳染病疫情，對(duì)預(yù)防和及時(shí)控制相關(guān)病原微生物引起的傳播和疫情暴發(fā)起重要作用［13］。我省通過(guò)開(kāi)展麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)質(zhì)量控制，判斷常規(guī)監(jiān)測(cè)工作符合率及準(zhǔn)確性，保證了實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量及檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，同時(shí)定期開(kāi)展了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制，保證不同時(shí)間和地點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果具有可比性。本研究結(jié)果顯示，我省麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)運(yùn)轉(zhuǎn)良好，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量維持較高水平。

綜上所述，Hla基因型為2015年至2019年遼寧省麻疹的優(yōu)勢(shì)基因型。遼寧省麻疹實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)運(yùn)轉(zhuǎn)良好，建立了高質(zhì)量的疑似病例血清學(xué)監(jiān)測(cè)、病毒分離及實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)質(zhì)量控制體系，為結(jié)合流行病學(xué)有效控制麻疹提供了科學(xué)依據(jù)。目前，麻疹監(jiān)測(cè)工作已經(jīng)進(jìn)入以個(gè)案為基礎(chǔ)、流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)相結(jié)合的監(jiān)測(cè)階段，血清學(xué)監(jiān)測(cè)和病毒學(xué)監(jiān)測(cè)是麻疹實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)的重要組成部分，不僅要保持監(jiān)測(cè)系統(tǒng)高質(zhì)量運(yùn)轉(zhuǎn)狀況和高靈敏性，同時(shí)也要保證實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)質(zhì)量，最終消除麻疹有賴于麻疹實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)質(zhì)量的不斷提高［14-15］。