劉 穎

(河北省承德市雙灤區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局，河北 承德 067000)

隨著生活水平的提高，人們餐桌上蔬菜的品種越來越豐富，蔬菜是維持人們身體健康必不可少的食物，我國人均蔬菜占有量已達(dá)310kg，遠(yuǎn)超世界人均105kg的水平。蔬菜作為一種餐桌必備健康食品，越來越受到當(dāng)今崇尚營養(yǎng)健康人群的喜愛。然而，近年來因過量或不正確使用農(nóng)藥致使蔬菜中農(nóng)藥殘留超標(biāo)而引發(fā)的中毒事件時有發(fā)生，作為食品檢測人員能夠科學(xué)及時檢測出蔬菜中殘留農(nóng)藥對食品質(zhì)量安全及維護(hù)消費(fèi)者的身體健康具有重要意義。因此，為了盡可能減少此類農(nóng)藥中毒事件的發(fā)生，如何科學(xué)有效地檢測出蔬菜中殘留的農(nóng)藥是食品檢測人員的必修課[1-3]。為了分析回收率的影響因素，經(jīng)研讀相關(guān)文獻(xiàn)[4-6]特設(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn)，分別選取檢測物濃度、氮吹強(qiáng)度、升溫程序等常見的因素進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.1 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)中用到的儀器與設(shè)備有GC-2010PLUS型號氣相色譜儀(日本島津公司)，配FPD火焰光度檢測器(P濾光片)，AOC-20i自動進(jìn)樣器(日本島津公司)，WD-12氮吹儀(杭州奧盛儀器有限公司)，SH-Rtx-5色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)(美國Agilent公司)，3205型食品加工機(jī)(匈牙利BARUN公司)，F(xiàn)J-200高速分散均質(zhì)器(上海標(biāo)本模型廠)，WH-90A微型漩渦混合器(上海振榮科學(xué)儀器有限公司)，BSCA2202S型電子天平(德國賽多利斯公司)。

1.2 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)中用到的材料與試劑有乙腈(色譜純)，丙酮(AR重蒸)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(二嗪磷100mg·kg-1、馬拉硫磷100mg·kg-1)(北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司)，氯化鈉(AR)(天津市永大化學(xué)試劑有限公司)，菠菜若干(附近市場選購)。

2 實(shí)驗(yàn)條件

2.1 樣品處理方法

模擬農(nóng)藥污染蔬菜的方法，將從市場上購買的新鮮菠菜洗凈，用吸水紙吸干表面水。2種農(nóng)藥二嗪磷、馬拉硫磷按照相關(guān)要求[7]稀釋倍數(shù)分別為200倍、500倍、1000倍、5000倍、50000倍，稀釋好編號(二嗪磷稀釋液濃度由低到高依次為E1、E2、E3、E4、E5；馬拉硫磷稀釋液濃度由低到高依次為M1、M2、M3、M4、M5)待用；將清洗過的菠菜用2種農(nóng)藥10種不同濃度稀釋液，浸泡10min，取出自然晾干，于室溫放置12h待用，處理后的編碼依舊按照上述編碼不變。

2.2 樣品前處理方法

實(shí)驗(yàn)中樣品的前處理采用《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氮、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》(NY/T 761-2008)的標(biāo)準(zhǔn)處理方法，其它操作細(xì)節(jié)參照GB/T 6379.2-2004[8,9]。

2.3 GC檢測條件

實(shí)驗(yàn)中GC檢測條件的設(shè)置有如下幾種，現(xiàn)依次列舉出。

進(jìn)樣口溫度為220℃，不分流進(jìn)樣；升溫程序A的起始溫度50℃，以20℃·min-1的速率升至120℃，再以10℃·min-1的速率升至180℃，保持4min，然后以10℃·min-1升至240℃，保持5min；升溫程序B的起始溫度80℃，保留1min，以20℃·min-1的速率升至120℃，再以10℃·min-1的速率升至270℃；升溫程序C的起始溫度90℃，以10℃·min-1的速率升至120℃，以20℃·min-1的速率升至180℃，保留1min，然后以10℃·min-1升至290℃；檢測器溫度分別為250℃、270℃、290℃，進(jìn)樣量均為1.00μL。柱流量為4.13mL·min-1，總流量為10mL·min-1，毛細(xì)管柱為SH-Rtx-5(30m×0.25mm×0.25μm)。

2.4 氮吹強(qiáng)度控制

實(shí)驗(yàn)中氮吹強(qiáng)度的控制，按照旋鈕旋轉(zhuǎn)角度和實(shí)驗(yàn)需求共計(jì)設(shè)置了如下3種氮吹強(qiáng)度。

氮吹強(qiáng)度控制旋鈕30°(弱氮吹)；氮吹強(qiáng)度控制旋鈕90°(中等強(qiáng)度氮吹)；氮吹強(qiáng)度控制旋鈕180°(高強(qiáng)度氮吹)。

3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

3.1 驗(yàn)證檢測物濃度對回收率的影響

實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對照組，做平行樣。取2份清洗干凈無農(nóng)藥殘留的新鮮菠菜樣品，編號為Y0；取適量2份Y0中的樣品編號Y00、Y01，分別取2份適量被農(nóng)藥污染的蔬菜樣品E1、E2、E3、E4、E5、M1、M2、M3、M4、M5，編號依次為E10、E11、E20、E21、E30、E31、E40、E41、E50、E51、M10、M11、M20、M21、M30、M31、M40、M41、M50、M51，將上述樣品放置在試管架上，用瓶口分液器各加入50mL乙腈溶液，將上述樣品分別放置到均質(zhì)器托盤內(nèi)進(jìn)行均質(zhì)處理；均質(zhì)處理后過濾至盛有氯化鈉(6g)的具塞量筒中；劇烈震蕩1min；靜置0.5h；吸取上層乙腈溶液至10mL具塞試管內(nèi)，進(jìn)行氮吹處理，氮吹采用90°(中等強(qiáng)度氮吹)，恰好近干為止；丙酮定容(5mL)；渦旋處理；上機(jī)實(shí)驗(yàn)(升溫程序選擇B程序)；最終得到結(jié)果。

3.2 驗(yàn)證升溫程序?qū)厥章实挠绊?/h3>

實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對照組，做平行樣。取用Y0、E3、M3樣品各2份，編號分別為Y11、Y12、E32、E33、M32、M33；將上述樣品放置在試管架上，用瓶口分液器各加入50mL乙腈溶液，將上述樣品分別放置到均質(zhì)器托盤內(nèi)進(jìn)行均質(zhì)處理；均質(zhì)處理后過濾至盛有氯化鈉(6g)的具塞量筒中；劇烈震蕩1min；靜置0.5h；吸取上層乙腈溶液至10mL具塞試管內(nèi)，進(jìn)行氮吹處理，重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，其中，氮吹強(qiáng)度均采用90°(中等強(qiáng)度氮吹)，升溫程序分別采用A、B、C 3種升溫程序進(jìn)行上述3次實(shí)驗(yàn)，最終得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3.3 驗(yàn)證氮吹強(qiáng)度對回收率的影響

實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對照組，做平行樣。取用Y0、E3、M3樣品各2份，編號分別為Y21、Y22、E34、E35、M34、M35；將上述樣品放置在試管架上，用瓶口分液器各加入50mL乙腈溶液，將上述樣品分別放置到均質(zhì)器托盤內(nèi)進(jìn)行均質(zhì)處理；均質(zhì)處理后過濾至盛有氯化鈉(6g)的具塞量筒中；劇烈震蕩1min；靜置0.5h；吸取上層乙腈溶液至10mL具塞試管內(nèi)，進(jìn)行氮吹，并重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)，其中，升溫程序采用升溫程序B，氮吹強(qiáng)度分別采用弱氮吹(控制旋鈕30°)、中等強(qiáng)度氮吹(控制旋鈕90°)、高強(qiáng)度氮吹(控制旋鈕180°)進(jìn)行，最終得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4 結(jié)果與討論

4.1 檢測物濃度與回收率呈正相關(guān)關(guān)系

經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)1的驗(yàn)證，得到如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中，圖1～3序號與編號對應(yīng)關(guān)系如表1所示；圖4～6序號與編號對應(yīng)關(guān)系如表2所示。

表1 圖1～3序號與編號關(guān)系表

表2 圖4～6序號與編號關(guān)系表

圖1 二嗪磷組編號濃度柱狀圖

圖2 二嗪磷組濃度與檢出值關(guān)系圖

圖3 二嗪磷組濃度與回收率關(guān)系圖

圖4 馬拉硫磷組編號與濃度柱狀圖

圖5 馬拉硫磷組濃度與檢出值關(guān)系圖

圖6 馬拉硫磷組濃度與回收率關(guān)系圖

經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖1～3分析可知，經(jīng)過二嗪磷污染后的菠菜，在檢測時回收率與濃度呈正相關(guān)關(guān)系，即濃度越高則回收率越高。但濃度為0.002的E10和E11組的回收率分別為47.50和48.20，其值不符合規(guī)范[4]中的規(guī)定。經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖4～6分析可知，經(jīng)過馬拉硫磷污染后的菠菜，在檢測時回收率與濃度呈正相關(guān)關(guān)系，即濃度越高則回收率越高。但濃度為0.002的M10和M11組的回收率分別為48.30和47.40，其值不符合規(guī)范[10]中的規(guī)定，可以舍去。

4.2 升溫程序?qū)厥章薀o顯著影響

經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)2的驗(yàn)證，得到如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中，圖7～10序號與編號對應(yīng)關(guān)系如表3所示。

表3 圖7～10序號與編號關(guān)系表

圖7 驗(yàn)證升溫程序?qū)厥章视绊憰r濃度與編號關(guān)系圖

圖8 驗(yàn)證升溫程序?qū)厥章视绊憰r濃度與檢出值關(guān)系圖

圖9 升溫程序A、B與回收率關(guān)系圖

圖10 升溫程序A、C與回收率關(guān)系圖

經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖7～10分析可知，經(jīng)過二嗪磷和馬拉硫磷污染后的菠菜，在檢測時，上述3種升溫程序?qū)厥章薀o顯著影響。如圖9所示，在其它條件一致的情況下，升溫程序A和升溫程序B作用下二嗪磷和馬拉硫磷的回收率分別為89.793、89.691和89.793、89.690；升溫程序A和升溫程序C作用下二嗪磷和馬拉硫磷的回收率分別為89.793、89.691和89.792、89.692(為減少誤差，上述數(shù)據(jù)均為平行對照所得結(jié)果的均值)，上述3種升溫程序下的回收率數(shù)據(jù)無顯著性差異。但研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，升溫程序B在蔬菜中二嗪磷、馬拉硫磷檢測實(shí)驗(yàn)中作為升溫程序要比A、C升溫程序時檢測物峰值出現(xiàn)時間早0.98min和0.89min，具體數(shù)據(jù)如圖11所示。

圖11 升溫程序?qū)z測物峰值出現(xiàn)時間的影響

4.3 氮吹強(qiáng)度對回收率有影響

經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)3的驗(yàn)證，得到如下實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中，圖12～14序號與編號對應(yīng)關(guān)系如表4所示。

表4 圖12～14序號與編號關(guān)系表

圖12 驗(yàn)證氮吹強(qiáng)度對回收率的影響實(shí)驗(yàn)中濃度

圖13 驗(yàn)證氮吹強(qiáng)度對回收率的影響實(shí)驗(yàn)中濃度

經(jīng)上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖12～14分析可知，經(jīng)過二嗪磷和馬拉硫磷污染后的菠菜，在檢測時，上述3種氮吹強(qiáng)度對回收率影響顯著。氮吹強(qiáng)度過強(qiáng)時回收率數(shù)值過小，回收率低于該濃度被檢測標(biāo)準(zhǔn)范圍下限，本文中高強(qiáng)度氮吹情況下二嗪磷和馬拉硫磷的回收率分別為49.792、49.692；氮吹強(qiáng)度過弱時，回收率高于該濃度被檢測標(biāo)準(zhǔn)范圍上限，分別為129.793、129.691；唯有中等強(qiáng)度氮吹處理時得到的回收率數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，分別為89.993、89.790。

綜上所述，嚴(yán)格按照現(xiàn)行規(guī)范《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測》(GB/T27404-2008)的要求，科學(xué)遵循空白對照、平行試驗(yàn)的原則，經(jīng)過多組分、單變量因素控制的條件下，逐一驗(yàn)證了回收率與檢測物濃度、升溫程序、氮吹強(qiáng)度的關(guān)系，得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)過多次求取均值減少誤差，最終分析得出如下結(jié)論。

經(jīng)過驗(yàn)證檢測物濃度對回收率的影響實(shí)驗(yàn)，對最終數(shù)據(jù)分析可知，經(jīng)過二嗪磷污染后的菠菜，在檢測時回收率與濃度呈正相關(guān)關(guān)系，即濃度越高則收率越高。但濃度為0.002的E10和E11組的回收率分別為47.50和48.20，其值不符合相關(guān)規(guī)定。所以，綜合分析認(rèn)為，經(jīng)過馬拉硫磷污染后的菠菜，在檢測時回收率與濃度呈正相關(guān)關(guān)系，即濃度越高則回收率越高，但濃度為0.002的M10和M11組的回收率分別為48.30和47.40，其值不符合相關(guān)規(guī)定，可以舍去。

經(jīng)過驗(yàn)證升溫程序?qū)厥章实挠绊憣?shí)驗(yàn)，對最終數(shù)據(jù)分析可知，經(jīng)過二嗪磷和馬拉硫磷污染后的菠菜，在檢測時分別設(shè)置A、B、C 3種升溫程序，驗(yàn)證不同升溫程序?qū)厥章薀o顯著影響，在其它條件一致的情況下，升溫程序A和升溫程序B作用下二嗪磷和馬拉硫磷的回收率分別為89.793、89.691和89.793、89.690；升溫程序A和升溫程序C作用下二嗪磷和馬拉硫磷的回收率分別為89.793、89.691和89.792、89.692(為減少誤差，上述數(shù)據(jù)均為平行對照所得結(jié)果的均值)，上述3種升溫程序下的回收率數(shù)據(jù)無顯著性差異。但研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，升溫程序B在蔬菜中二嗪磷、馬拉硫磷檢測實(shí)驗(yàn)中作為升溫程序要比A、C升溫程序時檢測物峰值出現(xiàn)時間早0.98min和0.89min，具體數(shù)據(jù)見圖11。

經(jīng)過驗(yàn)證氮吹強(qiáng)度對回收率的影響實(shí)驗(yàn)，對最終數(shù)據(jù)分析可知，經(jīng)過二嗪磷和馬拉硫磷污染后的菠菜，在檢測時，上述3種氮吹強(qiáng)度對回收率影響顯著。其中，氮吹強(qiáng)度過強(qiáng)時回收率數(shù)值過小，回收率低于該濃度被檢測標(biāo)準(zhǔn)范圍下限，本文中高強(qiáng)度氮吹情況下二嗪磷和馬拉硫磷的回收率分別為49.792、49.692；氮吹強(qiáng)度過弱時，回收率高于該濃度被檢測標(biāo)準(zhǔn)范圍上限，分別為129.793、129.691；唯有中等強(qiáng)度氮吹處理時得到的回收率數(shù)值在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，分別為89.993、89.790，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖14。

圖14 氮吹強(qiáng)度與回收率關(guān)系圖