亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        牦牛UCP1基因生物學(xué)特性及組織表達(dá)分析

        2022-01-17 08:23:50華永琳岳永起熊顯榮字向東
        關(guān)鍵詞:金川偶聯(lián)牦牛

        趙 丹,熊 燕,華永琳,岳永起,郭 玉,熊顯榮,字向東,殷 實(shí),李 鍵

        (1.西南民族大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,四川 成都 610041;2.西南民族大學(xué)青藏高原動物遺傳資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都 610041;3西南民族大學(xué)青藏高原動物遺傳資源保護(hù)與利用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,四川 成都 610041)

        青藏高原(Qinghai-Tibet Plateau)被稱為“世界屋脊”和地球“第三極”,氧分壓很低,年平均氣溫常處于0 ℃以下,七八月的平均氣溫也不足10 ℃,這種極端環(huán)境成為高原動物面臨的主要生存挑戰(zhàn)[1].牦牛(Bosgrunniens)作為該區(qū)域特有畜種及遺傳資源,可適應(yīng)低溫、低氧、強(qiáng)輻射、晝夜溫差大的嚴(yán)酷環(huán)境[2],造就了牦牛耐低氧耐寒的生理特性[3].但是目前關(guān)于牦牛耐低氧耐寒的分子遺傳機(jī)制尚不完全清楚.

        解偶聯(lián)蛋白(Uncoupling proteins, UCPs)屬于線粒體負(fù)離子載體家族成員,位于線粒體內(nèi)膜.UCPs幾乎在所有的真核細(xì)胞中被確認(rèn),包括哺乳動物、鳥類、爬行動物、魚類、昆蟲、植物、真菌等[4-5].已知的解偶聯(lián)蛋白家族成員包括UCP1、UCP2、UCP3、UCP4和UCP5,其具有不同的組織分布以及功能特征.其中,UCP2組織分布廣泛,在不同的組織中有不同的作用,例如在肝以及棕色脂肪組織中主要調(diào)節(jié)產(chǎn)熱和能量代謝,在腦組織中會減少自由基的產(chǎn)生,與氧化應(yīng)激對腦細(xì)胞損傷作用有關(guān)[6].UCP4和UCP5主要在動物的腦部高表達(dá),在其它組織中也有分布,具有調(diào)節(jié)能量代謝、保護(hù)神經(jīng)以及調(diào)節(jié)體溫的作用[7].在牦牛中,UCP3主要分布在骨骼肌中,并在胸肌和腿肌中高表達(dá),與能量代謝有關(guān)[8-9].UCP1是產(chǎn)熱脂肪細(xì)胞的標(biāo)志基因,大多位于棕色脂肪以及白色脂肪中,參與維持機(jī)體體溫的恒定[10].牦牛具有極強(qiáng)的抗寒適應(yīng)性,UCP1是否參與牦牛體溫調(diào)節(jié)尚不清楚.

        研究顯示UCP1通過解偶聯(lián)作用進(jìn)行產(chǎn)熱,維持動物體溫的恒定、調(diào)節(jié)體重以及能量平衡[11-12].當(dāng)動物遭受寒冷刺激時,解除了正常生理狀態(tài)下UCP1與嘌呤核苷酸的結(jié)合,使UCP1質(zhì)子通道打開,導(dǎo)致氧化磷酸化解偶聯(lián)而產(chǎn)熱[13].然而在缺乏UCP1的情況下,機(jī)體會通過肌酸循環(huán)的機(jī)制,維持體溫的穩(wěn)定[14].最近的證據(jù)表明,線粒體解偶聯(lián)的誘導(dǎo)不僅影響線粒體呼吸,會誘導(dǎo)線粒體解偶聯(lián)導(dǎo)致氧化磷酸化減少[15],而且會調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)過程,包括自噬、活性氧產(chǎn)生、蛋白質(zhì)的分泌等[16-17].在家畜研究中,牛UCP1基因的多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)(C+G)%的含量高低與動物適應(yīng)環(huán)境溫度成正比,證明了UCP1與??购源嬖陉P(guān)聯(lián)[18].在敲除小鼠UCP1基因時,小鼠不能在棕色脂肪中產(chǎn)生熱量,推測非顫栗性產(chǎn)熱依賴于UCP1蛋白的功能[19-20].以上研究推測UCP1基因與動物的抗寒適應(yīng)性密切相關(guān).目前UCP1基因的功能研究主要集中在人及小鼠等模式動物,而牦牛UCP1基因序列未知,并且其是否參與牦牛的高原適應(yīng)性尚不清楚.

        因此,本實(shí)驗(yàn)以牦牛皮下脂肪cDNA為模板,克隆獲得牦牛UCP1基因序列,并利用生物信息學(xué)分析方法對UCP1蛋白的理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及物種間的同源性進(jìn)行了詳細(xì)的分析,利用qPCR方法檢測了UCP1在牦牛各個組織中的表達(dá)差異,豐富了牦牛UCP1基因的功能研究數(shù)據(jù),并為進(jìn)一步研究牦牛UCP1功能提供參考依據(jù).

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)動物

        由四川省阿壩羌族藏族自治州金川縣慶林鄉(xiāng)牦牛養(yǎng)殖場提供的4~5歲金川公牦牛和4~5歲麥洼公牦牛各3頭為實(shí)驗(yàn)動物.將牦牛清晨空腹屠宰后,用無菌剪刀分別取其心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮下脂肪組織,快速置于液氮中,運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,立即置于-80 ℃保存?zhèn)溆茫?/p>

        1.2 主要試劑及儀器

        Trizol、qPCR試劑盒、DL 5000 DNA Marker、氨芐青霉素、及LA Taq酶均購自TaKaRa公司.瓊脂糖、酵母提取物、胰蛋白胨均購自Biowest公司.膠回收及質(zhì)粒提取試劑盒、pGM-T載體與大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞全部購自成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司.PCR儀(C1000)以及電泳儀均購自Bio-Rad公司.

        1.3 方法

        1.3.1 引物的設(shè)計及合成

        根據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫GenBank中牦牛UCP1的預(yù)測序列(GenBank注冊號:XM_005895812)以及牦牛內(nèi)參基因PPIA的序列(GenBank注冊號:NM_178320),利用Primer premier 5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計,然后送成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司合成,引物序列信息如表1所示.

        表1 引物信息

        1.3.2 RNA提取及cDNA合成

        經(jīng)典Trizol法提取牦牛心、肝、脾、肺、腎、肌肉和皮下脂肪等組織的總RNA,利用微量核酸濃度分析儀(Nanodrop ND-1000美國)測定RNA濃度和純度,其中將OD260/OD280比值在1.8~2.0的樣品按照TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA,置于-20 ℃保存?zhèn)溆茫?/p>

        1.3.3 PCR擴(kuò)增和目的片段膠回收

        PCR反應(yīng)體系為15 μL:PCR Mix 7.5 μL,上、下游引物各0.5 μL,cDNA1 μL,ddH2O5.5 μL.反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃5 min,94 ℃30 s,61 ℃40 s,72 ℃1 min,設(shè)置35個循環(huán),72 ℃延伸5 min,4 ℃保存.

        配制1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,將長度符合的目的片段切下裝入新的EP管中稱量,參照膠回收試劑盒說明書進(jìn)行膠回收.

        1.3.4UCP1基因T載體構(gòu)建及測序

        將純化后的產(chǎn)物與pGM-T載體連接并置于16 ℃過夜,后將10 μL連接產(chǎn)物加入100 μL DH5α感受態(tài)細(xì)胞,轉(zhuǎn)化后加入300 μL LB液體培養(yǎng)基震蕩搖勻后培養(yǎng)45 min,使得菌體復(fù)蘇.將復(fù)蘇后的菌液涂布于含0.1 mg/mL氨芐的LB固體培養(yǎng)基表面,37 ℃培養(yǎng)12~16 h.在長出菌落的固體培養(yǎng)基中挑3個單克隆分別加入到3個裝有含氨芐的液體培養(yǎng)基的離心管中37 ℃、200 rmp、搖4~6 h.進(jìn)行菌液PCR,反應(yīng)體系及反應(yīng)程序同1.3.3.用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,若得到目的條帶,將陽性克隆送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司進(jìn)行雙向測序,得到UCP1基因的序列.

        1.3.5 熒光定量PCR

        試驗(yàn)以PPIA為內(nèi)參基因,qRT-PCR的反應(yīng)體系:7.5 μLSYBR?Premix Ex Taq酶、上下游引物各0.5 μL(10 μM)、3.5 μL ddH2O、最后加入3 μLcDNA(20 ng/μL).反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 4 min;(95 ℃ 10 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 45 s)40個循環(huán);72 ℃延伸5 min,檢測UCP1基因在牦牛各個組織中的表達(dá)情況.

        1.4 生物信息學(xué)分析

        先在NCBI的ORF Finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)尋找開放閱讀框,獲得氨基酸序列;ProtParam(https://web.expasy.org/protparam/)在線分析牦牛UCP1基因的理化性質(zhì);Prot Scale(https://web.expasy.org/protscale/)在線進(jìn)行親疏水預(yù)測;TMpred(https://embnet.vital-it.ch/software/TMPRED_form.html)在線對跨膜結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測;NetPhos 3.1 Server(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/)在線進(jìn)行磷酸化位點(diǎn)分析;SPOMA(https://npsaprabi.ibcp.fr/cgibin/npsa_automat.pl?page=/NPSA/npsa_sopma.html)在線進(jìn)行蛋白二級結(jié)構(gòu)預(yù)測;SWISS-MODEL(https://swissmodel.expasy.org/interactive)在線進(jìn)行蛋白三級結(jié)構(gòu)預(yù)測;NCBI在線BLAST進(jìn)行序列比對;最后利用MEGA 5.05軟件進(jìn)行進(jìn)化樹的構(gòu)建.

        1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

        熒光定量PCR數(shù)據(jù)利用2-ΔΔCt法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,結(jié)果采用GraphPad Prism 8分析軟件中的 ANOVA 程序進(jìn)行單因素方差分析以及多重比較.

        2 結(jié)果與分析

        2.1 牦牛UCP1基因序列分析

        本實(shí)驗(yàn)以牦牛皮下脂肪CDNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得UCP1基因目的條帶為954 bp(圖1A).將菌液送往公司測序,利用NCBI ORF Finder 在線獲得UCP1序列的開放閱讀框,得到UCP1基因ORF全長為942 bp,編碼313個氨基酸,結(jié)果與預(yù)期實(shí)驗(yàn)相符(圖1B),并將所獲得的UCP1基因序列提交到NCBI數(shù)據(jù)庫,其GenBank登錄號為MW345537.

        圖1 牦牛UCP1基因克隆

        2.2 牦牛UCP1基因生物信息學(xué)分析

        2.2.1 蛋白理化性質(zhì)分析

        利用ProtParam在線分析UCP1的理化參數(shù),結(jié)果顯示UCP1蛋白的氨基酸數(shù)目為313個,相對分子質(zhì)量為33 952.48,理論pI值為8.94.由20種氨基酸組成,帶有25個負(fù)電荷殘基數(shù),18個正電荷殘基數(shù)(表2).UCP1蛋白的不穩(wěn)定系數(shù)為34.62.第62位的氨基酸的分值最高(2.311),疏水性最強(qiáng);309位的氨基酸分值最低(-3.033),親水性最強(qiáng).經(jīng)過計算得到總平均親水性系數(shù)為0.134,則推測該蛋白為不穩(wěn)定疏水性蛋白(圖2).

        表2 牦牛UCP1蛋白的氨基酸組成

        圖2 牦牛UCP1蛋白親疏水性分析

        2.2.2 蛋白跨膜結(jié)構(gòu)及磷酸化位點(diǎn)分析

        利用TMpred軟件在線分析發(fā)現(xiàn)UCP1蛋白在第14~32、115~135、214~231、271~291位氨基酸之間分別存在19、18、21、20個由膜內(nèi)向膜外跨膜的氨基酸,在第12~34、115~135、214~234、268~287位氨基酸之間分別存在23、21、21、20個由膜外向膜內(nèi)跨膜的氨基酸(圖3A).磷酸化位點(diǎn)預(yù)測,UCP1蛋白一共有31個蘇氨酸(Thr)磷酸化位點(diǎn)(第5、12、31、36、49、61、64、68、98、104、105、120、121、132、153、155、164、165、169、175、176、180、188、192、224、225、236、247、258、300、305位),20個絲氨酸(Ser)磷酸化位點(diǎn)(第7、19、50、51、76、87、90、110、113、116、143、216、228、229、241、242、248、263、272、278位),9個酪氨酸(Tyr)磷酸化位點(diǎn)(第55、75、96、152、156、159、193、246、307位).結(jié)果見圖3B.

        圖3 UCP1蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)域以及磷酸化位點(diǎn)分析Fig.3 Transmembrane domain and phosphorylation site analysis of UCP1 protein

        2.2.3 蛋白結(jié)構(gòu)與功能預(yù)測

        根據(jù)SOPMA進(jìn)行預(yù)測,牦牛UCP1蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要由46.33%的α螺旋(Hh)、32.59%的無規(guī)卷曲(Cc)組成和15.34%延伸鏈(Ee)組成,而β轉(zhuǎn)角(Tt)僅占5.75%(圖4A,4B).UCP1蛋白的三級結(jié)構(gòu)預(yù)測結(jié)果與二級結(jié)構(gòu)預(yù)測一致,由無規(guī)則卷曲、α螺旋和延伸鏈三者交替出現(xiàn),并且預(yù)測得到線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)寡聚狀態(tài)為單體(圖4C).

        圖4 UCP1蛋白質(zhì)序列二級結(jié)構(gòu)及三級結(jié)構(gòu)預(yù)測A-B.藍(lán)色線表示α螺旋、紫色線表示無規(guī)則卷曲和紅色線表示延伸鏈.C.UCP1蛋白的三級結(jié)構(gòu)

        2.3 牦牛UCP1基因在不同物種之間的同源性對比

        利用在線BLAST對牦牛和其他物種的UCP1基因的核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行了比對(表3),發(fā)現(xiàn)牦牛與普通牛、山羊及綿羊的核苷酸序列和氨基酸序列相似度最高,與斑馬魚的核苷酸序列和氨基酸序列相似度較低,僅分別為62.58%和64.29%.基于UCP1基因序列利用MEGA 5.05對牦牛與其他物種進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建,結(jié)果與序列結(jié)果比對一致,牦牛與普通牛的親緣關(guān)系最近,其次是山羊和綿羊,與斑馬魚的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)(圖5).

        圖5 牦牛與其他物種的UCP1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹

        2.4 牦牛UCP1基因組織表達(dá)分析

        利用qRT-PCR方法檢測出了UCP1基因在牦牛不同組織中的相對mRNA的表達(dá)量.結(jié)果顯示,UCP1在牦牛各個組織中均有表達(dá)(圖6A),在腎中的表達(dá)量最高,并顯著高于其他組織(P<0.05),除腎之外其他組織之間沒有差異顯著性.由于金川牦牛與麥洼牦牛肌內(nèi)脂肪以及肉質(zhì)有一定程度的差異[21],于是我們進(jìn)一步研究了UCP1基因在金川牦牛和麥洼牦牛的肝、脂肪、半腱肌、背最長肌中的表達(dá)量(圖6B),發(fā)現(xiàn)UCP1基因在金川與麥洼牦牛的脂肪、半腱肌中沒有差異,在背最長肌中的表達(dá)量麥洼牦牛顯著高于金川牦牛(P<0.05),并且UCP1基因在麥洼牦牛肝中的表達(dá)量極顯著高于金川牦牛(P<0.0001).

        圖6 牦牛UCP1基因的組織表達(dá)分析

        3 討論

        UCP1屬于解偶聯(lián)蛋白家族成員,可以激活線粒體的解偶聯(lián)呼吸而產(chǎn)生熱量(非顫栗產(chǎn)熱),維持動物體溫的恒定[22].在模式動物中,關(guān)于UCP1基因的功能研究較為深入,但對于UCP1基因在牦牛上的研究目前尚未見報道.此次試驗(yàn)以牦牛皮下脂肪CDNA為模板,利用PCR克隆獲得UCP1基因的全長954 bp,ORF全長為942 bp,編碼313個氨基酸.生物信息學(xué)預(yù)測得到,牦牛UCP1蛋白為一種不穩(wěn)定疏水性蛋白,具有跨膜結(jié)構(gòu)域及多個磷酸化位點(diǎn).與前人研究結(jié)果一致,UCP1已經(jīng)證實(shí)有6個疏水區(qū)存在跨膜結(jié)構(gòu)[23].UCP1蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要由α螺旋,無規(guī)卷曲以及少數(shù)延伸鏈組成.同源比較發(fā)現(xiàn)牦牛UCP1基因與普通牛的同源性最高,雖與其他物種之間也有一定的同源性,但同源性較低,因此推測UCP1基因在不同物種間可能具有特異性.

        之前大多數(shù)研究UCP1基因主要集中在脂肪組織中表達(dá),最近的研究發(fā)現(xiàn)UCP1在小鼠的胸腺中也有表達(dá)[24].孫國權(quán)等研究發(fā)現(xiàn),UCP1基因在肉牛的睪丸、腎、肋間肉、心、胰、背膘、肩肉、肝、網(wǎng)脂、腸脂、脾、肺、背最長肌和淋巴等很多組織中均有表達(dá),但在背膘中的表達(dá)高于其他組織,并認(rèn)為UCP1與產(chǎn)熱和維持體溫有關(guān)[25].在綿羊研究中發(fā)現(xiàn)UCP1在腎周脂肪中的基因表達(dá)明顯高于其他組織,而淺表脂肪中的基因表達(dá)低于深層脂肪,在2月齡綿羊腎周圍脂肪組織中的mRNA表達(dá)量最高,然后隨著年齡的增加呈現(xiàn)下降趨勢[26].在本研究中我們發(fā)現(xiàn),UCP1基因在牦牛心、脾、肺、腎、脂肪、肝、背最長肌和半腱肌中均有表達(dá),在腎中的表達(dá)量最高,并且腎與其他組織之間差異顯著(P<0.05),這可能是由于UCP1參與腎小管上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激.研究報道UCP1位于腎臟的腎小管上皮細(xì)胞,在腎間質(zhì)纖維化過程中呈時間依賴性下調(diào).UCP1的缺失會增加小鼠腎臟的氧化應(yīng)激,UCP1過表達(dá)會減少缺氧處理的腎小管上皮細(xì)胞中線粒體活性氧(Reactive oxygen species, ROS)的產(chǎn)生和凋亡,并且小鼠腎臟中過氧化物酶體增殖物激活物受體PPARγ調(diào)節(jié)會影響UCP1的表達(dá)[27].因此推測這種表達(dá)模式可能是因?yàn)閁CP1參與腎的抗氧化功能,關(guān)于UCP1在牦牛腎臟中的具體功能還需進(jìn)一步的探究.

        目前在牦牛中已有UCP3被克隆[28],并有研究發(fā)現(xiàn)解偶聯(lián)蛋白家族中的UCP2和UCP3基因可作為家畜胴體生長與肉質(zhì)性狀的候選基因[29].在牛中,UCP1基因在骨骼肌中的表達(dá)顯著低于棕色脂肪組織,并且定位研究發(fā)現(xiàn)UCP1蛋白在骨骼肌中高表達(dá),但在骨骼肌中的肌內(nèi)脂肪細(xì)胞未檢測到[30].在綿羊的多態(tài)性檢測研究中發(fā)現(xiàn),UCP1基因內(nèi)含子5區(qū)和外顯子6區(qū)共有8個核苷酸突變,內(nèi)含子5區(qū)變異對綿羊的生長速度存在性別差異,同時對胴體性狀具有一定影響.含有等位基因C1的公羔群體較其他群體有更高的斷尾重,缺失等位基因A1的母羔群體具有更高的初生重[31].之前有研究表明金川牦牛肉肌肉剪切力低,肉質(zhì)相對于麥洼牦牛較細(xì)嫩,并且肌內(nèi)脂肪含量較高[32],因此我們比較研究了金川牦牛和麥洼牦牛肌肉中UCP1基因表達(dá)的差異,發(fā)現(xiàn)UCP1基因在麥洼牦牛背最長肌中的表達(dá)量顯著高于金川牦牛,推測UCP1基因的表達(dá)水平可能與牦牛肌內(nèi)脂肪沉積有關(guān).

        本研究發(fā)現(xiàn)UCP1基因在麥洼牦牛肝中的表達(dá)量極顯著高于金川牦牛(P<0.0001).之前有研究布氏田鼠在低溫馴化過程中,肝臟在細(xì)胞水平上的呼吸酶活性及蛋白質(zhì)合成等方面均被激活,表明寒冷環(huán)境會促使肝臟代謝活力提高[33].由于麥洼牦牛長期生活的環(huán)境與金川牦牛相比海拔較高,溫度相對更低,可以推測肝臟基因表達(dá)和代謝狀態(tài)與環(huán)境溫度有關(guān).在低溫環(huán)境中,為了滿足機(jī)體對ATP 的需求,同時通過產(chǎn)熱維持體溫恒定,肝臟呼吸速率顯著增強(qiáng)[34].研究表明脂肪酸激活UCP1解偶聯(lián)生熱,肝臟對脂肪酸的生成和代謝具有重要作用[35-36].在小鼠急性肝損傷后,UCP1蛋白表達(dá)減少、活化能力降低,導(dǎo)致棕色脂肪組織功能下降,機(jī)體產(chǎn)熱減少,從而影響代謝的穩(wěn)態(tài)[37].這進(jìn)一步說明UCP1基因表達(dá)與肝臟的代謝密不可分.

        本實(shí)驗(yàn)克隆了牦牛UCP1基因并分析其生物學(xué)特性,研究了UCP1基因在牦牛各個組織中的表達(dá),推測UCP1可能參與牦牛高原適應(yīng)性的調(diào)節(jié),但對于UCP1參與介導(dǎo)牦牛骨骼肌的能量代謝以及在冷刺激下調(diào)控肝臟代謝的作用還需進(jìn)一步的研究.

        4 結(jié)論

        本試驗(yàn)成功克隆出牦牛UCP1基因全長序列,全長為954 bp(GenBank No. MW345537),ORF全長為942 bp,共編碼313個氨基酸.生物學(xué)信息分析得到,UCP1蛋白為一種不穩(wěn)定疏水性蛋白.同源分析表明,牦牛UCP1基因與普通牛UCP1基因的同源性高.通過UCP1基因在牦牛不同組織的表達(dá)分析得到,UCP1在牦牛心、肝、脾等各個組織中均有表達(dá),在牦牛腎中的表達(dá)量顯著高于其他組織.并且UCP1基因在麥洼牦牛背最長肌以及肝中的表達(dá)量顯著高于金川牦牛.以上研究結(jié)果為UCP1蛋白在牦牛的功能研究奠定了基礎(chǔ).

        猜你喜歡
        金川偶聯(lián)牦牛
        論乾隆朝金川之戰(zhàn)的影子腔演述
        戲曲研究(2022年1期)2022-08-26 09:06:58
        美仁大草原的牦牛(外一章)
        散文詩(2021年22期)2022-01-12 06:13:54
        書法篇
        大理文化(2020年12期)2021-01-23 04:41:30
        跟著牦牛去巡山
        大河金川
        文苑(2019年14期)2019-08-09 02:14:06
        解偶聯(lián)蛋白2在低氧性肺動脈高壓小鼠肺組織的動態(tài)表達(dá)
        金川雪梨膏 止咳化痰好處多
        目前牦??谔阋叩脑\斷與防治
        過渡金屬催化的碳-氮鍵偶聯(lián)反應(yīng)的研究
        環(huán)氧樹脂偶聯(lián)納米顆粒制備超疏水表面
        中國塑料(2015年8期)2015-10-14 01:10:49
        亚洲日韩国产精品乱-久| 国产区一区二区三区性色| 日韩亚洲精品国产第二页| 两个人看的www免费视频中文| 两个黑人大战嫩白金发美女| 亚洲av福利天堂在线观看| av影片手机在线观看免费网址| 乱中年女人伦| 亚洲精品国精品久久99热一| 成人精品免费av不卡在线观看| 亚洲国产精品激情综合色婷婷| 国产亚洲精品a片久久久| 狠狠躁夜夜躁人人爽天天天天97| 欧美1区二区三区公司| 特级国产一区二区三区| 综合色就爱涩涩涩综合婷婷 | 5级做人爱c视版免费视频| 一区二区丝袜美腿视频| 在线观看国产激情视频| 被黑人猛烈30分钟视频| 秋霞影院亚洲国产精品| 国内精品久久人妻互换| 国模gogo无码人体啪啪| 亚洲日本在线电影| 午夜不卡亚洲视频| 精品国产乱子伦一区二区三| 国产偷国产偷精品高清尤物| 久久精品片| 国产熟女精品一区二区| 色翁荡熄又大又硬又粗又动态图| 三级在线看中文字幕完整版| 成人国产在线观看高清不卡| 国产精品亚洲综合久久系列| 97精品久久久久中文字幕| 成人爽a毛片一区二区免费| 好看的国内自拍三级网站| 久久亚洲精品国产亚洲老地址| 日本三级欧美三级人妇视频 | 日韩欧群交p片内射中文| 日本在线观看不卡| 日本一区二区三区高清视|