周建忠，安樹偉，章宇思

(蘇州市吳江區(qū)水產(chǎn)技術(shù)推廣站，江蘇 蘇州215200)

蘇州市吳江區(qū)自20世紀(jì)90年代開始推廣大口黑鱸養(yǎng)殖，至2018年養(yǎng)殖面積達(dá)4萬畝。2021年吳江區(qū)某養(yǎng)殖場大口黑鱸發(fā)生以體表潰瘍?yōu)樘卣鞯募膊?，造成大量死亡。為明確病因，筆者進(jìn)行了病原分離、人工回歸感染、生理生化鑒定及16S rRNA序列分析鑒定，并開展藥物敏感性試驗(yàn)篩選敏感藥物，采用對癥施藥、調(diào)水、培藻等方法成功處理病情。

一、基本情況

1.養(yǎng)殖概況

發(fā)病漁場位于吳江區(qū)八坼街道，養(yǎng)殖面積50畝，共4個塘口，每畝放養(yǎng)3 000尾大口黑鱸。

2.發(fā)病特征

2021年7月中旬，各塘口陸續(xù)出現(xiàn)癥狀相同的發(fā)病大口黑鱸。主要癥狀為魚游動緩慢、食欲降低、體表多處出現(xiàn)不同程度潰瘍，肝臟局部呈白色、質(zhì)地不均勻，心臟有脂肪顆粒(圖1)。

圖1 患病大口黑鱸臨床癥狀

二、實(shí)驗(yàn)室診斷

1.病毒檢測

取病魚肝、腎、脾等內(nèi)臟組織，無菌操作轉(zhuǎn)入組織研磨管，加入生理鹽水冰浴研磨成組織勻漿液，使用寧波愛基因科技有限公司提供的DNA提取試劑盒及大口黑鱸微流控芯片聯(lián)檢試劑盒(虹彩病毒/彈狀病毒)開展病毒檢測，未檢出病毒。

2.細(xì)菌檢測

從患病大口黑鱸肝臟、腎臟、脾臟分離獲得1株優(yōu)勢菌株WJ01，28℃下培養(yǎng)24小時后，在TSA培養(yǎng)基上形成表面光滑、中央凸起、邊緣完整、直徑1～2毫米的白色圓形菌落。經(jīng)革蘭氏染色發(fā)現(xiàn)，分離菌株為革蘭氏陰性短桿菌。

將菌液濃度為1×107CFU/毫升腹腔注射試驗(yàn)組大口黑鱸進(jìn)行攻毒后，于第3天開始出現(xiàn)體表潰瘍癥狀，表明該分離菌株為病原菌。

分離菌株生理生化特性試驗(yàn)使用API 20NE生理生化鑒定條，結(jié)果見表1。藥敏試驗(yàn)根據(jù)K－B紙片擴(kuò)散法，藥敏紙片由杭州微生物試劑有限公司提供，藥敏結(jié)果見表2。

表1 分離菌株WJ01生理生化特性

表2 分離菌株WJ01藥敏試驗(yàn)結(jié)果

使用上海生工DNA提取試劑盒(EZ－10)提取病原菌DNA，以革蘭氏陰性菌通用引物(上游引物FAGAGTTTGATCCTGGCTCAG，下游引物R－TACGGCTACCTTGTTACGAC)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物送蘇州金唯智生物科技有限公司測序，測序結(jié)果在NCBI上BLAST比對，結(jié)果顯示分離菌株與維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)的同源性最高。

根據(jù)人工回感試驗(yàn)、生理生化試驗(yàn)、16S rRNA分子鑒定結(jié)果，初步判定引發(fā)該漁場大口黑鱸潰瘍病病原是維氏氣單胞菌。

三、治療

1.消毒

對漁場4口塘使用5%聚維酮碘按1∶500稀釋，全池潑灑，隔天1次，連用3次；養(yǎng)殖工具使用前用20毫克/升高錳酸鉀浸泡20分鐘。

2.藥物治療

投喂飼料由每天2次減少為每天1次，下午投喂；飼料中添加黃芪多糖及保肝膽中藥，以提高病魚體質(zhì)，連用3天；使用敏感抗菌藥物10%恩諾沙星拌料投喂，連用5天；后期注重調(diào)水、培藻，恢復(fù)池塘生態(tài)環(huán)境。

3.效果

經(jīng)連續(xù)15天治療，漁場從每天死亡200余尾降至10余尾，后期未見潰瘍病死亡個體。

四、分析與討論

人工回感試驗(yàn)出現(xiàn)了體表潰瘍癥狀，但未出現(xiàn)心臟脂肪粒，推測脂肪粒并非由維氏氣單胞菌引發(fā)潰瘍病的典型癥狀。

從體外抑菌試驗(yàn)看，恩諾沙星和氟苯尼考作為常用藥物，效果都比較好。造成本次發(fā)病比較嚴(yán)重的主要原因是，該漁場負(fù)責(zé)人將病原誤診為虹彩病毒，使用了三黃散、大蒜素和多西環(huán)素拌料投喂，并未取得良好效果，可見病原的確診及藥敏試驗(yàn)對池塘實(shí)踐用藥具有較強(qiáng)的指導(dǎo)意義。

該漁場大口黑鱸吃料量高于周邊漁場，且規(guī)格明顯偏大，推測吃料過猛、生長太快，導(dǎo)致肝臟代謝異常和心臟脂肪粒，進(jìn)而降低魚體機(jī)能，是引發(fā)此次大口黑鱸大量死亡的誘因。