衛(wèi)美蓉，王笑峰，羅 兵

胃癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，病死率較高[1]。EBV相關(guān)胃癌(EBV-associated gastric carcinoma, EBVaGC)在胃癌中的占比較高，早期非侵入性診斷方法缺乏及胃癌細胞耐藥性是引起胃癌患者病死率高的主要原因。因此，為了提高胃癌患者的早期診斷率，準確預(yù)測其治療效果及預(yù)后，尋找有效的新型分子標志物成為亟需解決的問題。

長鏈非編碼RNA(long non coding RNA, LncRNA)是一種不具有編碼蛋白質(zhì)的能力，且長度超過200個堿基的RNA分子[2]。其表達失調(diào)與人類多種腫瘤相關(guān)，是當前研究的熱點[3-4]。通過微陣列基因芯片和RT-PCR等檢測方法對胃癌組織進行分析，研究發(fā)現(xiàn)多種LncRNA均出現(xiàn)異常表達。在胃癌的惡性生物學(xué)行為方面，參與腫瘤基因調(diào)控及細胞耐藥性的LncRNA倍受關(guān)注，有望成為胃癌診斷、預(yù)后評估的新型標志物和腫瘤治療的潛在靶點。該文對與胃癌及EBVaGC關(guān)系密切的LncRNA研究進展作一綜述，擬為臨床胃癌的早期診斷、抑制轉(zhuǎn)移、耐藥性等提供新的思路。

1 胃癌相關(guān)LncRNA

近年研究發(fā)現(xiàn)，多種LncRNA在胃癌細胞中存在異常表達。其異常表達均可通過不同的途徑實現(xiàn)改變生物遺傳信息的目的：如LncRNA作為致癌或抑癌基因，通過參與microRNA信號傳導(dǎo)途徑，進而影響胃癌細胞的增殖、浸潤和轉(zhuǎn)移(表1)。

表1 胃癌相關(guān)LncRNA

1.1 促進胃癌細胞增殖與組織侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的LncRNA

1.1.1ZFAS1 鋅指結(jié)構(gòu)反義轉(zhuǎn)錄本1(zinc finger antisense 1, ZFAS1)是一個轉(zhuǎn)錄自蛋白質(zhì)編碼基因Znfx1 5′端附近反義鏈的LncRNA，位于染色體20q13.13上，最初被認為是乳腺肺泡發(fā)育和上皮細胞分化的調(diào)節(jié)因子。近期研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者的細胞、血清、血清外切酶體、腫瘤組織中，均可出現(xiàn)ZFAS1高表達。高表達的ZFAS1可通過調(diào)控上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進胃癌細胞的增殖和遷移。同時，研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)ZFAS1可存在于血清外切酶體中，并通過外切酶體的傳播，增強胃癌細胞的增殖和遷移[5]。

1.1.2Linc00152 最初在研究肝癌中發(fā)現(xiàn)的Linc00152基因位于Ch2p11.2，長度為828 nt，具有調(diào)控基因表達的功能，也被稱為細胞骨架調(diào)節(jié)因子。Huang等[6]研究發(fā)現(xiàn)Linc00152在胃癌組織中的表達高于鄰近正常組織，且下調(diào)Linc00152表達，胃癌細胞的增殖也受到抑制。進一步深入分析發(fā)現(xiàn)Linc00152通過降低對miR-193a-3p的調(diào)節(jié)，增強Mcl-1基因的表達，從而發(fā)揮促進胃癌細胞增殖的作用：提示Linc00152可能是預(yù)測胃癌預(yù)后新的生物學(xué)標志物。

1.1.3GHET1 胃癌中GHET1基因位于染色體7q36.1，長度為1 913 bp，于2013年最先被Yang等發(fā)現(xiàn)在胃癌中過表達，且其高表達對胃癌的進展有顯著促進作用。然而，GHET1基因下調(diào)可通過下調(diào)相關(guān)周期蛋白，抑制細胞的增殖、入侵和遷移活動，最終增強細胞凋亡作用，即低表達的GHET1通過干擾胃癌細胞周期通路，最終影響胃癌的發(fā)生、發(fā)展[7]。

1.1.4TINCR TINCR基因位于人類第19號染色體上，長度為3.7 kb，具有促進表皮細胞分化的作用。近年，研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中TINCR的表達水平顯著高于癌旁組織，且TINCR可通過轉(zhuǎn)錄后機制促進胃癌細胞的表皮分化。TINCR還與雙鏈RNA結(jié)合蛋白STAU1有較強的結(jié)合力，其可形成1個含有25個核苷酸的“TINCR box”復(fù)合體，增強mRNA的穩(wěn)定性，最終影響胃癌的形成。Chen等[8]研究發(fā)現(xiàn)TINCR通過與miR-375競爭性調(diào)控3-磷酸肌醇依賴性蛋白激酶-1，進而調(diào)控胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

1.1.5UCA1 其是一種在胚胎組織中普遍表達的LncRNA，在成人心臟和脾臟組織中也有少量表達。有研究發(fā)現(xiàn)，在多種腫瘤組織中均可見UCA1過表達，且其表達水平與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移行為有關(guān)。如UCA1通過促進Cyclin D1的表達參與胃癌的增殖和細胞周期進程。Gu等[9]通過分析UCA1的功能學(xué)研究，也證實UCA1可通過負調(diào)控miR-590-3p的表達促進胃癌細胞的增殖。

1.1.6TUG1 其最初被發(fā)現(xiàn)為?；撬嶙饔糜谛∈笠暰W(wǎng)膜細胞后，表達上調(diào)的基因。TUG1定位于人染色體22q12.2，由3個外顯子組成，全長7.1 kb。有研究發(fā)現(xiàn)，TUG1能夠通過調(diào)控組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶2介導(dǎo)的甲基化調(diào)節(jié)效應(yīng)因子，沉默抑癌基因的表達，從而導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中TUG1的表達明顯高于相應(yīng)正常組織。進一步分析發(fā)現(xiàn)胃癌組織中TUG1表達與p27表達呈負相關(guān)，而與Cyclin D1表達呈正相關(guān)。TUG1可能通過抑制p27的表達，增加Cyclin D1表達，從而促進胃癌細胞及組織的增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移[10]。

1.1.7HOTAIR 其只存在于哺乳動物中，參與基因組修飾，且位于HOXC11和HOXC12之間，是第一個被證實在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用的LncRNA。HOTAIR在胃癌組織中表達顯著高于癌旁組織，其高表達可能在胃癌細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。進一步研究表明，LncRNA HOTAIR通過清除miR-1277-5p和上調(diào)COL5A1的表達最終促進胃癌的生長和轉(zhuǎn)移[11]。

1.1.8RMRP 其全長277 nt，位于人染色體9p13.3。在人組織中高表達的LncRNA分子中，RMRP最早是在研究人軟骨、毛發(fā)發(fā)育不全時被發(fā)現(xiàn)的，其主要存在于細胞核和核仁中，少量存在于線粒體中。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的組織、血漿和胃液中RMRP的表達與對照組相比顯著不同，且其表達水平與腫瘤的分型和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。如RMRP可通過調(diào)節(jié)Cyclin D2的表達，調(diào)節(jié)胃癌細胞周期。過表達的RMRP可促進胃癌細胞的生長[12]。

1.1.9CCAT1 其在結(jié)腸癌的差異分析研究中被鑒定，其基因定位于染色體8q24.21，長度為11.9 kb。研究者利用實時熒光定量PCR對CCAT1的表達進行檢測，并分析CCAT1的表達量與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：CCAT1在胃癌患者血清中呈過表達，且表達強度與胃癌組織腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)。深入研究還發(fā)現(xiàn)CCAT1通過對miR-219-1的負調(diào)節(jié)，可促進胃癌的侵襲與轉(zhuǎn)移[13]。

1.1.10CCAT2 其定位于1個高度保守的富含調(diào)控元件標志物的染色體8p24擴增子區(qū)域，該區(qū)域是發(fā)生腫瘤易感性基因變異的重要區(qū)域。Wang等[14]研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中CCAT2的表達相比臨近的非癌組織明顯升高，且CCAT2高表達與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等呈正相關(guān)。這一結(jié)果表明：CCAT2可通過調(diào)控E-cadherin表達及調(diào)節(jié)Zeb2、vimentin和N-cadherin的表達，促進胃癌上皮細胞-間充質(zhì)過渡，最終促進胃癌的形成。

1.1.11H19 其位于染色體11p15.5，全長約2.33 kb，由5個外顯子和4個內(nèi)含子組成。H19是最早發(fā)現(xiàn)與腫瘤關(guān)系密切的LncRNA，可通過調(diào)節(jié)CPT1C蛋白表達，增強胃癌組織的侵襲和遷移能力。Liu等[15]研究發(fā)現(xiàn)H19在胃癌患者的組織和胃液中呈高表達，且高表達的H19通過降低E-cadherin的水平，促進上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，從而加劇胃癌組織的侵襲、遷移能力。H19派生的miR-675作為重要調(diào)節(jié)媒介，其表達水平與H19呈正相關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)由于H19在血漿中不易被內(nèi)源性Rnase降解，其穩(wěn)定性增加，可準確反映胃癌組織中H19水平[16]：提示H19作為胃癌早期診斷的分子標志物具有更大的優(yōu)越性。

1.2 抑制胃癌細胞增殖及組織侵襲相關(guān)的LncRNA

1.2.1MEG3 其位于人類染色體14q32.3，在多種惡性腫瘤細胞的生物進程中發(fā)揮抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)該基因在許多正常組織中表達，而在各種癌細胞系中表達丟失，通過表達調(diào)節(jié)影響機體細胞代謝的進程。越來越多的實驗證明，MEG3在鄰近正常組織中的表達水平顯著升高，且過表達的MEG3可減少胃癌細胞的增殖和侵襲。如高表達的MEG3通過抑制miR-21的表達，發(fā)揮抑制胃癌細胞在體內(nèi)生長和轉(zhuǎn)移的作用[17]。

1.2.2GAS5 其是5′末端寡嘧啶類基因的成員，也是小核仁RNA宿主基因。GAS5編碼的一部分轉(zhuǎn)錄本二級RNA結(jié)構(gòu)，模仿糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件(glucocorticoid response element, GRE)。該轉(zhuǎn)錄物具有多種功能，包括調(diào)控細胞生長停滯和凋亡。因此，GAS5也被認為是潛在的腫瘤抑制因子，其下調(diào)與多種不同組織癌癥的發(fā)生有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)GAS5在胃癌組織中的表達顯著下調(diào)，其表達量與胃癌細胞的凋亡相關(guān)及通過負向調(diào)控miR-23a影響胃癌的惡性行為[18]。 該研究提示GAS5可能參與胃癌細胞的凋亡過程。

1.2.3FENDRR 2009年由Khail發(fā)現(xiàn)的FENDRR基因，定位于染色體16q24.1，是由4個外顯子編碼的長為34.3 kb的LncRNA。一項有關(guān)FENDRR在胃癌細胞中干預(yù)細胞增殖、傷口愈合，以及體外、體內(nèi)環(huán)境下組織侵襲和遷移的生物學(xué)效應(yīng)的研究顯示：與正常胃上皮細胞和相鄰非癌組織樣本相比，F(xiàn)ENDRR在胃癌細胞系和癌組織中表達量下調(diào)。FENDRR低表達意味更深的腫瘤侵襲、更高的腫瘤分期和淋巴轉(zhuǎn)移。然而，F(xiàn)ENDER過表達則通過下調(diào)FN1和MMP-2、MMP-9的表達，進而抑制體外胃癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[19]。

1.2.4ncRuPAR 2002年由美國科學(xué)家Madamanchi發(fā)現(xiàn)ncRuPAR基因位于染色體5位置，其大小為486 bp。近年，研究發(fā)現(xiàn)其可以在胚胎生長過程中通過PAR-1抑制胃癌的進展。Liu等[20]研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中ncRuPAR的表達量顯著下調(diào)，而PAR1和VEGF的mRNA水平均顯著升高。深入分析發(fā)現(xiàn)ncRuPAR的表達與胃癌組織大小、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移情況呈顯著相關(guān)。同時，ncRuPAR表達與胃癌組織中PAR1和VEGF的表達強度呈負相關(guān)，提示ncRuPAR可能通過增加兩者的表達抑制胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

2 胃癌細胞耐藥性相關(guān)的LncRNA

耐藥性是胃癌患者化療失敗的重要原因之一，也是胃癌治療研究領(lǐng)域的熱點。異常表達的LncRNA可通過靶向調(diào)控藥物外排泵分子、凋亡調(diào)節(jié)蛋白等不同途徑介導(dǎo)調(diào)控腫瘤的耐藥性。近年，有關(guān)LncRNA與胃癌細胞耐藥性關(guān)系的研究也取得了較大進展。如LncRNA可通過干擾藥物代謝的生理過程及細胞損傷修復(fù)的信號通路，最終干預(yù)腫瘤細胞的耐藥性。研究發(fā)現(xiàn)對順鉑耐藥的胃癌患者組織和細胞內(nèi)LncRNA PVT1高表達。有學(xué)者在胃癌細胞耐藥性試驗中發(fā)現(xiàn)PVT1高表達，可加強胃癌細胞對紫杉醇藥物的耐藥性；同時應(yīng)用薏苡仁油還可抑制PVT1的表達，降低多種耐藥性分子MDR1和MRP1的表達，進而抑制胃癌細胞的耐藥性。這一研究結(jié)果表明，高表達的PVT1可增強胃癌細胞對化療藥物的耐藥性[21]。Wu等[22]發(fā)現(xiàn)LncRNA UCA1通過降低miR-27b的表達，增強胃癌對多藥的耐藥性。同時還發(fā)現(xiàn)LncRNA BLACAT1可通過調(diào)節(jié)多藥耐藥性蛋白的表達，達到改變細胞內(nèi)藥物濃度，從而促進胃癌細胞對奧沙利鉑耐藥的發(fā)生。然而，LncRNA在降低胃癌細胞耐藥性方面也發(fā)揮一定作用，如LncRNA LEIDC可增加胃癌細胞對于5-氟尿嘧啶的化療敏感性，通過增強化療藥物誘導(dǎo)的胃癌細胞凋亡，加強抗腫瘤效果，從而促進胃癌患者康復(fù)[23]。

研究表明，LncRNA參與調(diào)控胃癌細胞耐藥性的主要作用：(1)通過促使藥物代謝異常而發(fā)揮耐藥性。(2)通過增強胃癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化加強腫瘤細胞轉(zhuǎn)移能力。(3)參與調(diào)控胃癌細胞凋亡過程誘導(dǎo)其產(chǎn)生耐藥性。因此，對胃癌組織中異常表達的LncRNA進行干預(yù)，對與胃癌耐藥性相關(guān)的LncRNA及其調(diào)控耐藥的分子機制進行深入分析，則成為胃癌治療領(lǐng)域研究的熱點，也為探索胃癌耐藥理論開辟新的研究領(lǐng)域。

3 EBVaGC中相關(guān)LncRNA

近年EBVaGC的發(fā)病率逐年上升，LncRNA與EBV感染的關(guān)系也成為人們研究的熱點。有研究表明，H19在EBVaGC細胞系中的表達水平比EBV陰性胃癌(EBV negative gastric carcinomas, EBVnGC)細胞系低。EBV通過調(diào)控H19啟動子區(qū)高甲基化，從而調(diào)控H19在胃癌組織中的表達水平，最終影響胃癌的發(fā)生。Wu等[24]研究發(fā)現(xiàn)EBV感染后，胃癌組織中NAPA的表達出現(xiàn)下調(diào)。即LMP1通過上調(diào)NF-KB亞單位p50，使其在NAPA啟動子區(qū)形成二聚體，從而抑制NAPA的表達。同時，該蛋白能抵抗順鉑導(dǎo)致的細胞凋亡作用，從而增加胃癌細胞(BALB/c-3T3細胞)對順鉑誘導(dǎo)的細胞凋亡的敏感性。然而，敲除LMP1后，NAPA蛋白水平恢復(fù)，胃癌細胞則對順鉑產(chǎn)生耐藥。He等[25]研究還發(fā)現(xiàn)LncRNA Loc553103在胃癌組織中的表達，可通過EBV-miR-BART6-3p下調(diào)，且Loc553103過表達可通過促進細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致胃癌細胞遷移和侵襲。有研究發(fā)現(xiàn)EBVaGC中LncRNA SNHG8高表達。采用共表達和富集分析顯示，SNHG8與EBV蛋白LF3、BHRF1和BNLF2a相互作用，且這些蛋白質(zhì)還可以反過來作用于胃癌細胞DNA的修復(fù)，細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和核糖體的功能，從而在胃癌發(fā)生的信號通路中發(fā)揮重要作用[26]。

以上研究均表明，LncRNA在EBVaGC致病機制中或EBV感染過程中發(fā)揮重要作用，且為EBVaGC的致病機制研究提供新思路。然而，目前有關(guān)LncRNA與EBV、LncRNA與EBVaGC的相關(guān)報道較少，尚需進一步分析。

4 小結(jié)與展望

目前，雖已有研究證明LncRNA在胃癌的早期診斷、侵襲轉(zhuǎn)移、耐藥、預(yù)后及治療靶標中發(fā)揮重要作用，但相關(guān)研究仍處于起步階段，未來仍面臨較多的挑戰(zhàn)。如LncRNA在組織中的研究較廣泛，而其在血液、胃液中的研究卻有限；LncRNA與EBVaGC關(guān)系的報道還較少；多數(shù)LncRNA與胃癌的致病機制尚不明確，且與胃癌的轉(zhuǎn)移、耐藥及EBV感染等機制相關(guān)LncRNA的研究尚不成熟。今后將在這些方面進行更加深入的分析，相信越來越多的LncRNA分子與胃癌及EBVaGC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系將被闡釋；實現(xiàn)基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用的過渡，最終給胃癌患者帶來新的希望。