黃曉東 嚴(yán)立冬 楊明環(huán) 李 丹 楊博文 張 力 黃寬明 魯軍體

膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性惡性腫瘤，多呈浸潤性生長，預(yù)后較差[1，2]。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展與免疫系統(tǒng)受損有關(guān)。程序性死亡受體1（programmed death receptor-1，PD-1）/程序性死亡受體配體1（programmed death ligand-1，PD-L1）信號通路是腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)攻擊的重要途徑，而趨化素樣因子超家族（CKLF- like MARVEL transmembrane domain-containing family，CMTM）6 蛋白可減少PD-L1降解，促進(jìn)免疫逃逸[3]。姚戰(zhàn)非等[4]發(fā)現(xiàn)人黑素瘤血管內(nèi)皮生長因子A、B 的表達(dá)上調(diào)，而CMTM1 是影響其表達(dá)的重要基因。本文探討膠質(zhì)瘤組織CMTM6、CMTM1 表達(dá)變化及其臨床意義，為膠質(zhì)瘤診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2016 年1 月至2019 年6 月手術(shù)切除的膠質(zhì)瘤標(biāo)本96例，選擇同期顱腦損傷內(nèi)減壓術(shù)中獲得非腫瘤腦組織40 例為對照。膠質(zhì)瘤組男51 例，女45 例；年齡30～62 歲，平均（45.06±12.65）歲。對照組男23 例，女17 例；年齡32～64 歲，平均（48.92±10.78）歲。本研究方案獲應(yīng)用倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理診斷為膠質(zhì)瘤，年齡≥18歲；首次因膠質(zhì)瘤就診；既往無放療、化療史；精神狀態(tài)正常；知曉研究內(nèi)容，簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)入院；術(shù)前出現(xiàn)腫瘤卒中、腦疝等；術(shù)前行放療、化療；合并其他原發(fā)性腫瘤；有自身免疫性疾病、腦膜炎、腦血管病、血液系統(tǒng)病等病史。

1.2 檢測方法 采用免疫組化法檢測組織CMTM1、CMTM6的表達(dá)水平，根據(jù)說明書操作。染色結(jié)果評估[5]：隨機(jī)選擇10 個高倍視野（×400），以胞質(zhì)、胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕色、棕褐色染色，則判定為陽性。①陽性細(xì)胞占比：≤5%為0 分，6%～25%為1 分，26%～50%為2分，51%～75%為3 分，＞75%為4 分。②染色程度評估：無染色為0 分，黃色為1 分，棕色為2 分，深棕色為3 分。二者乘積為最終分值，總分＜2 分為低表達(dá)，≥2 分為高表達(dá)。根據(jù)Envision 二步法測定異檸檬酸脫氫酶1（isocitrate dehydrogenase 1，IDH1）突變情況，常規(guī)根據(jù)說明書操作，隨機(jī)選擇5 個高倍視野，觀察染色陽性率，若染色陽性率＞10%，則判定為IDH1突變，否則為未突變。

1.3 隨訪 術(shù)后隨訪24個月，記錄病人生存情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計量資料以x±s表示，行t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；采用Spearman 相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性；利用多因素Cox 比例回歸風(fēng)險模型分析膠質(zhì)瘤預(yù)后危險因素；采用生存曲線分析CMTM1、CMTM6 的表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤病人生存預(yù)后的關(guān)系；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膠質(zhì)瘤組織CMTM1、CMTM6 的表達(dá) 膠質(zhì)瘤組CMTM1和CMTM6高表達(dá)率[分別為64.58%（62/96）、67.71%（65/96）]明顯高于對照組[分別為25%（10/40）、20.00%（8/40）；P＜0.01]。膠質(zhì)瘤組織CMTM1與CMTM6表達(dá)水平呈正相關(guān)（r=0.837，P＜0.001）。

2.2 膠質(zhì)瘤預(yù)后的影響因素 本文96例隨訪2年，死亡37例，生存59例。多因素Cox比例回歸風(fēng)險模型分析顯示，WHO分級Ⅲ～Ⅳ級、腫瘤直徑≥5 cm、腫瘤未全切除及CMTM1 高表達(dá)、CMTM6 高表達(dá)是膠質(zhì)瘤預(yù)后不良的獨立危險因素（P＜0.05，表1），術(shù)后放/化療、IDH1突變是預(yù)后保護(hù)因素（P＜0.05，表1）。

表1 Cox回歸分析膠質(zhì)瘤病人預(yù)后影響因素

2.3 膠質(zhì)瘤組織CMTM1、CMTM6表達(dá)水平與病人生存的關(guān)系 生存曲線分析顯示，CMTM1、CMTM6高表達(dá)組2 年累積生存率（分別為50.15%、52.05%）明顯低于表達(dá)組（分別為79.85%、84.95%；圖1；P＜0.05）。

圖1 生存曲線分析膠質(zhì)瘤組織CMTM1、CMTM6表達(dá)水平與病人生存的關(guān)系

3 討論

膠質(zhì)瘤手術(shù)預(yù)后并不理想。研究表明腫瘤細(xì)胞侵襲、進(jìn)展過程受多種信號分子與蛋白調(diào)控[6]。CMTM家族參與口腔鱗癌、肝癌、肺癌等多種惡性腫瘤進(jìn)展，CMTM1 影響腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤發(fā)生[7]。丁雨等[8]發(fā)現(xiàn)肺腺癌臨床分期以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與CMTM6表達(dá)狀態(tài)有關(guān)。研究表明CMTM1可以通過激活β-連環(huán)蛋白信號通路，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。此外，CMTM1 高表達(dá)，能激活Lyn原癌基因，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[9]。CMTM6是調(diào)控PDL1 的關(guān)鍵因子，能幫助PD-L1 參與腫瘤免疫逃逸，從而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[10]。本文發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤組織CMTM1、CMTM6 呈高表達(dá)，且呈正相關(guān)。這提示CMTM1與CMTM6高表達(dá)，二者相互影響，參與膠質(zhì)瘤發(fā)生。本研究結(jié)果顯示CMTM1、CMTM6 高表達(dá)是膠質(zhì)瘤生存預(yù)后不良的危險因素，而且CMTM1、CMTM6 高表達(dá)膠質(zhì)瘤病人2 年累計生存率明顯降低。這提示CMTM1與CMTM6高表達(dá)參與膠質(zhì)瘤的進(jìn)展，與病人不良預(yù)后有關(guān)。

總之，膠質(zhì)瘤組織CMTM1、CMTM6 呈高表達(dá)，與病人的不良生存預(yù)后有關(guān)。