陳倩倩，雷 晴，楊 婷，向浩瑜，肖 敏*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610072；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072)

七星丹是蜀中瘍醫(yī)大師文琢之教授苦心研究的成果，具有悠久的歷史，已在成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院應(yīng)用于臨床 60 余年，治愈了數(shù)以萬計的皮膚慢性潰瘍患者，臨床療效滿意[1]。近年來對于丹藥外用的安全性越發(fā)重視，尤其是含汞的丹藥，外用含汞丹藥具有廣譜殺菌、消炎、袪腐生肌等作用，但缺乏臨床上相關(guān)的毒副作用檢測以及安全性研究。常見的不良反應(yīng)包括皮膚過敏反應(yīng)、惡心、腹痛等，重則可出現(xiàn)肝腎功能損傷及多器官衰竭[2-3]。因此我們在前期臨床研究的基礎(chǔ)上，擬對七星丹治療慢性皮膚潰瘍的安全性進行實驗研究，為臨床推廣打下基礎(chǔ)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物

SPF級SD大鼠，雄性，體重 180～200 g。由成都達碩實驗動物有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SYXK(川)2014-189。

1.2 藥品試劑

七星丹及九一丹均由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供。七星丹藥物組成：煅石膏、寒水石各30 g，硼砂、朱砂、輕粉、銀珠、冰片各9 g；九一丹藥物組成：紅升丹3 g，鍛石膏27 g；青霉素鉀溶液(生產(chǎn)批號：(2012)120151254)；0.8%硫化鈉(生產(chǎn)批號：CAS1313-84-4)；10%水合氯醛(生產(chǎn)批號：CAS302-17-0)；50%冰醋酸溶液(生產(chǎn)批號：110314)；1∶5 000呋喃西林溶液(生產(chǎn)批號：040804)。

1.3 檢驗試劑

Mouse ALT ELISA KIT，規(guī)格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司(生產(chǎn)批號：ZC-38191)；Mouse AST ELISA KIT，規(guī)格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司(生產(chǎn)批號：ZC-38192)；Mouse BUN ELISA KIT，貨號：ZC-38534，規(guī)格：48孔/盒，上海茁彩生物科技有限公司生產(chǎn)。

2 研究方法

2.1 大鼠慢性潰瘍模型的建立[4]

健康 SD 大鼠 15 只，實驗室適應(yīng)飼養(yǎng)3天后，肌注青霉素鉀溶液(4 000 U/只)，連續(xù)4 d，防止感染。以8%硫化鈉給大鼠背部脫毛，腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.3 mL/100 g)，在背部制備1.5 cm×2 cm缺損性創(chuàng)面，之后以50%冰醋酸溶液涂創(chuàng)面(1次/d，7 d)，形成慢性皮膚潰瘍模型。

2.2 實驗方法

按體質(zhì)量將造模成功的大鼠運用區(qū)組隨機的方法分為3組：空白對照組、九一丹組、七星丹組。一周后開始給藥，給藥前用生理鹽水棉球?qū)⑺袧兇笫蟮膭?chuàng)面清洗，再以1∶5 000呋喃西林溶液清潔創(chuàng)面；九一丹組外用九一丹18.75 mg/cm2、七星丹組外用七星丹37.5 mg/cm2“飛”到潰瘍面上[5]，兩層消毒干紗布覆蓋后用醫(yī)用膠帶固定，每天固定時間換藥1次(早上8點)；空白組只采取呋喃西林溶液外涂；各組大鼠連續(xù)給藥28 d。

2.3 檢測指標

2.3.1 生化指標檢測 檢測大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的含量。取大鼠腹主動脈5～8 mL(不加抗凝劑)，分離血清，采用ELISA檢測大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的含量。

2.3.2 大鼠肝臟、腎臟組織病理學(xué)檢測 最后 1 次給藥后的第 2 天，給大鼠腹腔注射10%水合氯醛(0.3 mL /100 g)麻醉處死，取出肝臟、腎臟并剝除脂肪和結(jié)締組織，用生理鹽水沖洗，濾紙將水分吸干，再放入-20℃冰箱中保存。按照常規(guī)方法制備石蠟切片，光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟、腎臟組織病理改變。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 七星丹對大鼠生化指標的影響

觀察七星丹對大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)的影響。與空白組相比，各組大鼠(n=5)血清中ALT、AST、BUN濃度無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，均在正常范圍內(nèi)，表明外用七星丹對SD大鼠血生化指標未造成不良影響。見表1。

表1 各組大鼠血清中ALT、AST、BUN濃度的變化

3.2 七星丹對大鼠肝臟、腎臟的影響

大鼠肝臟及腎臟HE染色后，觀察結(jié)果如下。

(1)空白組。肝臟：肝臟組織被膜完整，各小葉間分界不明顯，肝索排列較整齊；肝小葉內(nèi)肝細胞核大而圓，核仁明顯，部分見雙核；其中2例(2/5)見肝細胞輕微或輕度空泡變性，胞質(zhì)染色不均勻，內(nèi)見數(shù)量不等的空泡；肝竇無明顯擴張、瘀血或炎細胞浸潤；門管區(qū)內(nèi)小葉間靜脈、動脈和膽管結(jié)構(gòu)完整清晰；未見其他明顯病理變化(見圖1、圖2)。腎臟：腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)區(qū)腎小球形態(tài)正常，未見明顯毛細血管基底膜增厚或炎性滲出；腎小管排列緊密，管狀結(jié)構(gòu)規(guī)則，輪廓清晰，無明顯萎縮或擴張；腎小管上皮細胞形態(tài)正常，細胞呈單層排列，排列整齊緊密，胞核大而圓，核仁明顯，胞質(zhì)染色較為均勻；間質(zhì)內(nèi)未見明顯充血、出血、炎細胞浸潤或纖維組織增生；髓質(zhì)區(qū)集合管排列緊密，結(jié)構(gòu)基本正常；未見明顯病理變化(見圖1、圖2)。

(2)九一丹組。肝臟：肝臟組織被膜完整，各小葉間分界不明顯，肝索排列較整齊；其中3例(3/5)見肝細胞輕微空泡變性，1例(1/5)中央靜脈周圍見少量肝細胞小灶狀壞死，胞核固縮或碎裂，胞質(zhì)崩解，細胞形態(tài)模糊不清；肝竇無明顯擴張、瘀血或炎細胞浸潤；門管區(qū)結(jié)構(gòu)完整清晰；未見其他明顯病理變化(見圖1、圖2)。腎臟：腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)區(qū)腎小球形態(tài)正常，未見明顯毛細血管基底膜增厚或炎性滲出；其中3例(3/5)少量腎小管上皮細胞變性、壞死胞質(zhì)染色不均勻，胞核固縮、碎裂或溶解消失；2例(2/5)少量腎小管上皮細胞增生，可見細胞核腫大，排列緊密，數(shù)量增多，核分裂象不明顯；其中1例(1/5)間質(zhì)內(nèi)可見少量纖維組織增生伴淋巴細胞浸潤；髓質(zhì)區(qū)集合管排列緊密，結(jié)構(gòu)基本正常；未見明顯病理變化(見圖1、圖2)。

(3)七星丹組。肝臟：肝臟組織被膜完整，各小葉間分界不明顯，肝索排列較整齊；其中1例(1/5)見肝細胞輕微空泡變性，3例(3/5)少量肝細胞呈點狀或小灶狀壞死，胞核固縮或碎裂，胞質(zhì)崩解，細胞形態(tài)模糊不清；其中1例(1/5)肝竇輕微擴張、瘀血；門管區(qū)結(jié)構(gòu)完整清晰；未見其他明顯病理變化(見圖1、圖2)。腎臟：腎臟組織被膜完整，皮質(zhì)和髓質(zhì)分界清晰，皮質(zhì)區(qū)腎小球形態(tài)正常，未見明顯毛細血管基底膜增厚或炎性滲出；2例(2/5)少量腎小管上皮細胞變性，其中1例(1/5)少量腎小管上皮細胞壞死及增生；1例(1/5)間質(zhì)內(nèi)毛細血管輕微充血；髓質(zhì)區(qū)集合管排列緊密，結(jié)構(gòu)基本正常；未見明顯病理變化(圖1、圖2)。

圖1 各組大鼠肝臟HE染色結(jié)果

圖2 各組大鼠腎臟HE染色結(jié)果

4 討論

慢性皮膚潰瘍(CSU)因其遷延不愈或愈后極易復(fù)發(fā)，故稱之為難治性潰瘍，且多合并下肢靜脈曲張、糖尿病等疾病，給患者帶來極大的精神折磨和身體摧殘。慢性皮膚潰瘍病因較為復(fù)雜，目前尚未有明確的治療指南，現(xiàn)階段治療手段包括：①藥物治療(系統(tǒng)和局部)；②外科手術(shù)；③高壓氧療；④生物治療等[6]。其中大部分治療花費較為昂貴，患者及其家屬需承擔較大的經(jīng)濟壓力。

七星丹作為我院皮膚科專家文琢之教授的研究成果，主要用于臨床治療慢性皮膚潰瘍，具有操作簡易、療效確切的優(yōu)點。該方由煅石膏、寒水石、硼砂、朱砂、輕粉等藥物組成，對各類潰瘍都有很強的解毒消腫、生肌斂瘡作用，同時可促進創(chuàng)面愈合，明顯縮短患者的治療時間[7]。

外用丹藥在當今的臨床治療上越來越常見，也是中醫(yī)特色治療手段之一。外用丹藥包含的藥物常涉及雄黃、硫黃、朱砂、鉛丹、砒石等“有毒”中藥，故其安全性是不容忽視的問題，需要引起臨床醫(yī)師的高度重視[8]。七星丹中朱砂的主要成分為硫化汞(Hg S)，清·黃元御《長沙藥解》有言：“朱砂，味甘，微寒，入手少陰心經(jīng)，善安神魂，能止驚悸。”此外朱砂還有收斂生肌的作用?，F(xiàn)代臨床研究表明，外用朱砂具有抑制細菌生長、減輕炎癥反應(yīng)、促進生長因子分泌等作用[9]，但其在臨床上可能因使用的劑量、創(chuàng)面面積、治療時間等導(dǎo)致汞蓄積。汞在不同形態(tài)下導(dǎo)致的汞中毒所表現(xiàn)的臨床癥狀有所不同，其中以有機汞毒性最大，因其在全身可廣泛分布，可造成嚴重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及周圍神經(jīng)系統(tǒng)損傷[9]；朱砂等含汞藥物是以無機汞的形式存在，其對機體造成的損傷主要是損傷肝腎等代謝相關(guān)臟器。張伊莉等[10]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)皮膚吸收所導(dǎo)致的汞中毒以亞急性中毒為主，皮膚過敏反應(yīng)并不突出，部分患者首發(fā)疾病為腎系病。在治療慢性皮膚潰瘍時，七星丹中的含汞成分因皮膚的不完整性會通過皮膚吸收入血，若潰瘍創(chuàng)面過大、治療時間過長等將會在相應(yīng)的器官中產(chǎn)生汞蓄積，尤其是蓄積在腎臟的近端小管和集合管[9、11-12]。因此，確保外用七星丹的安全性十分必要。

本研究以客觀數(shù)據(jù)揭示了外用丹藥——七星丹治療皮膚慢性潰瘍的有效性和安全性，為臨床提供了可資借鑒的治療方法，為繼承和發(fā)揚中醫(yī)外科學(xué)盡綿薄之力。