高 雅，智 宇，劉佳利，張承天，斯 慶，孟 克，郝學(xué)峰，王金玲*

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室，內(nèi)蒙古 呼和浩特010018;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010031；3.鄂爾多斯市烏審旗嘎魯圖鎮(zhèn)人民政府，內(nèi)蒙古 嘎魯圖017300；4.鄂爾多斯市伊金霍洛旗動物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 鄂爾多斯017200)

破傷風(fēng)，是由破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌（Clostridium Tetanus）引起的急性、創(chuàng)傷性、中毒性疾病，破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌屬于梭菌屬的成員[1]。破傷風(fēng)的流行對養(yǎng)殖業(yè)具有巨大危害。目前對破傷風(fēng)有大量治療和預(yù)防的報道，但對于其特征性的病理學(xué)觀察描述較為有限。本研究通過臨床病史、大體病變、組織病理學(xué)變化、觸片檢查和毒素實驗綜合診斷了一例羊破傷風(fēng)，并采取有效措施，進(jìn)行防治。

1 臨床病史

內(nèi)蒙古自治區(qū)某奶山羊養(yǎng)殖場于2021年2月13號進(jìn)行全群打耳標(biāo)，于15 d后開始散在發(fā)病，臨床癥狀表現(xiàn)為易驚，走路僵直，呼吸加快，發(fā)病后3 d出現(xiàn)角弓反張，牙關(guān)緊咬的癥狀，最后死亡。病程3～5 d。至2021年3月5號已發(fā)病和死亡5只羊。發(fā)病期間使用青霉素、磺胺類藥物治療均無治愈效果。疫苗免疫情況為布病、小反芻獸疫、三聯(lián)苗、口蹄疫和傳染性胸膜肺炎均已接種。

2 大體病變

左耳近耳根處皮膚被耳標(biāo)磨出一個較深的大潰瘍灶（圖1），耳標(biāo)孔邊緣皮膚明顯腫脹、充血，創(chuàng)面附著少量壞死組織（圖2）。心臟呈向心性肥大，特別是左右心室壁增厚明顯，心室腔明顯縮小，心內(nèi)膜彌散分布大小不等的出血點。肝臟呈彌漫性的土黃色。腦組織水腫，有大量清亮的腦脊液流出。其他組織器官眼觀無明顯病變。

圖1 耳標(biāo)周圍皮膚呈現(xiàn)環(huán)形潰瘍

圖2 耳標(biāo)孔周圍組織充血和腫脹，耳標(biāo)磨損形成潰瘍

3 病理變化

耳孔邊緣表面形成薄層環(huán)狀的結(jié)痂和炎癥反應(yīng)帶，組織深部可見有大量肉芽組織（圖3）。肉芽組織中有明顯的充血、出血水腫以及中性粒細(xì)胞浸潤。心肌纖維彌散出血形成出血灶。肝組織出現(xiàn)明顯水腫，狄氏腔顯現(xiàn)，肝細(xì)胞普遍發(fā)生顆粒變性，少部分肝細(xì)胞發(fā)生大泡性脂肪變性；靠近間質(zhì)處的肝細(xì)胞部分壞死。脾臟靠近被膜處紅髓、白髓結(jié)構(gòu)紊亂，有大面積出血。出血灶內(nèi)有大量吞噬含鐵血黃素的巨噬細(xì)胞彌散出現(xiàn)。淋巴結(jié)中部分淋巴小結(jié)的生發(fā)中心可見淋巴細(xì)胞散在壞死，表現(xiàn)為核破碎。腎小管上皮細(xì)胞普遍發(fā)生顆粒變性，髓質(zhì)處的腎小管水腫與基底膜分離。小腦浦肯野細(xì)胞層出現(xiàn)單個散在性細(xì)胞壞死，小腦髓質(zhì)神經(jīng)纖維發(fā)生脫髓鞘現(xiàn)象。大腦髓質(zhì)血管周圍形成數(shù)個出血灶。

圖3 耳孔邊緣表面形成薄層環(huán)狀的結(jié)痂和炎癥反應(yīng)

4 觸片檢查

在耳標(biāo)孔邊緣切面制備觸片，自然干燥，革蘭氏染色，油鏡觀察。觀察到大量呈單個或成對存在，局部多個菌體連接成鏈狀的兩頭鈍圓的革蘭氏陽性粗大桿菌（圖4）。

圖4 觸片上大量兩頭鈍圓的革蘭氏陽性粗大桿菌

5 毒素檢查實驗

無菌取少量耳標(biāo)孔附近的炎癥組織，加少量生理鹽水進(jìn)行研磨，所得研磨液置于1.5 mL離心管中，以5000 r／min離心10 min，取上清液0.3 mL腹腔注射3只小白鼠，實時觀察。接毒2 h后小鼠均出現(xiàn)精神沉郁、運(yùn)動障礙、痙攣、弓腰、后腿和尾根僵直的神經(jīng)癥，5~8 h 3只實驗小白鼠均死亡。

6 診斷

通過臨床病史、尸體剖檢、病理組織學(xué)、觸片檢查和毒素檢查實驗綜合診斷為奶山羊破傷風(fēng)。

7 防治方案

給羊佩帶標(biāo)識時，必須按照規(guī)定的無菌操作程序進(jìn)行，防止污染。佩戴耳標(biāo)時建議耳標(biāo)向外，并遠(yuǎn)離耳根部。同時也要注意其他因素導(dǎo)致傷口的形成，為防止羊群因傷口感染破傷風(fēng)梭菌，對羊群早期進(jìn)行注射破傷風(fēng)血清。根據(jù)羊群的體質(zhì)可一次足量的注射，一般用在20萬～80萬單位；也可以總量分3次注射，皮下、肌肉或靜脈注射均可，抗破傷風(fēng)血清在羊體內(nèi)可保留2周左右。同時在養(yǎng)殖過程中，堅持和加強(qiáng)衛(wèi)生消毒工作，加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，避免羊只發(fā)生外傷。飼養(yǎng)員每天對羊群進(jìn)行檢查，如有發(fā)現(xiàn)外傷及時處理[2]。

對于發(fā)病羊建議及時清除壞死組織和耳標(biāo)，傷口采用3%雙氧水溶液沖洗創(chuàng)口，再用5%碘酊對創(chuàng)面進(jìn)行消毒，同時結(jié)合抗生素治療[3]。發(fā)現(xiàn)病羊后立刻將病羊隔離至干燥清潔、通風(fēng)良好的圈舍，及時清理病羊羊舍，并采用10%漂白粉溶液對羊舍環(huán)境和水槽、料槽等用具進(jìn)行消毒處理，第一時間杜絕該病的傳染源[4]。

8 討論

破傷風(fēng)病是由外傷感染破傷風(fēng)梭菌引起的一種急性中毒性疾病。本病的臨床特征主要表現(xiàn)為牙關(guān)緊閉、局部或全身肌肉呈持續(xù)性強(qiáng)直和陣發(fā)性痙攣，對外界刺激反射性增高，多死于窒息及全身性衰竭，病死率很高[5]。本例奶山羊表現(xiàn)為易驚，走路僵直，呼吸加快并伴有角弓反張的癥狀。與文獻(xiàn)報道一致。關(guān)于破傷風(fēng)病理學(xué)變化未檢索到相關(guān)報道，本研究通過尸體剖檢和病理組織學(xué)觀察到在病死羊耳部打耳標(biāo)處周圍組織明顯壞死和潰瘍，心臟肥大，實質(zhì)器官均有損傷性的變化。

破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌經(jīng)創(chuàng)口感染后產(chǎn)生毒素對動物造成傷害。該菌為厭氧革蘭氏陽性桿菌，有鞭毛，能運(yùn)動，無莢膜，能形成芽胞，芽孢在菌體一端，形似鼓錘狀[6]。該菌廣泛存在于自然界的土壤、塵土、糞便中等。本例取奶山羊耳部損傷處組織進(jìn)行觸片后革蘭氏染色觀察菌體形態(tài)，觀察到有許多單個或成對存在，有些呈長絲狀排列的兩頭鈍圓的革蘭氏陽性桿菌。與破傷風(fēng)梭菌形態(tài)一致。并通過毒素檢查實驗，小鼠在2 h后出現(xiàn)神經(jīng)癥狀并在5~8 h死亡，說明耳部損傷處皮膚有毒素存在。

破傷風(fēng)梭菌的繁殖體對外界的抵抗力不強(qiáng)，但該病菌的芽孢體具有很強(qiáng)的抵抗力，在土壤中能存活幾十年?？梢蛲鈧驍嗄殹⑷?、斷角、帶耳標(biāo)等經(jīng)傷口進(jìn)入體內(nèi)[7]。本例病羊通過臨床病史和尸體剖檢除耳部打耳標(biāo)處未在其他組織器官發(fā)現(xiàn)損傷，并且據(jù)畜主介紹該群羊陸續(xù)出現(xiàn)了易驚，走路僵直，角弓反張等癥狀。并結(jié)合病理組織學(xué)、觸片檢查和小鼠攻毒實驗綜合判斷由于打耳標(biāo)位置不當(dāng)而導(dǎo)致破傷風(fēng)感染。因此在今后的生產(chǎn)實踐中，要對打耳標(biāo)的位置加以調(diào)整，同時在打耳標(biāo)前后也要對動物耳部和耳標(biāo)進(jìn)行嚴(yán)格消毒。

破傷風(fēng)發(fā)病機(jī)理為當(dāng)形成芽孢的菌體通過傷口侵入體內(nèi)，芽孢在缺氧環(huán)境中即可復(fù)蘇，在壞死組織中進(jìn)行大量增殖并且分泌大量的毒素代謝產(chǎn)物，進(jìn)而通過組織中的毛細(xì)血管網(wǎng)侵入血液，最終擴(kuò)散至全身各處[8]。毒素到達(dá)運(yùn)動神經(jīng)元末梢的突觸前膜，與外周神經(jīng)末梢富集的糖脂結(jié)合，進(jìn)而反向沿神經(jīng)鞘經(jīng)脊髓神經(jīng)根傳至脊髓前腳神經(jīng)元，上行可達(dá)腦干細(xì)胞。此時毒素選擇性封閉抑制性神經(jīng)元，阻止神經(jīng)遞質(zhì)抑制類物質(zhì)釋放，使肌肉伸縮失去平衡。毒素還會抑制神經(jīng)肌肉接頭處的神經(jīng)突觸傳遞活動，引起強(qiáng)直或者痙攣，并伴有水腫等變化[9]。本例病羊在腦部可以觀察到有大小不等散在的出血灶和明顯的水腫的變化，并在小腦浦肯野細(xì)胞層看到變質(zhì)性變化，這與破傷風(fēng)毒素作用有關(guān)。