王英英，朱 嬌

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤二科，陜西咸陽(yáng) 712000；2.兵器工業(yè)五二一醫(yī)院腫瘤血液病科，西安 710065）

三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)是指雌激素受體(estrogen receptor, ER)，人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2(human epidermal growth factor receptor-2, Her-2)和孕激素受體(progesterone receptor, PR) 均呈陰性的乳腺癌(breast cancer, BC)。TNBC 約占BC 的20%，具有強(qiáng)侵襲性和預(yù)后較差等特點(diǎn)[1-2]。目前臨床上仍缺乏個(gè)體化治療方案，因此引起廣大科研工作者的廣泛關(guān)注。miRNA 是一類長(zhǎng)度為19～25 nt 的非編碼單鏈小分子，近年來(lái)研究顯示miRNA 是TNBC 的潛在治療靶點(diǎn)[3]。本研究通過(guò)檢測(cè)TNBC 患者血清miR-146a 和miR let-7a 的表達(dá)水平，分析其與TNBC 臨床病理特征和化療療效的相關(guān)性，旨在為TNBC 的臨床診療提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院2014年7月～2016年6月行乳腺癌根治術(shù)的79 例女性患者為研究對(duì)象，經(jīng)免疫組化(immunohistochemical, IHC)檢測(cè)證實(shí)為TNBC。年齡21～60 歲，平均年齡45.68±8.78 歲；腫瘤直徑1～14 cm，平均腫瘤直徑5.27±1.21cm ；絕經(jīng)前38例，絕經(jīng)后41 例；I 期21 例、II 期28 例和III 期30 例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42 例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37 例。本研究經(jīng)由我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前未經(jīng)放療、化療者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①并發(fā)其他惡性腫瘤者；②嚴(yán)重肝腎功能異常者；③高血壓、糖尿病和冠心病等。

1.2 儀器與試劑 鹽酸表柔比星[輝瑞制藥(無(wú)錫)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20000496]75 mg/m2，靜脈滴注；環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H32020857）500 mg/m2，靜脈推注；紫衫醇(百時(shí)美施貴寶上海貿(mào)易有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20110470)80 mg/m2，靜脈滴注 ；Trizol 試劑購(gòu)自Invitrogen 公司；血清RNA 提取試劑盒購(gòu)自北京天根公司；UV-2450 紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)；ABI 7500 Fast 熒光定量PCR 儀(美國(guó)ABI 公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(ABI Applied Biosystems 公司，美國(guó))；miR-146a 和miR let-7a 引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.3 方法 采集TNBC 患者化療前、后空腹肘靜脈血5 ml，3 000 r/min 離心5 min，-80℃保存待測(cè)。 采用血清RNA 提取試劑盒提取血清中的總RNA，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)分析RNA 純度。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明將RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRTPCR)檢測(cè)血清miR-146a 和miR let-7a 的水平。

根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定療效：完全緩解(complete remission, CR)：病灶完全消失；部分緩解(partial remission, PR)：病灶最大長(zhǎng)徑總和減少≥30%；疾病穩(wěn)定(stable disease, SD)：病灶最大長(zhǎng)徑總和減少20%～30%；疾病進(jìn)展(progression of disease, PD)：病灶最大長(zhǎng)徑總和增加≥20%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，滿足正態(tài)性分布及方差齊性的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)分析，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清miR-146a 和miR let-7a表達(dá)水平與TNBC 患者臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表1。血清miR-146a 和miR let-7a 在腫瘤直徑≥3 cm，臨床分期III 期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中的表達(dá)水平高于腫瘤直徑＜3 cm，臨床分期I～I(xiàn)I 期和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)。

表1 血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平與TNBC 患者臨床病理特征的關(guān)系

2.2 化療前、后血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平的比較 TNBC 患者化療后血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平(0.81±0.32，0.60±0.26)顯著低于化療前(1.77±0.51，1.92±0.77)，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.31，10.11，均P=0.00)。

2.3 血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平與化療療效的相關(guān)性 化療后，CR 5 例(6.33%)，PR 31例(39.24%)，SD 27例(34.18%)和PD 16例(20.25%)。根據(jù)化療療效分為疾病進(jìn)展組(n=PD=16)和疾病控制組(n=CR+PR+SD=63)，疾病控制組患者血清miR-146a 和miR let-7a表達(dá)水平(0.37±0.12，0.51±0.17)低于疾病進(jìn)展組(1.40±0.79，1.62±0.55)，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=8.97，10.22，均P＜0.05)。Spearman 秩相關(guān)分析顯示血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平與化療療效呈負(fù)相關(guān)(r= -0.199，-0.150，均P＜0.001)。

3 討論

TNBC 是一類ER，Her-2 和PR均呈陰性的BC，其約占BC 病理類型的20%，侵襲性強(qiáng)、死亡率和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差[4-5]。有研究指出TNBC患者的5年總體生存率(overall survival, OS)明顯低于非TNBC 患者[6]。目前由于TNBC 基因表達(dá)的特異性，臨床上常采用化療的治療方案。miRNA 是一類長(zhǎng)度為19～25 nt 的非編碼單鏈小分子，何姝槿等[7]指出miRNA 通過(guò)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialmesenchymal transition, EMT)調(diào)節(jié)TNBC 的進(jìn)展。因此，探究靶向調(diào)節(jié)因子miRNA 可為臨床治療TNBC 提供新方向并提升患者生存質(zhì)量。miR-146a位于第5 號(hào)染色體的LOC28628 基因中的第二個(gè)外顯子區(qū)，其可參與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程，在免疫疾病中，miR-146a 通過(guò)核因子κB(nuclear factor kappa-B, NF-κB)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)揮調(diào)控作用[8-9]。let-7具有高度保守性、組織細(xì)胞特異性和時(shí)序性，其可用作肺癌和乳腺癌的腫瘤標(biāo)志物[10]。let-7 作用靶點(diǎn)有Ras，ERK，HMGA2 和Her-2 等。本研究通過(guò)檢測(cè)TNBC 患者血清miR-146a 和miR let-7a 的表達(dá)水平，分析其與TNBC 臨床病理特征和化療療效的相關(guān)性，旨在為TNBC 的臨床診療提供依據(jù)。

本研究分析了血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)與TNBC 患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示腫瘤直徑≥3 cm，臨床分期Ⅲ期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平較高，化療后血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平顯著降低，提示了miR-146a 和miR let-7a 很可能參與了TNBC 的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。本研究中79 例研究對(duì)象，其中疾病進(jìn)展組16 例和疾病控制組63 例，說(shuō)明鹽酸表柔比星、環(huán)磷酰胺和紫衫醇聯(lián)合的化療方案效果較理想。進(jìn)一步采用Spearman 秩相關(guān)分析分析血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平與化療療效的相關(guān)性，結(jié)果顯示其與化療療效呈負(fù)相關(guān)。

綜上所述，血清miR-146a 和miR let-7a 表達(dá)水平與腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和化療療效相關(guān)。miR-146a 和miR let-7a 可作為TNBC 潛在的腫瘤標(biāo)志物，值得深入研究和探討。