夏裕發(fā)

(1.漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司,福建 漳州363000;2.福建省片仔癀天然醫(yī)藥研發(fā)企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,福建 漳州363000)

質(zhì)量源于設(shè)計(jì)(Quality by design,QbD)是基于充分的科學(xué)知識(shí)和質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理,強(qiáng)調(diào)“以終為始”的科研方法,其核心是以預(yù)定目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況(Quality target product profile,QTPP)為研發(fā)起點(diǎn),在辨識(shí)產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性(Critical quality attributes,CQAs)和關(guān)鍵工藝參數(shù)(Critical process parameters,CPPs)基礎(chǔ)上,建立能滿足產(chǎn)品性能且工藝穩(wěn)定的設(shè)計(jì)空間[1-3]。QbD理念在制藥等多個(gè)行業(yè)已被廣泛應(yīng)用,但少有基于QbD理念開(kāi)發(fā)保健食品顆粒劑成型工藝的報(bào)道。本研究以QbD理念為指導(dǎo),以具有袪黃褐斑保健功能的祛斑方(由丹參、當(dāng)歸、白芷、丹皮、香附等原料組成)提取膏為模型,根據(jù)保健食品法規(guī)要求和配方特點(diǎn)建立目標(biāo)產(chǎn)品(祛斑顆粒)質(zhì)量概況和產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性,應(yīng)用失效模型與影響分析法(the Failure mode and effects analysis,FMEA)辨識(shí)關(guān)鍵工藝參數(shù),以成型率、溶化性、吸濕率、脆碎度、標(biāo)志性成分含量等多指標(biāo)[4-6]綜合評(píng)價(jià)祛斑顆粒成型工藝,旨在為保健食品顆粒劑的成型工藝設(shè)計(jì)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

e2695型高效液相色譜儀(waters公司,美國(guó));KQ-300E型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);HLSY-10B型快速攪拌制粒機(jī)(上海心意制藥技術(shù)裝備公司);YK60型搖擺式顆粒機(jī)(上海天祥健臺(tái)制藥機(jī)械有限公司);DHG-A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥

袪斑方提取膏(自制,漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司);丹酚酸B對(duì)照品(批號(hào):111562-201514,中國(guó)食品藥品檢定研究院);甲醇、乙腈為色譜純;水為超純水;其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 建立祛斑顆粒QTPP和CQAs

根據(jù)GB 16740-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)·保健食品》及保健食品相關(guān)法規(guī),結(jié)合祛斑方特點(diǎn)、擬開(kāi)發(fā)產(chǎn)品食用量、食用方法等信息,進(jìn)行前瞻性總結(jié),建立祛斑顆粒的QTPP,見(jiàn)表1。根據(jù)表1祛斑顆粒的QTPP,結(jié)合前期研究經(jīng)驗(yàn)和預(yù)實(shí)驗(yàn),建立本產(chǎn)品的CQAs,見(jiàn)表2。

表1 祛斑顆粒QTPP

表2 祛斑顆粒CQAs

2.2 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

由兩位保健食品固體制劑研究員應(yīng)用失效模型與影響分析(FMEA),從失效形式的嚴(yán)重度(S)、失效發(fā)生的概率(P)和可檢測(cè)性(D)3個(gè)方面對(duì)祛斑顆粒成型過(guò)程中的影響因素進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,確定S、P與D的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),并分別以1、2、3為 衡 量 值,最 后 以S、P、N值 的 乘 積 代 表 風(fēng) 險(xiǎn) 度(RPN),RPN<6且S≠3為低風(fēng)險(xiǎn),6≤RPN<18為中風(fēng)險(xiǎn),RPN≥18為高風(fēng)險(xiǎn)[3,7-8]。結(jié)果顯示,輔料種類、用量以及干燥溫度等影響袪斑顆粒的成型性、有效性的風(fēng)險(xiǎn)最大,屬于高風(fēng)險(xiǎn)因素;而其他失效形式可以通過(guò)同一實(shí)驗(yàn)條件或多次平行實(shí)驗(yàn)控制風(fēng)險(xiǎn),屬于低風(fēng)險(xiǎn)因素。因此,可以對(duì)輔料種類、用量以及干燥溫度進(jìn)行研究和控制。評(píng)估結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 顆粒成型過(guò)程風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

2.3 實(shí)驗(yàn)研究

2.3.1 祛斑顆粒的制備 根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),將祛斑方提取膏與輔料濕法混合制成軟材,軟材經(jīng)搖擺式顆粒機(jī)(16目篩)制成濕顆粒,70℃干燥3 h,搖擺式顆粒機(jī)整粒(14目篩),混勻即得,待檢。

2.3.2 評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇 制粒過(guò)程中,以顆粒成型率、吸濕率、溶化性、脆碎度等為指標(biāo),綜合制軟材、制粒情況以及顆粒沖泡后水液的口感、外觀優(yōu)選輔料種類和用量;在優(yōu)選干燥溫度時(shí),增加標(biāo)志性成分含量檢測(cè)指標(biāo)。

(1)成型率。參照《中國(guó)藥典》0982粒度和粒度分布測(cè)定法[9],稱取整粒后的顆粒約100 g(m1),采用雙篩分法,使顆粒先后過(guò)1號(hào)篩、5號(hào)篩,取能過(guò)1號(hào)篩但不能過(guò)5號(hào)篩的顆粒,稱量(m2)。

成型率計(jì)算公式:成型率=m2/m1×100%。

(2)吸濕率。參照《中國(guó)藥典》9103藥物引濕性試驗(yàn)指導(dǎo)原則[10],將干燥具塞玻璃稱量瓶開(kāi)蓋,置于下部放有飽和氯化銨溶液的玻璃干燥器24 h,稱定質(zhì)量(m3),取袪斑顆粒平鋪于稱量瓶?jī)?nèi),稱定質(zhì)量(m4)后置于干燥器內(nèi),于第24 h蓋好稱量瓶蓋子,稱定其質(zhì)量(m5),計(jì)算吸濕率。

吸濕率計(jì)算公式:吸濕率=(m5-m4)/(m4-m3)×100%。

(3)溶化性。稱取顆粒9g,加入70~75℃熱水150 m L,使用磁力攪拌器勻速攪拌,記錄顆粒全部溶化所需時(shí)間,允許溶液有輕微渾濁[5]。

(4)脆碎度。稱取顆粒約25 g(m6),放入脆碎度測(cè)定儀轉(zhuǎn)鼓內(nèi),設(shè)置轉(zhuǎn)速為25 r/min,持續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)4 min,取出,過(guò)5號(hào)篩,稱定通過(guò)5號(hào)篩顆粒重量(m7)[6]。

脆碎度計(jì)算公式:脆碎度=m7/m6×100%。

(5)標(biāo)志性成分轉(zhuǎn)移率的測(cè)定。色譜條件:填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠;流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸(22∶78);柱溫為25℃;流速為1 m L/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm。對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照色譜,見(jiàn)圖1、圖2、圖3。

圖1 丹酚酸B對(duì)照品HPLC色譜

圖2 供試品HPLC色譜

圖3 缺丹參陰性樣品HPLC色譜

對(duì)照品溶液的制備:取丹酚酸B對(duì)照品適量,精密稱定,加80%甲醇溶液制成每1 m L含0.1 mg的溶液,即得。

供試品溶液的制備:取本品研細(xì),取約1 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加入80%甲醇溶液25 m L,密塞,稱定重量,超聲處理(功率300 W,頻率40 k Hz)30 min,放冷,用80%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

測(cè)定法:精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀,測(cè)定。

2.4 結(jié)果與分析

2.4.1 輔料種類選擇 顆粒劑常用輔料有蔗糖、糊精、可溶性淀粉、乳糖等,蔗糖口感佳,經(jīng)濟(jì)易得,早期開(kāi)發(fā)的中藥顆粒多以蔗糖搭配適量糊精作為輔料,但蔗糖具有較強(qiáng)的引濕性,且不太適合當(dāng)前保健食品提倡的少糖、無(wú)糖理念;糊精、可溶性淀粉均是淀粉水解的產(chǎn)品,有很好的吸膏能力,但糊精、可溶性淀粉溶于熱水后,水液透明度欠佳;可溶性淀粉的顆粒成型率高于糊精,而引濕性低于糊精[11];乳糖是常用的代糖輔料,性質(zhì)穩(wěn)定,無(wú)引濕性,有一定的甜度,溶化后的水液透明,中藥無(wú)糖顆粒產(chǎn)品和中藥配方顆粒多以乳糖為輔料,但單用乳糖作為輔料,顆粒成型率不足。因此本實(shí)驗(yàn)針對(duì)中藥材提取膏量多質(zhì)黏、易引濕的特點(diǎn),和盡量保證袪斑顆粒沖泡后水液透明度,綜合可溶性淀粉的吸膏能力和乳糖水溶液的透明性,選擇可溶性淀粉與乳糖的混合物作為輔料。

2.4.2 輔料用量考察 按以下表4中輔料用量進(jìn)行實(shí)驗(yàn)安排,按“2.3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行制粒,觀察不同輔料比例、用量對(duì)制軟材、制粒情況、成型率、溶化性、吸濕率、脆碎度等的影響,結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果顯示,提取膏∶乳糖∶可溶性淀粉(2∶4∶2)時(shí),軟材適中,易制粒,且平衡了其他實(shí)驗(yàn)組顆粒成型率和溶解液外觀,屬于各實(shí)驗(yàn)組中工藝最優(yōu)者。

表4 輔料用量考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4.3 干燥溫度考察 按上述優(yōu)選的輔料配比制成濕顆粒,平均分成4份,分別置于溫度為50℃、60℃、70℃、80℃的鼓風(fēng)干燥箱中干燥,考察干燥溫度對(duì)成型率、溶化性、吸濕率、脆碎度和丹酚酸B含量的影響,結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果顯示,干燥溫度對(duì)顆粒的成型率、溶化性、吸濕性以及脆碎度影響不明顯,高溫會(huì)影響丹酚酸B的穩(wěn)定性,因此干燥溫度不宜高于70℃。

表5 干燥溫度考察試驗(yàn)結(jié)果

2.4.4 成型工藝驗(yàn)證 取同一批次提取膏3份,按提取膏∶乳糖∶可溶性淀粉(2∶4∶2)稱取乳糖、可溶性淀粉。將祛斑方提取膏與乳糖、可溶性淀粉濕法混合制成軟材,軟材經(jīng)搖擺式顆粒機(jī)(16目篩)制成濕顆粒,70℃干燥水分低于3%,搖擺式顆粒機(jī)整粒(14目篩),混勻即得,待檢。結(jié)果3批制粒過(guò)程順利,成型率、溶化性等指標(biāo)均符合預(yù)定要求,且批間沒(méi)有顯著差異,表明優(yōu)選的配方工藝穩(wěn)定、可行性較高。

3 討論

祛斑方是由丹參、當(dāng)歸、白芷、丹皮、香附等組成,具有活血通經(jīng)、疏肝理氣、補(bǔ)血養(yǎng)血功效,主要針對(duì)胞宮失常、肝氣郁結(jié)導(dǎo)致的黃褐斑設(shè)計(jì)。祛斑方提取膏是經(jīng)70%乙醇提取、濃縮得到的提取膏,前期的大鼠、小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示安全無(wú)毒。本實(shí)驗(yàn)采用QbD理念,通過(guò)分析保健食品法規(guī)和祛斑方特點(diǎn),以保健食品顆粒劑為預(yù)設(shè)的目標(biāo)產(chǎn)品,在建立目標(biāo)產(chǎn)品QTPP和CQAs的基礎(chǔ)上,采用FMEA法對(duì)關(guān)鍵工藝變量進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估,結(jié)合單因素考察,系統(tǒng)研究袪斑顆粒的成型工藝,并完成工藝驗(yàn)證。但顆粒成型不是本研究的重點(diǎn),應(yīng)用QbD理念有效開(kāi)發(fā)目標(biāo)產(chǎn)品才是本研究的目標(biāo),因此本研究并未使用復(fù)雜的星點(diǎn)設(shè)計(jì)等方法設(shè)計(jì)空間,而是通過(guò)直觀的單因素考察,使顆粒滿足目標(biāo)產(chǎn)品要求,在一定程度上達(dá)到工藝最優(yōu)。在篩選輔料時(shí),考慮消費(fèi)者的依從性,將顆粒的溶化性、外觀、滋、氣味、成型性等作為考察的主要指標(biāo);同時(shí)參考片劑“脆碎度”檢查方法,模仿顆?；旌稀⒎盅b、運(yùn)輸過(guò)程中的碰撞過(guò)程,保證上架產(chǎn)品粒度符合要求。祛斑方提取膏氣味香,味淡,選用乳糖既能改善口感,又不需另添甜味劑,添加適量可溶性淀粉輔助乳糖提高祛斑顆粒成型率,兩者聯(lián)用能有效互補(bǔ)顆粒溶化性和成型性。本研究3批成型工藝驗(yàn)證結(jié)果顯示,所用工藝制得的顆粒符合預(yù)設(shè)的目標(biāo)產(chǎn)品,成型工藝穩(wěn)定可行,為保健食品顆粒劑的成型工藝設(shè)計(jì)提供了參考依據(jù)。