游德平，姜芳燕，韓冰冰，陳攀，馬軍，楊寧

(1.海南熱帶海洋學(xué)院，熱帶海洋生物資源利用與保護(hù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南省熱帶海洋漁業(yè)資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 三亞572022；2.海南大學(xué)三亞南繁研究院,海南 三亞572000)

腰斑寶螺也稱(chēng)眼球貝，屬于軟體動(dòng)物門(mén)、腹足綱、中腹足目、寶螺科、寶螺屬，主要分布于亞熱帶和熱帶的潮間帶、珊瑚礁或泥沙海底。本次研究主要為從產(chǎn)卵到卵囊破裂結(jié)束過(guò)程中的胚胎發(fā)育變化以及規(guī)律。

一、材料與方法

1.材料

腰斑寶螺采集時(shí)間為2021年5月30日，地點(diǎn)在海南三亞市小東海區(qū)域(109.498864°E、18.211454°N)，采集到的3只腰斑寶螺中有1只產(chǎn)卵，其殼長(zhǎng)3.21厘米、殼寬1.99厘米、個(gè)體重8.1克(產(chǎn)卵后)，見(jiàn)圖1。腰斑寶螺從海區(qū)采集回來(lái)后，放在總體積110升的海水水族缸中暫養(yǎng)，并用體積0.8升的隔離盒與其他養(yǎng)殖生物隔開(kāi)。隔離盒和串聯(lián)的水族缸的水流交換速度約170升/時(shí)，缸體上方照明時(shí)長(zhǎng)約8時(shí)/天。

圖1 腰斑寶螺腹面(左)和側(cè)面(右)

2.觀察和記錄方法

每天早、中、晚(早上8點(diǎn)、中午12點(diǎn)、晚上8點(diǎn))3次觀察記錄腰斑寶螺的活動(dòng)狀態(tài)，使用小型顯微鏡(型號(hào)：STV-120M WSA)進(jìn)行觀察，同時(shí)肉眼直接近距離觀察表面活動(dòng)特點(diǎn)。

在觀察的同時(shí)讀取缸內(nèi)兩支溫度計(jì)數(shù)值并取平均值，每天記錄3次。

二、結(jié)果

1.卵數(shù)統(tǒng)計(jì)

腰斑寶螺于6月1日，即采集后的第3天開(kāi)始產(chǎn)卵，產(chǎn)卵持續(xù)時(shí)間約16小時(shí)，產(chǎn)卵時(shí)以最初產(chǎn)的幾十個(gè)卵囊為中心，逐漸向四周擴(kuò)散呈輻射狀排列，最終近似圓形，共產(chǎn)出193個(gè)卵囊，每個(gè)卵囊內(nèi)約有200個(gè)胚胎(圖2)。受精的胚胎為乳白色，未受精的幾乎透明。胚胎發(fā)育到后期，發(fā)現(xiàn)有4個(gè)卵囊逐漸渾濁，變?yōu)樵旗F狀、半透明、白色，沒(méi)有任何生命現(xiàn)象，使用紫外線(xiàn)燈照射發(fā)現(xiàn)有熒光反射(圖3)，而其他的正常發(fā)育的胚胎所在卵囊沒(méi)有熒光反射。

圖2 產(chǎn)卵初期(左)和后期(右)

圖3 壞死的卵囊

2.胚胎發(fā)育情況

6月1日開(kāi)始產(chǎn)卵，計(jì)為第1天。卵囊飽滿(mǎn)，內(nèi)部卵粒分布均勻，24小時(shí)后開(kāi)始有生命活動(dòng)跡象。此時(shí)親螺已停止繼續(xù)產(chǎn)卵，用腹足覆蓋、趴在卵囊塊上進(jìn)行護(hù)卵，卵囊周邊的雜物會(huì)被親螺清理干凈。

隨著時(shí)間的推移，卵囊內(nèi)的胚胎不斷發(fā)育，外觀上的顆粒感越來(lái)越明顯。

第5天，胚胎發(fā)育至擔(dān)輪幼蟲(chóng)期，在卵囊內(nèi)部無(wú)規(guī)則游動(dòng)，游泳速度較慢。個(gè)體外表有一層透明膜包裹，兩邊、中間部位有凸起。胚胎個(gè)體全身無(wú)明顯的組織結(jié)構(gòu)，見(jiàn)圖4。

第8天，觀察有2個(gè)黑色的點(diǎn)在胚胎的一端，根據(jù)相關(guān)資料推斷這是頭端正在發(fā)育中的眼，同時(shí)觀察到胚殼結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)，但還沒(méi)有出現(xiàn)明顯的螺塔，游泳速度非?？欤?jiàn)圖4。最后發(fā)現(xiàn)卵囊中心位置胚胎的游泳速度較卵囊邊緣胚胎的游泳速度慢一些，而胚胎密度大小相反。

圖4 胚胎發(fā)育第5天(左)和第8天(右)

第9天，胚胎色素積累明顯、背部顏色加深，胚殼輪廓更明顯(圖5)，用于游泳的頭部二片翼足活動(dòng)明顯。

第12天，整體卵囊顏色轉(zhuǎn)深，胚胎背部色素加深，胚殼仍為白色、有變大的現(xiàn)象。幼體擁擠在一起，卵囊隨時(shí)可能破裂，見(jiàn)圖5。

圖5 胚胎發(fā)育第9天(左)和第12天(右)

第14天，部分卵囊破裂；第15天，親螺開(kāi)始離開(kāi)卵囊塊。幼螺開(kāi)始進(jìn)入浮游生活階段。

三、總結(jié)

由于實(shí)驗(yàn)樣本數(shù)量有限，本次實(shí)驗(yàn)只是對(duì)腰斑寶螺胚胎的外部形態(tài)做了初步研究，未對(duì)卵裂期、囊胚期、原腸期、擔(dān)輪幼蟲(chóng)期、仔螺等具體時(shí)期做細(xì)致的研究。本實(shí)驗(yàn)中的溫度對(duì)腰斑寶螺卵囊內(nèi)胚胎發(fā)育也起到重要作用，孵化期間每天的水溫為23～25℃，最適孵化溫度還有待進(jìn)一步探索。

在本實(shí)驗(yàn)中后期，水中的原生動(dòng)物對(duì)卵囊會(huì)造成一定的干擾，它們附著于卵囊表面，有的會(huì)鉆進(jìn)卵囊吞噬胚胎幼體。另外，胚胎脫離卵囊之后的浮游生活階段，開(kāi)口餌料直接影響孵化率。有關(guān)寶螺科貝類(lèi)胚胎的研究較少，蒲利云等(2014)曾對(duì)虎斑寶貝(Cypraea tigris)成功開(kāi)展了野生馴化和不同生物餌料馴化實(shí)驗(yàn)，對(duì)本實(shí)驗(yàn)具有重要借鑒和指導(dǎo)作用。