張煥仕，趙 飛，劉 暢，朱昌玲，張鶴云，欽 佩 *

（1.南京野生植物綜合利用研究所，江蘇南京211111；2.南京大學鹽生植物實驗室，江蘇南京210093）

互花米草（Spartina alternifloraLoisel.）原產于北美洲大西洋沿岸和墨西哥海灣，是禾本科米草屬多年生C4草本植物，其主要生長于濱海鹽沼中潮帶上部至高潮帶。1979 年互花米草由美國引入我國，在抗風消浪、保灘護岸、促淤造陸、濕地修復等方面起到了重要作用。最新研究發(fā)現，中國沿海地區(qū)互花米草分布總面積達到55 468 hm2，江蘇灘涂互花米草面積最大，發(fā)展為 21 843 hm2［1］。

許多學者對互花米草的基本生物學特性、生理生態(tài)學和生物化學等方面進行了廣泛的研究：如互花米草的生產力［2-3］，互花米草體內重金屬元素的積累和轉移［4］，互花米草入侵對生態(tài)系統(tǒng)和碳循環(huán)的影響［5-7］等等。其體內還含有豐富的黃酮、多糖、皂苷等生物活性物質和必需微量元素，具有很好的保健作用［8］。張怡評等采用硅膠柱色譜與Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱色譜聯用首次從互花米草體內分離并鑒定出15 個化學成分［9］。徐年軍等對米草多糖的提取、純化及其單糖組成研究表明，米草多糖的單糖主要為鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖。根據各峰面積比計算，其相對百分含量分別為4.13%、3.02%、11.94%、8.89%、6.82%、27.18%、38.00%［10］。韓順風等以總黃酮含量為參考標準，采用響應曲面法對互花米草（地上部位）的提取工藝進行優(yōu)化，對互花米草進行了化學成分的提取、分離、純化和鑒定的初步研究，確定了其中含有的對羥基肉桂醛、麥角甾醇以及麥黃酮等15個化合物的結構［11］。

本研究擬在秋冬季刈割互花米草地上部分，通過ODS 反相層析、高效液相層析、核磁共振H 譜、核磁共振C 譜等技術分離、純化和鑒定了其體內的生物活性成分，為其生物活性成分中單體化合物進行系統(tǒng)性功能評價和開發(fā)利用提供了技術參考。

1 材料與方法

1.1 材料

2018 年11 月12 日采集于江蘇省鹽城市大豐區(qū)草廟鎮(zhèn)沿海灘涂的互花米草，經鑒定為禾本科米草屬植物互花米草。

1.2 分離與提取

取互花米草地上部分100 kg 曬干、切割成2～3 cm 長，加20 倍熱水浸提，濃縮提取液為深棕色液體（10 kg 左右）。將提取液用等體積乙酸乙酯萃取和等體積正丁醇萃取3遍，并分別減壓旋蒸濃縮，得到乙酸乙酯相粗膏113.8 g，正丁醇相粗膏159.6 g。

接著進行硅膠柱層析粗分，分別以石油醚/乙酸乙酯（v/v 100：0、50：1、20：1、10：1、5：1、2：1、1：1，各2 500 ml）和 CH2Cl2/MeOH（v/v 100：0、100：1、100：2、100：4、100：8、100：16、100：32 和 1：1，各 2 500 ml）作為流動相梯度洗脫，根據TLC 薄層層析結果合并相似組分，合并得到乙酸乙酯相的9 個組分和正丁醇相的10 個組分，再將各個組分經過硅膠柱層析、ODS反相層析、凝膠柱層析進一步分離，再經過高效液相層析技術進行分離純化，最終得到18個單體化合物。

1.3 結構鑒定

將上述18個單體化合物經過高分辨質譜、核磁共振H譜、核磁共振C譜的鑒定，得到各化合物的名稱、性狀、分子量、分子式和結構式。

2 結果

化合物1：異戊基奎尼酸黃色片狀，質量為29.0 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為544，分子式為C27H28O12，計算可知其不飽和度為14，結構如圖1。

圖1 異戊基奎尼酸結構式Fig.1 Isoamylquinic acid structure

化合物2：4-氫-1-苯并吡喃-4-酮 棕色塊狀，質量為19.4 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為526，分子式為C27H26O11，計算可知其不飽和度為15，結構如圖2。

圖2 4-氫-1-苯并吡喃-4-酮結構式Fig.2 4-hydrogen-1-benzopyran-4-one structure

化合物3：苜蓿素黃色塊狀，質量為24.3 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為330，分子式為C17H14O7，計算可知其不飽和度為11，結構如圖3。

圖3 苜蓿素結構式Fig.3 Alfalfa structure

化合物4：1-甲氧基-4 苯甲醛棕色塊狀，質量為11.7 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為298，分子式為C17H14O5，計算可知其不飽和度為11，結構如圖4。

圖4 1-甲氧基-4苯甲醛結構式Fig.4 1-methoxy-4-benzaldehyde structure

化合物5：3，7-二羥基-2-戊二烯酸甲酯-色烯棕色油狀，質量為13.5 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為290，分子式為C15H14O6，計算可知其不飽和度為9，結構如圖5。

圖5 3，7-二羥基-2-戊二烯酸甲酯-色烯結構式Fig.5 3，7-dihydroxy-2-Methyl pentadienoate-chromene structure

化合物 6：3-羥基-8-甲氧基-6，9-二甲基-5-異丙基-1-酮黃色油狀，質量為7.9 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為262，分子式為C16H22O3，計算可知其不飽和度為6，結構如圖6。

圖 6 3-羥基-8-甲氧基-6，9-二甲基-5-異丙基-1-酮結構式Fig.6 3-hydroxy-8-methoxy-6，9-dimethyl-5-isopropyl-1-one structure

化合物 7：3-羥基-8-甲氧基-6，9-二甲基-5-丙基-1-酮黑色油狀，質量為6.6 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為262，分子式為C16H22O3，計算可知其不飽和度為6，結構如圖7。

圖7 3-羥基-8-甲氧基-6，9-二甲基-5-丙基-1-酮結構式Fig.7 3-hydroxy-8-methoxy-6，9-Dimethyl-5-Propyl-1-one structure

化合物8：4，4′-醛基二苯酮黃色針狀，質量為46.3 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為238，分子式為C15H10O3，計算可知其不飽和度為11，結構如圖8。

圖8 4，4′-醛基二苯酮結構式Fig.8 4，4′-aldehyde benzophenone structure

化合物9：氨基脲淡黃色塊狀，質量為29.6 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為204，分子式為C9H8N4O2，計算可知其不飽和度為8，結構如圖9。

圖9 氨基脲結構式Fig.9 Semicarbazide structure

化合物10：1-氫吲哚-苯并呋喃黑色油狀，質量為12.4 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為180，分子式為C13H8O，計算可知其不飽和度為10，結構如圖10。

圖10 1-氫吲哚-苯并呋喃結構式Fig.10 1-indoline-benzofuran structure

化合物11：1，5-萘二甲醛 黃色固體，質量為15.4 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為216，分子式為C12H8O4，計算可知其不飽和度為9，結構如圖11。

圖11 1，5-萘二甲醛結構式Fig.11 1，5-naphthalaldehyde structure

化合物12：對香豆酸棕色塊狀，質量為41.0 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為164，分子式為C9H8O3，計算可知其不飽和度為6，結構如圖12。

圖12 對香豆酸結構式Fig.12 P-coumaric acid structure

化合物13：3 氫-2-苯并吡喃-3-酮 黃色片狀，質量為25.0 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為146，分子式為C9H6O2，計算可知其不飽和度為7，結構如圖13。

圖13 3氫-2-苯并吡喃-3-酮結構式Fig.13 3-hydro-2-benzopyran-3-one structure

化合物14：苯甲酸淡黃色塊狀，質量為27.8 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為122，分子式為C7H6O2，計算可知其不飽和度為5，結構如圖14。

圖14 苯甲酸結構式Fig.14 Benzoic acid structure

化合物15：2-甲氧基-5-乙?；椒狱S色針狀，質量為17.7 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為166，分子式為C9H10O3，計算可知其不飽和度為5，結構如圖15。

圖15 2-甲氧基-5-乙酰基苯酚結構式Fig.15 2-methoxy-5-acetylphenol structure

化合物16：對羥基苯甲酸黃色塊狀，質量為14.6 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為136，分子式為C8H8O2，計算可知其不飽和度為5，結構如圖16。

圖16 對羥基苯甲酸結構式Fig.16 P-hydroxybenzoic acid structure

化合物17：1，2-苯二酚黑色油狀，質量為21.7 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為110，分子式為C6H6O2，計算可知其不飽和度為4，結構如圖17。

圖17 1，2-苯二酚結構式Fig.17 1，2-benzenediol structure

化合物18：3-羥基-2H-吡喃-2-酮 棕色塊狀，質量為22.3 mg，根據高分辨質譜推測其分子量為112，分子式為C5H4O3，計算可知其不飽和度為4，結構如圖18。

圖18 3-羥基-2H-吡喃-2-酮結構式Fig.18 3-hydroxy-2H-pyran-2-one structure

3 結論

互花米草的引進為我國沿海地區(qū)保灘護岸、促淤造陸做出了巨大貢獻。但隨著互花米草的生長蔓延和過度擴張，其負面作用逐步顯現，影響了部分沿海地區(qū)的生物多樣性，特別是灘涂水產養(yǎng)殖。為探索互花米草提取物的生物功效，實現互花米草的資源化利用，興利除弊，本研究對互花米草提取物進行了分離、純化和鑒定，共獲得18 個單體化合物?；セ撞萏崛∥锏倪@18種化合物中，異戊基奎尼酸、對香豆酸和苜蓿素都是典型的抗菌消炎、保肝利膽、降血酯、抗氧化、抗痛風、消除自由基等功效很強的功能成分。本研究不僅初步揭示了互花米草發(fā)揮生物功能的化學基礎，同時也為進一步深入開發(fā)生物醫(yī)藥提供了依據和參考。