魏光強(qiáng)，趙 娜，范堯珠，王雪峰，黃艾祥，田 洋

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院, 云南昆明 650201）

辣木（Moringa oleifera）是多年生熱帶落葉喬木，目前廣泛種植于我國的云南、廣東、廣西、福建、臺灣等地區(qū)，資源量豐富[1]。辣木的葉子、種子、根和花皆可食用，辣木籽富含蛋白質(zhì)（質(zhì)量分?jǐn)?shù)29.4%～38.3%）[2]，其中 Val、Leu、Ile、His等多種氨基酸的含量接近或遠(yuǎn)高于聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織/世界衛(wèi)生組織標(biāo)準(zhǔn)模式譜，可作為優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)資源加以開發(fā)利用[3-5]。

糖尿病患者近年來呈上升趨勢，糖尿病已成為繼癌癥和心血管疾病之后威脅人類健康的第三大殺手[6]。降血糖肽一般是指可用于治療II型糖尿病的一類活性肽[7]。相較于其他天然產(chǎn)物類降糖功能因子，降糖肽結(jié)構(gòu)清楚，作用機(jī)制明確；活性更高、用藥劑量更小、毒副作用更低[8]；與蛋白質(zhì)相比，幾乎沒有免疫原性，而且可以通過化學(xué)方法合成；具有較穩(wěn)定的胃腸消化特性。目前開發(fā)出的植物源降糖肽包括苦瓜降糖肽[9]、發(fā)酵大豆降糖肽[10]、靈芝降糖肽[11]、黑豆降糖肽[12]等。酶法提取降糖肽具有提取率高、反應(yīng)條件溫和的特點(diǎn)，更適合將來的工業(yè)化生產(chǎn)[13]，如王晟等[14]利用木瓜蛋白酶水解山杏仁蛋白制備降血糖粗肽。辣木籽富含蛋白質(zhì)，經(jīng)酶解處理后能產(chǎn)生具有多種生物學(xué)功能的活性肽，包括抗氧化肽、抗菌肽等[15-16]。然而，有關(guān)辣木籽降糖肽的研究卻鮮有報(bào)道。

本實(shí)驗(yàn)采用酶法制備辣木籽蛋白水解物，以水解度和α-葡萄糖苷酶抑制率為指標(biāo)，通過單因素篩選和響應(yīng)面優(yōu)化辣木籽降糖肽的最佳酶解工藝，采用超濾法截留不同分子量范圍的酶解物并進(jìn)行降糖活性分析，并通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究其對HepG2細(xì)胞的抑制作用，以期為辣木籽降糖肽以及功能性食品的開發(fā)提供理論與方法指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

辣木籽產(chǎn)自云南省德宏州，云南天佑科技開發(fā)有限公司提供；MTT、木瓜蛋白酶（80萬U/g）北京索萊寶科技有限公司；三氯乙酸（TCA）天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；PNPG（分析純）上海寶曼生物科技有限公司；α-葡萄糖苷酶（200 U/mL）騰達(dá)生物試劑耗材有限公司；DMEM培養(yǎng)基美國GIBCO公司。

AD300L-H高速均質(zhì)分散機(jī)上海軒澄儀器有限公司；SCIENTZ-18N真空冷凍干燥機(jī)上海比朗儀器制造有限公司；Merck Millipore（膜片直徑76 mm）超濾杯上海軒儀儀器設(shè)備有效公司；UV-1800CP紫外分光光度計(jì)上海美譜達(dá)儀器有限公司；Multiskan Go酶聯(lián)免疫檢測儀賽默飛世爾科技公司；HFsafe-1200LC生物安全柜上海力申科學(xué)儀器有限公司；BPN-80CW二氧化碳培養(yǎng)箱上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 辣木籽蛋白的制備 參照王雪峰等[16]方法略作修改制備辣木籽蛋白。采用鹽提法將脫脂辣木籽粉用0.3 mol/L NaCl溶解，料液比1:10（w/v）。待完全溶解后用0.1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)溶液pH至7.15，然后置于30 ℃水浴中攪拌30 min。溶解液抽濾去渣，收集濾液（抽濾液用75%乙醇清洗）。下層濾液于室溫下經(jīng)4000 r/min離心30 min，收集上清液，然后再次抽濾去渣，收集下層濾液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中45 ℃旋蒸45 min，最后收集濃縮液真空冷凍干燥制得凍干粉，置于-80 ℃冰箱保存，備用。測得辣木籽水溶性蛋白的純度為50.96%。

1.2.2 辣木籽降糖肽的酶法制備 稱取1 g辣木籽蛋白凍干粉，按液料比為40:1加入純水，勻漿5 min（3000 r/min），加入木瓜蛋白酶 0.55 g，于 55 ℃ 條件下酶解4.5 h，酶解結(jié)束后于95 ℃，10 min滅酶，冷卻，離心沉淀（4000 r/min，30 min），收集上清液得到辣木籽多肽酶解液，采用鄰苯二甲醛（OPA）法測定蛋白水解度。

1.2.3 酶解工藝優(yōu)化

1.2.3.1 單因素實(shí)驗(yàn) 以酶解溫度為55 ℃，酶解時間為 4.5 h，酶添加量為 5.5%，液料比 40:1，酶解pH7為基本條件，在其他條件不變的前提下，設(shè)置酶的添加量為2.5%、3.5%、4.5%、5.5%、6.5%；液料比為 10:1、20:1、30:1、40:1、50:1；酶解時間為 2.5、3.5、4.5、5.5、6.5 h；酶解溫度為25、35、45、55、65 ℃；pH為 5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，以酶解產(chǎn)物的蛋白水解度和α-葡萄糖苷酶抑制率作為衡量指標(biāo)進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)。

1.2.3.2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用中心組合設(shè)計(jì)對酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化。選取A酶解時間（h）、B料液比、C初始pH 3個關(guān)鍵影響因素進(jìn)行響應(yīng)面分析，因素水平編碼表見表1。

表1 響應(yīng)面分析因素及水平表Table 1 Factors and level of response surface analysis

1.2.4 蛋白質(zhì)水解度測定 采用鄰苯二甲醛（OPA）法[17]測定蛋白質(zhì)水解度。在避光條件下向裝有3 mL OPA試劑（200 mg SDS，7.62 g四硼酸鈉，160 mg OPA，4 mL乙醇和176 mg DTT用去離子水溶解，定容至200 mL，避光保存）的試管中分別加入400 μL濃度為0.5 mg/mL的絲氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、去離子水（空白溶液）和辣木籽蛋白酶解液（樣品溶液），混勻5 s后，室溫反應(yīng)2 min，于340 nm處測定吸光度。蛋白質(zhì)水解度按如下公式計(jì)算：

式中：DH為蛋白質(zhì)水解度，%；h為被水解的肽鍵數(shù)，meqv/g；htot為蛋白質(zhì)總肽鍵數(shù)，8.2 meqv/g。

OPA法測定蛋白質(zhì)水解度的計(jì)算公式為：

1.2.5α-葡萄糖苷酶抑制率的測定 參照Lim等[18]的方法略作修改，測定辣木籽酶解液的α-葡萄糖苷酶抑制率。吸取5 μL的25 U/mLα-葡萄糖苷酶溶液，10 μL 的樣品溶液和 620 μL pH6.8 的 0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液于試管中，混勻后于37.5 ℃下反應(yīng)20 min，然后加入 10 μL 10 mmol/L PNPG 溶液，混合并在37.5 ℃下反應(yīng)30 min，最后，通過添加650 μL濃度為0.2 mol/L的碳酸鈉溶液終止反應(yīng)。使用分光光度計(jì)測定每個樣品在405 nm處的最大吸光度，每個樣品重復(fù)測定6次。α-葡萄糖苷酶抑制率的計(jì)算公式如下：

式中：A樣品為實(shí)驗(yàn)組，多肽+酶+PNPG+Na2CO3；A樣品對照為樣品對照組，多肽+PBS+PBS+Na2CO3；A對照為樣品對照組，PBS+酶+PNPG+Na2CO3。

1.2.6 辣木籽降糖肽的超濾分離 在最佳酶解工藝條件下酶解辣木籽制備辣木籽酶解液，過10、5、3 kDa三種不同截留分子量的超濾膜進(jìn)行超濾粗分離，得到分子量為10、10～5、5～3、＜3 kDa 4 個組分的辣木籽酶解液，冷凍干燥制得凍干粉，置于-80 ℃冰箱保存，備用。

1.2.7α-葡萄糖苷酶抑制率IC50值測定 將辣木籽酶解液各超濾組分凍干粉配制成濃度為2、4、6、8、10 mg/mL的樣品（濃度梯度≥5），分別測定其α-葡萄糖苷酶抑制率，以濃度為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)，進(jìn)行非線性擬合，得出回歸方程，并計(jì)算α-葡萄糖苷酶抑制率的IC50值。

1.2.8 辣木籽降糖肽組分對人肝癌細(xì)胞的抑制作用參考姚興梅等[19]的方法略作修改進(jìn)行辣木籽降糖肽組分對人肝癌細(xì)胞的抑制作用測定。將對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞傾去培養(yǎng)液，用3 mLPBS清洗一次，再用1 mL胰蛋白酶-EDTA消化3 min，使細(xì)胞變?yōu)榍蛐?，加? mL 10%牛血清DMEM培養(yǎng)液終止消化反應(yīng)。1500 r/min離心3 min，去除上清液，調(diào)整細(xì)胞液密度約為4×104cells/mL（臺盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)），200 μL/孔接于 96孔板中。待 12 h細(xì)胞貼壁后，棄去原培養(yǎng)液，分別加入100 μL濃度為200、300、400 μg/mL的含降糖肽DEME培養(yǎng)基處理24、48、72 h，每個濃度設(shè)置3個復(fù)孔。以不加降糖肽的組作為空白組，只加DMSO溶液的作為試劑對照組。培養(yǎng) 24、48、72 h之后加入 20 μL 5 mg/mL的 MTT溶液，于培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h后棄盡孔內(nèi)液體，最后加入150 μL的DMSO溶液。酶標(biāo)儀490 nm（震板10 min）進(jìn)行檢測。細(xì)胞存活率按以下公式計(jì)算：

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

本次試驗(yàn)中α-葡萄糖苷酶抑制率數(shù)據(jù)均重復(fù)6次，結(jié)果表示均以實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差的形式呈現(xiàn)。采用Box-Behnken 8.0.6、SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理；采用Origin 2018進(jìn)行圖表繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶解單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 酶添加量對辣木籽蛋白酶解產(chǎn)物水解度及α-葡萄糖苷酶抑制率的影響 酶用量作為酶解反應(yīng)的基本條件，對蛋白水解活性具有重要的影響。酶添加量對酶解產(chǎn)物水解度及抑制率的影響如圖1。當(dāng)酶的添加量較低時，酶與底物作用小，蛋白質(zhì)不能被完全水解；而當(dāng)酶添加量過高時，底物完全被反應(yīng)后則會達(dá)到飽和，即使繼續(xù)添加酶，水解度變化不大。從圖1中可以看出隨著酶添加量的增加，水解度先急劇上升后平緩上升，主要原因是底物添加量固定不變，當(dāng)酶的添加量到達(dá)一定量時，水解度不再上升，趨于平緩。而從最初2.5%的添加量開始，α-葡萄糖苷酶的抑制率一直呈現(xiàn)上升的趨勢，當(dāng)酶添加量為5.5%時抑制率到達(dá)了最高點(diǎn)，酶添加量高于5.5%時α-葡萄糖苷酶抑制率緩慢下降，原因可能是一定的酶添加量有利于α-葡萄糖苷酶抑制肽的生成，而過高的加酶量會使水解產(chǎn)生的多肽繼續(xù)水解，將已經(jīng)水解得到的降糖肽水解成為降糖活性低或者沒有活性的肽片段，從而導(dǎo)致酶解液的α-葡萄糖苷酶抑制率降低[20]。綜合考慮，酶的最佳添加量為5.5%。

圖1 酶添加量對酶解產(chǎn)物水解度及抑制率的影響Fig.1 Effect of enzyme addition on the degree of hydrolysis and inhibition rate of enzymatic hydrolysis products

2.1.2 液料比對辣木籽蛋白酶解產(chǎn)物水解度及α-葡萄糖苷酶抑制率的影響 液料比對酶解產(chǎn)物α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度的影響如圖2。根據(jù)圖2可以看出，當(dāng)液料比為40:1時，抑制活性和水解度已達(dá)到了最高點(diǎn)，當(dāng)該比例大于40:1時，α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度呈下降的趨勢。這可能是因?yàn)橹参锏鞍字泻兄参锏鞍酌敢种苿芘c蛋白酶作用與底物共享蛋白酶的結(jié)合基團(tuán)，表現(xiàn)出競爭性抑制作用[21]，表明最佳料液比應(yīng)為40:1。

圖2 料液比對酶解產(chǎn)物抑制活性及水解度的影響Fig.2 Effect of material-liquid ratio on inhibition activity and degree of hydrolysis of enzymatic hydrolysis products

2.1.3 酶解時間對酶解產(chǎn)物抑制活性及水解度的影響 酶解時間是酶解反應(yīng)的一個重要因素，如若時間太短，反應(yīng)不充分，酶解效果不理想；而時間太長，酶易失活，水解效果不佳，所以合適的酶解時間對整個反應(yīng)過程起著關(guān)鍵的作用。酶解時間對酶解產(chǎn)物活性及水解度的影響如圖3。從圖3中可以看出，酶解液的蛋白水解度隨著酶解時間的延長逐漸提升，α-葡萄糖苷酶抑制活性在4.5 h達(dá)到峰值，抑制率在4.5 h后下降，原因是在4.5 h的酶水解之后，活性肽鏈被過度酶降解，結(jié)構(gòu)被破壞，并且酶產(chǎn)物的抑制活性大大降低[22]。所以綜合考慮，酶水解時間應(yīng)控制在4.5 h。

圖3 酶解時間對酶解產(chǎn)物活性及水解度的影響Fig.3 Effect of enzymolysis time on the activity and degree of hydrolysis of enzymatic hydrolysis products

2.1.4 溫度對酶水解產(chǎn)物的活性和水解度的影響溫度對水解效果有著顯著的影響，當(dāng)酶解溫度過高時會導(dǎo)致蛋白構(gòu)象發(fā)生改變或破壞，影響酶的活性和酶解反應(yīng)的進(jìn)行[23]。溫度對酶水解產(chǎn)物α-葡萄糖苷酶抑制率和水解度的影響見圖4，由圖4可知，隨著溫度的升高，α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度的值都不斷的上升，當(dāng)溫度到達(dá)55 ℃時，α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度均達(dá)到最高值，而當(dāng)溫度高于55 ℃后，則出現(xiàn)了下降的現(xiàn)象，因?yàn)槊糠N酶都有最佳的反應(yīng)溫度，當(dāng)溫度超過了它原本所能承受的溫度時，酶的活性反而會受到抑制而降低，影響了酶促水解的速率。因此，最佳酶水解溫度應(yīng)選擇在約55 ℃。王晟等[14]研究發(fā)現(xiàn)木瓜蛋白酶制備山杏源降糖肽的最佳酶解溫度為50 ℃，與本研究相近。

圖4 溫度對酶水解產(chǎn)物的活性和水解度的影響Fig.4 Effect of temperature on the activity and degree of hydrolysis of enzyme hydrolysates

2.1.5 pH對酶水解產(chǎn)物活性和水解度的影響 pH會影響蛋白質(zhì)和蛋白酶的結(jié)構(gòu)空間，使蛋白質(zhì)發(fā)生變化和蛋白酶失去活性，從而對水解產(chǎn)生影響[24]。pH對酶水解產(chǎn)物的活性和水解度的影響見圖5，從圖5中可以看出，當(dāng)pH為8時，酶水解產(chǎn)物對α-葡糖苷酶的抑制活性和水解度是最好的；而當(dāng)pH小于8或者大于8時，α-葡萄糖苷酶的抑制率和水解度會受到酸堿條件的影響，不論是偏酸還是偏堿都會影響酶的活性和底物結(jié)構(gòu)。綜合評定，最佳反應(yīng)pH應(yīng)為8。

圖5 pH對酶水解產(chǎn)物活性和水解度的影響Fig.5 Effect of pH on the activity and degree of hydrolysis ofenzyme hydrolysate

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化酶解工藝研究

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，采用Box-Behnken Design中心組合設(shè)計(jì)原理，以酶解溫度、液料比、酶解pH為考察因素，α-葡萄糖苷酶抑制率（Y）為響應(yīng)值，建立數(shù)學(xué)模型，以獲得其最佳酶解工藝條件。

Box-Behnken Design設(shè)計(jì)方案及響應(yīng)值結(jié)果和Box-Behnken Design實(shí)驗(yàn)方差分析如表2、表3所示。二次方程模型為：

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Experimental results of response surface test

表3 響應(yīng)面回歸模型方差分析Table 3 Analysis of variance of response surface regression model

Y=-331.11875+28.85875A+4.70937B+46.56125C-0.15225AB-0.75000AC-0.077750BC-1.78250A2-0.041500B2-2.41750C2

根據(jù)表3所示可知該模型P＜0.01，說明木瓜蛋白酶酶解辣木籽蛋白制備降糖肽的α-葡萄糖苷酶抑制率的回歸方程模型極顯著，同時失擬差P=0.9485＞0.05并不顯著，通過觀察失擬差的顯著性更加說明了該模型具有合理性。因此，可以使用該模型來分析和預(yù)測整體實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由表4中A、B、C的F值大小可以推斷出，3個因素對酶水解產(chǎn)物抑制活性的影響順序?yàn)镃＞B＞A，其中C和B的影響對于酶解pH和酶水解產(chǎn)物更為重要。酶解pH和液料比對酶解產(chǎn)物速率抑制活性具有更大的作用；所有平方項(xiàng)影響均極顯著（P＜0.01），B2和 C2的作用更為重要；并且相互作用影響相對平方項(xiàng)較小，其中AB極顯著（P＜0.01），AC、BC 顯著（P＜0.05）。三個因素之間兩兩交互作用下的三維圖和等高線圖如圖6～圖11所示。

圖11 液料比與酶解pH交互作用的等高線圖Fig.11 Contour plot of interaction between material-liquid ratio and enzymatic hydrolysis pH

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 4 Verification experiment results

圖6 酶解時間與液料比交互作用的三維圖Fig.6 Three-dimensional diagram of the interaction between enzymatic hydrolysis time and material-liquid ratio

圖7 酶解時間與料液比交互作用的等高線圖Fig.7 Contour plot of the interaction between enzymolysis time and material-liquid ratio

圖8 酶解時間與酶解pH交互作用的三維圖Fig.8 Three-dimensional diagram of the interaction between enzymatic hydrolysis time and enzymatic hydrolysis pH

圖9 酶解時間與酶解pH交互作用的等高線圖Fig.9 Contour diagram of interaction between enzymatic hydrolysis time and enzymatic hydrolysis pH

圖10 料液比與酶解pH交互作用的三維圖Fig.10 Three-dimensional diagram of the interaction between material-liquid ratio and enzymatic hydrolysis pH

2.3 最優(yōu)工藝條件確定和驗(yàn)證

使用Design-Expert 8.0.6軟件分析回歸方程，確定最優(yōu)工藝條件分別為酶解時間4.63 h，液料比40.51:1和初始pH為8.26。在此工藝下酶解產(chǎn)物的抑制活性預(yù)測值為23.6%。考慮到實(shí)驗(yàn)條件和其他問題的可行性，改良的酶解工藝條件如下：酶解時間4.6 h，液料比40.5:1，pH為8.3，在此條件下，重復(fù)三組實(shí)驗(yàn)，得到的辣木子蛋白酶解液對α-葡萄糖苷酶的抑制活性為23.62%±0.14%，接近預(yù)測值25.38%，蛋白質(zhì)的水解度為16.44%±0.02%，且三組實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性較好。

2.4 辣木籽酶解液超濾分離組分降糖活性

圖12為辣木籽降糖肽各超濾組分對α-葡萄糖苷酶的抑制率的IC50值，各超濾組分均表現(xiàn)出一定的α-葡萄糖苷酶的抑制活性，其中分子量＜3 kDa的辣木籽降糖肽對α-葡萄糖苷酶的抑制活性最高，其抑制率IC50值為5.56 mg/mL，說明辣木籽降糖肽截留分子量越小，抑制活性越高，與文獻(xiàn)報(bào)道的其他功能性多肽制備的結(jié)果[21-22,25]相似。劉麗君[26]研究表明分子量＜3 kDa的駝血酶解物超濾組分對α-葡萄糖苷酶的抑制活性最高，與本研究結(jié)果一致。

圖12 不同截留分子量的辣木籽降糖肽對α-葡萄糖苷酶的抑制活性Fig.12 Inhibitory activity of Moringa seed glycopeptides with different molecular weight on α-glucosidase

2.5 辣木籽降糖肽組分對人肝癌細(xì)胞的抑制作用

分子量＜3 kDa的辣木籽降糖肽組分對人肝癌細(xì)胞的抑制作用如圖13所示。當(dāng)辣木籽降糖肽質(zhì)量濃度為300 μg/mL時，作用于 HepG2細(xì)胞48 h后顯著抑制了HepG2細(xì)胞的增殖（P＜0.05），細(xì)胞存活率均低于90%，且隨著時間的延長抑制效果愈加明顯；當(dāng)質(zhì)量濃度為400 μg/mL，作用時間為72 h時，抑制HepG2細(xì)胞的增殖愈加顯著（P＜0.01），此時細(xì)胞的存活率為86.4%。張晶等[27]、王立峰等[28]研究表明了菜籽抗氧化肽及膜分離各組分在質(zhì)量濃度為400 mg/L時也可顯著抑制HepG2細(xì)胞的增殖，而這些植物蛋白源活性肽可能會通過影響DNA的復(fù)制和有絲分裂、線粒體膜電位和鈣離子濃度的平衡狀態(tài)進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖[29]。綜上所述，＜3 kDa的辣木籽降糖肽組分對人肝癌細(xì)胞具有一定的抑制作用，但具體的抑制機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

圖13 分子量＜3 kDa的辣木籽多肽對人肝癌細(xì)胞的抑制作用Fig.13 Inhibitory effect of Moringa oleifera seed peptides with molecular weight ＜3 kDa on human liver cancer cells

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用單因素實(shí)驗(yàn)及響應(yīng)面分析法優(yōu)化了辣木籽降糖肽的酶解制備工藝，獲得其最佳酶解條件為酶解時間4.6 h、液料比40.5:1、pH為8.3、酶添加量5.5%、溫度為55 ℃，該條件下酶解物的α-葡萄糖苷酶抑制率為23.62%±0.14%，水解度為16.44%±0.02%。利用超濾法對酶解液進(jìn)行組分分離，其中分子量＜3 kDa的超濾組分降糖活性最好，當(dāng)其質(zhì)量濃度為300 μg/mL時，能顯著抑制HepG2細(xì)胞的增殖（P＜0.05）。因此，從辣木籽蛋白中水解得到的小肽可作為用于控制糖尿病的保健食品中潛在的活性成分，研究可為后續(xù)辣木籽降糖肽的分離鑒定奠定基礎(chǔ)，為辣木籽功能性食品的開發(fā)提供重要參考。