張衛(wèi)華，劉才楨，田俊容，熊思穎，王婷婷，王東梅，吳建紅

[ 關(guān)鍵字] 白介素7；肽聚糖識別蛋白1；硬骨素；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；診斷

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種慢性炎癥性疾病，可導(dǎo) 致關(guān)節(jié)破壞[1]。目前，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷主要基于患者的臨床癥狀、影像學(xué)分析以及實(shí)驗(yàn)室檢查。這些診斷手段存在時效性差等問題。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的早期診斷對治療和預(yù)后具有重大影響，如果患者按照上述方法進(jìn)行診斷，有可能錯過最佳的治療時間[2]。因此，迫切需要方便、快速的診斷手段對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行預(yù)判，提高類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的早期診斷率。目前，血清中的多種分子已經(jīng)成為各類疾病的生物標(biāo)志物。肽聚糖識別蛋白1（peptidoglycan recognition protein 1，PGLYRP-1）與先天免疫系統(tǒng)和防御素相關(guān)途徑相關(guān)[3]。有研究發(fā)現(xiàn)血清中PGLYPR-1 水平與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床特征之間存在關(guān)聯(lián)[4]。白介素7（interleukin 7，IL-7）和肝細(xì)胞生長因子形成異二聚體，其作為前-B 細(xì)胞生長刺激因子起作用[5]。Burska 等[6]認(rèn)為IL-7 是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的潛在生物標(biāo)志物。 硬骨素（sclerostin，SOST）是一種分泌型糖蛋白，具有C-末端半胱氨酸結(jié)構(gòu)域，并且與骨形態(tài)發(fā)生蛋白拮抗劑的DAN（差異篩選選擇的神經(jīng)母細(xì)胞瘤基因異常）家族的序列相似[7]。與健康者比較，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)周圍骨中的硬化蛋白表達(dá)降低[8]。本研究旨在探討血清中IL-7、PGLYRP-1和SOST聯(lián)合對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象 納入2019 年5 月至2021 年5 月達(dá)州市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科收治的82 例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者為類風(fēng)濕組；其中，男45例，女37例；年齡26～69（54.22±14.05）歲。82 例非類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者為非類風(fēng)濕組；其中，男44 例，女38 例；年齡34～71（55.10±14.92）歲，其中，結(jié)締組織病14 例、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者25 例、強(qiáng)直性脊柱炎患者34例、狼瘡性腎炎8 例、甲狀腺自身免疫性疾病1 例。兩組患者均經(jīng)病理確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重心、肝、腎功能損害者；②長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；③患有精神疾病者；④癌癥患者。同時，納入同時期至我院體檢的健康體檢者82 例為對照組；其中，男42 例，女40 例；年齡29～70（53.11±16.48）歲。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 血清ⅠL-7, PGLYRP-1, SOST 的檢測 采取3組受試者的肘前靜脈血6 mL，進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。IL-7 ELISA 試劑盒購自上海晶抗生物工程有限公司（貨號：JK-（a）-1277）。PGLYRP-1 ELISA 試劑盒購自上海將來實(shí)業(yè)股份有限公司（貨號：0-107954）。SOSTELISA 試劑盒購自上海機(jī)純實(shí)業(yè)有限公司（貨號：JCSJ4385）。根據(jù)相應(yīng)說明書檢測3組受試者血清IL-7, PGLYRP-1, SOST的表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 PRISM 7.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）,多組間比較采用F檢驗(yàn)，兩兩比較采用SNK 檢驗(yàn)。應(yīng)用受試者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲線下面積（area under curve，AUC）評估IL - 7,PGLYRP-1, SOST檢測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的臨床診斷價值。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清ⅠL-7、PGLYRP-1、SOST 的表達(dá)比較 類風(fēng)濕組患者血清中的IL-7和SOST均低于非類風(fēng)濕組和對照組（P＜0.05），類風(fēng)濕組患者血清中的PG‐LYRP-1 高于非類風(fēng)濕組和對照組（P＜0.05）。非類風(fēng)濕組患者血清中IL-7 低于對照組（P＜0.05）；非類風(fēng)濕組患者血清中PGLYRP-1 高于對照組（P＜0.05），類風(fēng)濕組與對照組血清中SOST 的表達(dá)量無明顯差異（P＞0.05），表1。

表1 3組受試人員血清中IL-7、PGLYRP-1、SOST的表達(dá)量比較

2.2 3 組受試者血清中ⅠL-7、PGLYRP-1、SOST 的ROC 曲線、AUC、靈敏度、特異度和約登指數(shù)3 組ROC曲線見圖1。IL-7在類風(fēng)濕組患者與非類風(fēng)濕組患者中的陽性臨界值為14.51 pg/mL，在非類風(fēng)濕組與對照組中的陽性臨界值為14.96 pg/mL，在類風(fēng)濕組患者與對照中的陽性臨界值為21.55 pg/mL。PGLYRP-1 在類風(fēng)濕組患者與非類風(fēng)濕組患者中的陽性臨界值為113.4（pg/mL） ，在非類風(fēng)濕組患者與對照組中的陽性臨界值為104.29 pg/mL，在類風(fēng)濕組患者與對照組中的陽性臨界值為55.38 pg/mL。SOST 在類風(fēng)濕組患者與非類風(fēng)濕組患者中的陽性臨界值為35.47 pg/mL，在類風(fēng)濕組患者與對照組中的陽性臨界值為35.93 pg/mL。

圖1 血清IL-7, PGLYRP‐1, SOST的ROC曲線

2.3 血清中ⅠL-7, PGLYRP-1, SOST 聯(lián)合診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的為真陽性，未患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（即82 例非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和82例健康體檢者）的為真陰性。以IL-7的陽性臨界值14.51 pg/mL、PGLYRP-1 的陽性臨界值113.4 pg/mL、SOST 的陽性臨界值35.47 pg/mL 為診斷標(biāo)準(zhǔn)，三者均滿足為聯(lián)合診斷陽性，反之則為聯(lián)合診斷陰性。血清中IL-7, PGLYRP-1, SOST 聯(lián)合對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷的的靈敏度為91.46%（75/82），特異度為75.61%（124/164），準(zhǔn)確度為80.89%（199/246），表3。

表3 血清中IL-7, PGLYRP-1, SOST聯(lián)合診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

2.4 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎危險(xiǎn)因素的條件logistic 逐步回歸分析 將均大于IL-7 陽性臨界值14.51 pg/mL、PGLYRP-1陽性臨界值113.4 pg/mL、SOST陽性臨界值35.47 pg/mL的賦值為1，其余的賦值為0，進(jìn)行非條件logistic 逐步回歸分析。結(jié)果顯示血清中IL-7,PGLYRP-1, SOST 的表達(dá)水平均是患類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的重要危險(xiǎn)因素，表4。

表4 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎危險(xiǎn)因素的非條件logistic逐步回歸分析結(jié)果

3 討論

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是慢性系統(tǒng)性自身免疫疾病，其特征是滑膜持續(xù)發(fā)炎，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)破壞和變形。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是最常見的全身性炎性關(guān)節(jié)炎[9]。婦女、吸煙者和有此病史的人最常受到影響[10]。在本研究中，利用ELISA 檢測類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者、非類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者和健康體檢者血清中IL-7、PGLYRP-1、SOST 的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)血清中IL-7、PGLYRP-1、SOST 聯(lián)合對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診斷的的靈敏度為91.46%，特異度為75.61%，準(zhǔn)確度為80.89%。

SOST 通過調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞活性，Wnt 途徑在控制骨形成方面中起重要作用[11]。本研究發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中的SOST均低于非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和健康體檢者（P＜0.05）；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者與非類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的SOST的靈敏度和特異度分別為98% 和61%。SOST 是Wnt 通路的重要調(diào)節(jié)因子，通過阻斷Wnt與其受體的結(jié)合從而抑制骨形成[12-14]。Wnt拮抗劑如分泌的卷曲蛋白相關(guān)蛋白-1 和SOST 的表達(dá)可以在炎癥期間誘導(dǎo)，并且還可以通過抑制骨形成來抑制骨侵蝕的修復(fù)。阻斷Wnt 等標(biāo)志物（如SOST）會引發(fā)骨質(zhì)侵蝕的修復(fù)甚至愈合，提示W(wǎng)nt 通路在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中起重要作用。

表2 血清IL-7、PGLYRP-1、SOST診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的ROC曲線分析

PGLYRP-1 是一種分泌的循環(huán)蛋白，通過激活先天免疫機(jī)制來結(jié)合肽聚糖并促進(jìn)炎癥[15]。在本研究中，發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中的PG‐LYRP-1高于非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和健康體檢者（P＜0.05）；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者與非類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的PGLYRP-1 診斷靈敏度分別為86% 和89%。PGLYRP-1 幾乎全部存在于中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的分泌顆粒中，其目標(biāo)肽聚糖是已知存在于人動脈粥樣硬化瘤中的細(xì)菌壁成分[16]，但關(guān)于PGLYRP 的潛在作用的研究很少。目前，有研究發(fā)現(xiàn)血清中PGLYRP-1 水平與人類普遍存在的亞臨床動脈粥樣硬化有關(guān)[17]，提示PGLYRP-1 可能是動脈粥樣硬化和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的潛在雙向標(biāo)志物。

IL-7 是人體中由IL7R 基因編碼的蛋白質(zhì)[18]。本研究，發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中的IL-7低于非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和健康體檢者（P＜0.05）；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者與非類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的IL-7診斷靈敏度和特異度分別為90% 和72%。該蛋白質(zhì)是IL - 7R 和胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素受體（TSLPR）的一部分，它們嵌入免疫系統(tǒng)細(xì)胞的細(xì)胞膜中[19-22]。IL-7R 存在于B 細(xì)胞和T 細(xì)胞以及產(chǎn)生它們的早期血液形成細(xì)胞中。TSLPR 存在于幾種類型的免疫細(xì)胞中。在早期的血液形成細(xì)胞中，通過IL-7R 的信號傳導(dǎo)確保了成熟B 細(xì)胞和T 細(xì)胞的發(fā)育。IL-7R信號傳導(dǎo)還刺激這些細(xì)胞的后期生長和分裂（增殖）和存活。同樣，TSLPR 與細(xì)胞因子TSLP 相互作用，觸發(fā)一系列支持多種免疫系統(tǒng)細(xì)胞增殖和成熟的信號。提示IL-7 可以在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者細(xì)胞中誘導(dǎo)許多促炎活性。

綜上所述，血清中IL-7、PGLYRP-1、SOST 的表達(dá)量檢測可作為診斷類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的潛在標(biāo)志物。