魏 英，王小林

（榆林市第二醫(yī)院a.腫瘤放療科;b.普外科,陜西榆林 719000）

據(jù)《2020年全球癌癥統(tǒng)計(jì)》，全球新增約905 677例新診斷肝癌病例和830 180 例肝癌死亡病例，肝癌所致死亡人數(shù)位居世界第三[1-2]。盡管在中國(guó)觀察到肝癌的發(fā)病率和死亡率呈顯著下降趨勢(shì)，但龐大的人口基礎(chǔ)和快速的人口增長(zhǎng)仍然導(dǎo)致大量新的肝癌病例出現(xiàn)并呈上升趨勢(shì)[3]。因此，有必要更好地了解肝癌發(fā)生和發(fā)展的分子機(jī)制，研發(fā)出有效的靶向治療方法[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)，原癌基因和抑癌基因的失調(diào)導(dǎo)致了肝癌的發(fā)生和發(fā)展，其中大多數(shù)集中在蛋白質(zhì)編碼基因上[5-6]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long non-coding RNAs ，lncRNAs）被定義為長(zhǎng)度大于200 nt 的非編碼RNA，其通過(guò)表觀遺傳調(diào)控機(jī)制發(fā)揮其基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能[7]。越來(lái)越多證據(jù)表明，lncRNAs 與多種病理、生理過(guò)程有關(guān)，在癌癥中經(jīng)常觀察到lncRNA 的異常表達(dá)[8-10]。發(fā)現(xiàn)lncRNAs能夠調(diào)節(jié)癌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、侵襲等惡性行為及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化和細(xì)胞耐藥性[11-13]。PRR34-AS1 是最新發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)其報(bào)道有限，但最新研究在肝癌中發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)，通過(guò)調(diào)節(jié)mRNA 介導(dǎo)參與了肝癌細(xì)胞的各種生物學(xué)行為過(guò)程，與肝癌發(fā)展關(guān)系密切，證明了PRR34-AS1 的原癌基因?qū)傩?，為肝癌研究提供了新的生物靶?biāo)[14-15]。然而PRR34-AS1 在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制尚未完全明確且有關(guān)報(bào)道鮮少。因此，本研究擬進(jìn)一步探究肝癌組織中PRR34-AS1 的表達(dá)特性及其對(duì)肝癌細(xì)胞的作用機(jī)制，以期為臨床肝癌的研究攻克提供新的分子機(jī)制基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 人肝癌HepG2 細(xì)胞購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)，10ml/dl 胎牛血清RPMI-1640 培養(yǎng)液中加入青霉素100 IU/ml 和鏈霉素100 μg/ml，37 ℃，5ml/dl CO2孵育箱培養(yǎng)。收集2020年6月～12月于榆林市第二醫(yī)院行手術(shù)治療的30 例肝癌患者癌組織及其對(duì)應(yīng)癌旁正常組織標(biāo)本，所有入選病例術(shù)前未行放化療治療，組織均由手術(shù)獲取，離體后快速行冰凍病理確認(rèn)為肝細(xì)胞癌，后置于低溫液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑及儀器 胎牛血清、鏈霉素、青霉素及RPMI-1640 培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)HyClone 公司；MTS反應(yīng)液購(gòu)自美國(guó)Corning 公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)賽默飛公司；lipo2000 購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司；實(shí)時(shí)熒光定量PCR 試劑盒、PCR 儀、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、Trizol 試劑購(gòu)自美國(guó)Promega 公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Bio Rad 公司；轉(zhuǎn)染細(xì)胞所用的陰性對(duì)照siCTL無(wú)義序列及2 條干擾siRNA 序列及JAK1 3' UTRwt 野生型和JAK1 3' UTR-mut 突變型熒光質(zhì)粒均由南京科佰生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成；熒光素酶測(cè)定系統(tǒng)購(gòu)自北京Promega 公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及分組: 取待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)至生長(zhǎng)密度達(dá)80%～85%左右時(shí)參照Lipo 2000 試劑盒說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，置于37℃，5ml/dl CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)48 h。細(xì)胞分組：轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siCTL 無(wú)義序列的細(xì)胞設(shè)為siCTL 對(duì)照組；轉(zhuǎn)染2條PRR34-AS1 干擾siRNA 序列細(xì)胞設(shè)為siRNAPRR34-AS1#1 組和siRNA-PRR34-AS1#2 組；轉(zhuǎn)染2 條JAK1 干擾siRNA 細(xì)胞設(shè)為siRNA- JAK1#1組和siRNA- JAK1#2 組；共轉(zhuǎn)染siRNA-PRR34-AS1+JAK1 細(xì)胞設(shè)為共轉(zhuǎn)染組。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 實(shí)驗(yàn)（RT-qPCR）: 使用primer 3 軟 件（http://frodo.wi.mit.edu/primer3/） 設(shè)計(jì)特異性qPCR 引物；采用Trizol 試劑盒提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，以此為模板配置PCR 反應(yīng)體系，行RT-qPCR 反應(yīng)。引物序列：PRR34-AS1上游：5’-AGAACGGAGCCGATGTTTCG-3’，下游：5’-TAACGCAGGCGGACGAATCT-3’；JAK1 上 游：5’-AATCTTCTGTATCAGCTCATGCTGACT-3’，下游：5’-CAGTTTTTACGGCTTCAGTTTACTT-3’；內(nèi)參GAPDH 上游：5’-GAACGCGAAGCTTGTCATC AA-3’，下游：5’CTAAGCAGTTGCTCGTGCAG-3’。反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s，95 ℃ 10 s，72 ℃ 15 s，循環(huán)40 次。反應(yīng)完成后，拷貝數(shù)據(jù)，采用2-△△Ct法計(jì)算各目的基因相對(duì)表達(dá)。

1.3.3 MTT 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：取轉(zhuǎn)染培養(yǎng)后對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期待測(cè)細(xì)胞以1×106/孔接種于96 孔板，每組設(shè)3 個(gè)生物復(fù)孔，37 ℃，5ml/dl CO2條件下孵育4 h，每孔加入100 μl MTS 反應(yīng)溶液，常規(guī)繼續(xù)培養(yǎng)2，24，48，72 h，在490 nm 處測(cè)量各孔吸光度（A值）。

1.3.4 劃痕遷移實(shí)驗(yàn) : 取培養(yǎng)貼壁后各組進(jìn)行轉(zhuǎn)染，到細(xì)胞生長(zhǎng)至密度達(dá)90%時(shí)用槍頭垂直于孔板背面在盤中央劃痕，PBS 清洗細(xì)胞3 次，去除劃下細(xì)胞，加入無(wú)血清培基液，37 ℃，5ml/dl CO2培養(yǎng)24 h 后拍照觀察，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次取平均值。

1.3.5 PRR34-AS1 靶基因預(yù)測(cè)：通過(guò)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)網(wǎng)站預(yù)測(cè)lncRNA PRR34-AS1 與JAK1 結(jié)合的基因位點(diǎn)，雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證兩者靶向關(guān)系。

1.3.6 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)：將細(xì)胞接種到6孔板，通過(guò)構(gòu)建包含PRR34-AS1 基因位點(diǎn)在內(nèi)的含有海腎熒光素酶報(bào)道質(zhì)粒的JAK1 3’ UTR-wt 野生型和JAK1 3’UTR-mut 突變型熒光質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中，使用熒光素酶測(cè)定系統(tǒng)測(cè)量各組細(xì)胞熒光素酶活性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次取平均值。

1.3.7 細(xì)胞回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)：取消化培養(yǎng)后各組細(xì)胞鋪于96 孔板或6 孔板，37 ℃，5ml/dl CO2孵育貼壁后進(jìn)行轉(zhuǎn)染，將siCTL，siRNA-PRR34-AS1，siRNAJAK1，siRNA-PRR34-AS1+ JAK1 及siRNA-JAK1 + PRR34-AS1 分別轉(zhuǎn)染至細(xì)胞中，每孔設(shè)3 個(gè)復(fù)孔；后按照細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)步驟檢測(cè)各組細(xì)胞增殖、遷移情況進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用one-way ANOVA 分析，組間比較采用LSD 檢驗(yàn)；癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織中差異比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組織中l(wèi)ncRNA PRR34-AS1 表達(dá)特征 30組臨床肝癌組織中PRR34-AS1 表達(dá)顯著高于臨近正常組織（5.714±0.612 vs 2.981±0.572），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=17.870，P=0.000）；同時(shí)檢索GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)，相比于臨近正常組織，肝癌組織中PRR34-AS1 顯著高表達(dá)，具有表達(dá)水平越高預(yù)后越差的臨床特征，見(jiàn)圖1。提示PRR34-AS1 扮演原癌基因角色，可能參與肝癌的發(fā)生發(fā)展。

圖1 GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)中分析PRR34-AS1 在肝癌中的表達(dá)特征

2.2 敲降PRR34-AS1 表達(dá)轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)siRNA-PRR34-AS1#1 組（0.289±0.046） 和siRNAPRR34-AS1#2 組（0.302±0.031）細(xì)胞中PRR34-AS1表達(dá)明顯低于陰性對(duì)照siCTL 組（1.001±0.030），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=375.552，P＜0.001），提示敲降PRR34-AS1 表達(dá)轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證成功。

2.3 PRR34-AS1 促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，隨著轉(zhuǎn)染時(shí)間延長(zhǎng)，siRNA-PRR34-AS1#1 組和siRNA-PRR34-AS1#2 組細(xì)胞增殖率較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），不同時(shí)間點(diǎn)各組細(xì)胞A值見(jiàn)表1。劃痕遷移實(shí)驗(yàn)顯示，siRNA-PRR34-AS1#1 組（38.451±4.263）和siRNAPRR34-AS1#2 組（42.106±3.512）細(xì)胞愈合遷移速率較對(duì)照組（83.247±6.205）顯著減慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=83.357，P＜0.001），表明PRR34-AS1高表達(dá)促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，發(fā)揮致癌基因作用。

表1 敲低PRR34-AS1 表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞A 值的影響(±s)

表1 敲低PRR34-AS1 表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞A 值的影響(±s)

時(shí)間（h） siCTL 組① siRNA-PRR34-AS1#1 組② siRNA-PRR34-AS1#2 組③ F P ① vs ② ① vs ③t1 P1 t2 P2 0 0.189±0.012 0.196±0.009 0.193±0.011 0.321 0.737 0.808 ＞0.05 0.426 ＞0.05 24 0. 386±0.021 0.209±0.016 0.221±0.017 89.297 <0.001 11.958 ＜0.001 11.147 ＜0.001 48 0.537±0.027 0.334±0.019 0.347±0.015 88.378 <0.001 11.875 ＜0.001 11.115 ＜0.001 72 0.649±0.032 0.398±0.022 0.420±0.024 83.440 <0.001 11.664 ＜0.001 10.641 ＜0.001

2.4 PRR34-AS1 靶向正調(diào)控JAK1 表達(dá)，JAK1 促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖 通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，PRR34-AS1可通過(guò)調(diào)控JAK1 表達(dá)參與癌癥的發(fā)展進(jìn)程[16]。研究經(jīng)檢索生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)JAK1 3’ UTR區(qū)含有潛在的PRR34-AS1 結(jié)合位點(diǎn)(見(jiàn)圖2)，推測(cè)JAK1 可能是PRR34-AS1 的靶基因。后將JAK1 3’ UTR質(zhì)粒及siRNA-PRR34-AS1共轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞中，雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染siRNA-PRR34-AS1 顯著抑制了JAK1 3’ UTR-wt 質(zhì)粒熒光素酶活性（P<0.001），而對(duì)JAK1 3’ UTRmut 質(zhì)粒熒光素酶活性無(wú)明顯影響（P>0.05），見(jiàn)表2，證實(shí)JAK1 是PRR34-AS1 的靶基因。進(jìn)一步探究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比（1.002±0.003），siRNAPRR34-AS1#1 組（0.453±0.019）和siRNA-PRR34-AS1#2 組（0.476±0.022）細(xì)胞中JAK1 相對(duì)表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=716.287，P＜0.001），表明PRR34-AS1 靶向正調(diào)控JAK1 表達(dá)。同時(shí)經(jīng)轉(zhuǎn)染2 條siRNA 敲低肝癌細(xì)胞中JAK1 表達(dá)，發(fā)現(xiàn)較對(duì)照組相比，敲低JAK1 表達(dá)明顯減緩了肝癌細(xì)胞的增殖速率（P<0.05），見(jiàn)表3，證明肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中JAK1 同樣發(fā)揮促癌基因作用。

圖2 生物信息網(wǎng)站預(yù)測(cè)PRR34-AS1 與JAK1 的結(jié)合位點(diǎn)

表2 PRR34-AS1 與JAK1 結(jié)合關(guān)系驗(yàn)證(±s)

表2 PRR34-AS1 與JAK1 結(jié)合關(guān)系驗(yàn)證(±s)

類別 siCTL 組 siRNA-PRR34-AS1 組 t P WT 1.002±0.005 0.437±0.021 45.333 ＜0.001 MUT 1.001±0.003 0.977±0.016 1.490 0.211

表3 敲低JAK1 表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞A 值的影響(±s)

表3 敲低JAK1 表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞A 值的影響(±s)

時(shí)間（h） siCTL 組① siRNA-JAK1#1 組② siRNA-JAK1#2 組③ F P ① vs ② ① vs ③t1 P1 t2 P2 0 0.203±0.008 0.201±0.012 0.202±0.010 0.039 0.962 0.240 ＞0.05 0.315 ＞0.05 24 0. 396±0.022 0.232±0.019a 0.225±0.016a 76.548 <0.001 10.485 ＜0.001 10.932 ＜0.001 48 0.501±0.026 0.354±0.020a 0.332±0.018a 54.272 <0.001 8.334 ＜0.001 9.581 ＜0.001 72 0.598±0.031 0.421±0.025a 0.417±0.023a 45.465 <0.001 8.164 ＜0.001 8.349 ＜0.001

2.5 JAK1 在肝癌組織中的表達(dá)及與PRR34-AS1 的相關(guān)性分析 30 組臨床肝癌組織中JAK1 表達(dá)顯著高于癌旁正常組織（5.963±1.214 vs 4.052±0.876），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=6.992，P=0.000），肝癌組織中PRR34-AS1 與JAK1 表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.907，P<0.05）。

2.6 PRR34-AS1 正向調(diào)控JAK1 促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和遷移 見(jiàn)表4。細(xì)胞回補(bǔ)試驗(yàn)驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，在敲低PRR34-AS1 表達(dá)的肝癌細(xì)胞中回補(bǔ)JAK1 后，肝癌細(xì)胞增殖、遷移速率又回歸到正常水平。證實(shí)PRR34-AS1 可通過(guò)調(diào)控JAK1 來(lái)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和遷移。

表4 PRR34-AS1 調(diào)控JAK1 對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移的影響(±s)

表4 PRR34-AS1 調(diào)控JAK1 對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移的影響(±s)

注：t1 為① vs ②，t2 為① vs ③，t3 為① vs ④；細(xì)胞增殖A 值的t1=10.122，t2=9.252，t3=1.739，均P<0.001;細(xì)胞遷移率(%)的t1=8.100，t2=8.545，t3=0.683，均P<0.001。

類別 siCTL 組① siRNA-PRR34-AS1 組② siRNA-JAK1 組③ siRNA-PRR34-AS1+ JAK1 組④ F 值 P 值細(xì)胞增殖A 值 0.586±0.019 0.423±0.015a 0.437±0.023a 0.614±0.021 90.701 ＜0.001細(xì)胞遷移率(%) 82.154±5.896 48.213±3.988 a 46.347±4.305a 85.014±6.013 50.224 ＜0.001

3 討論

肝癌作為臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期癥狀不明顯，臨床診斷多為中晚期，手術(shù)治療后5年生存率較低[1]。臨床常采用腫瘤分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等傳統(tǒng)病理特征來(lái)評(píng)估患者生存期，但其效果并不理想[3]。近年研究表明，lncRNAs 的異常表達(dá)與癌癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，發(fā)現(xiàn)其可以通過(guò)影響mRNA 的穩(wěn)定性及翻譯、蛋白質(zhì)修飾過(guò)程，作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源RNA 或mRNA 前體發(fā)揮功能，也可招募相關(guān)因子改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)影響基因表達(dá)，廣泛參與疾病生理、病理過(guò)程[17-18]。如既往研究報(bào)道，PTENP1 可競(jìng)爭(zhēng)性吸附miR-20a，miR-19b，減少其與3'UTR 結(jié)合，從而抑制腫瘤的發(fā)展[19]；lncRNA CASC15 在肝癌中通過(guò)SOX4 /Wnt/β-catenin 信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[20]。提示lncRNAs 與肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，故積極探究更多特異性lncRNAs 對(duì)肝癌臨床研究具有重要意義。

本研究前期通過(guò)檢索GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)，除既往研究報(bào)道的lncRNAs 外，PRR34-AS1 在肝癌組織中也異常高表達(dá)。最新研究也表明，PRR34-AS1 通過(guò)吸附microRNA-498 可上調(diào)FOXO3 表達(dá)，加速肝細(xì)胞癌的發(fā)展進(jìn)程[14]。PRR34-AS1 使miR-498 海綿化促進(jìn)了TOMM20 和ITGA6 介導(dǎo)的肝癌進(jìn)展[15]，更加證實(shí)了其在肝癌發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色?；谀壳皣?guó)內(nèi)外關(guān)于PRR34-AS1 的研究報(bào)道有限，其調(diào)控肝癌發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制尚未探明且相關(guān)報(bào)道鮮少，故研究擬探究PRR34-AS1在肝癌中的表達(dá)，以及對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及潛在分子作用機(jī)制。首先，研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中PRR34-AS1 顯著高表達(dá)，同時(shí)檢索GEPIA 數(shù)據(jù)庫(kù)證實(shí)肝癌組織中PRR34-AS1 高表達(dá)且具有高表達(dá)預(yù)后差的臨床特征，提示其可能扮演原癌基因角色發(fā)揮作用。通過(guò)轉(zhuǎn)染siRNA 介導(dǎo)敲低PRR34-AS1 表達(dá)，經(jīng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探究發(fā)現(xiàn)，敲低PRR34-AS1 表達(dá)顯著抑制了肝癌細(xì)胞的增殖、遷移速率，確定了其致癌基因?qū)傩?，與既往研究相符。

近年研究表明，腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因參與調(diào)控的極其復(fù)雜的過(guò)程，除癌基因的激活和抑癌基因的失活外，信號(hào)通路也參與其中[7]。JAK / STAT 信號(hào)通路是細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)的下游通路，研究發(fā)現(xiàn)其能調(diào)控細(xì)胞的分化、增殖及凋亡等過(guò)程，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移及耐藥機(jī)制形成中起著重要作用[21]。Janus 激酶（JAK）屬于非受體酪氨酸激酶家族，由JAK1，JAK2，JAK3 和TYK2 組成，可響應(yīng)各種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子（STAT）蛋白[22-23]。STAT 在包括肝細(xì)胞癌（HCC）、頭頸癌、乳腺癌和肺癌等不同類型的人類癌癥中異常激活，而JAK 是調(diào)控激活STAT酪氨酸激酶功能的主要因素，提示被激活的JAK1/STAT3 信號(hào)傳導(dǎo)與腫瘤發(fā)生和癌癥進(jìn)展有關(guān)[24-26]。正常情況下，機(jī)體可通過(guò)JAK 和STAT 反饋調(diào)節(jié)模式來(lái)維持動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)；當(dāng)機(jī)體發(fā)生病變時(shí)，JAK蛋白被激活后發(fā)生磷酸化，其信號(hào)傳導(dǎo)途徑被打開(kāi)，導(dǎo)致STAT 蛋白中的酪氨酸殘基被磷酸化形成同源二聚體，其與細(xì)胞核中的靶基因結(jié)合，從而進(jìn)行調(diào)控表達(dá)[24,26]。另?yè)?jù)相關(guān)報(bào)道，JAK/STAT 信號(hào)通路在正常細(xì)胞中受到嚴(yán)格調(diào)節(jié)，且由于癌細(xì)胞中JAK 家族激酶或其他酪氨酸激酶的異常激活而被持續(xù)激活[27]。而在JAK/STAT 家族成員中，JAK1/STAT3 在許多生物學(xué)過(guò)程（例如細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、遷移和侵襲）中起著至關(guān)重要的作用[28]。JAK1 刺激STAT3 磷酸化可促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和血管生成[29-30]。相關(guān)研究也表明[31]，JAK/STAT 信號(hào)通路在肝癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，抑制該通路則顯著抑制了體內(nèi)HCC 細(xì)胞的生長(zhǎng)。本研究經(jīng)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，PRR34-AS1 能夠調(diào)控JAK1 基因表達(dá)，PRR34-AS1 過(guò)表達(dá)通過(guò)阻斷JAK1 依賴的JAK/STAT 信號(hào)通路能夠促進(jìn)丙泊酚預(yù)處理對(duì)全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)后小鼠缺血/再灌注損傷的保護(hù)[17]，提示PRR34-AS1 發(fā)揮作用與JAK/STAT 通路間的緊密性。研究經(jīng)熒光霉素實(shí)驗(yàn)證實(shí)PRR34-AS1 與JAK1 確實(shí)存在相互結(jié)合位點(diǎn)，JAK1 是PRR34-AS1 的靶基因，且探究發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中JAK1 也顯著高表達(dá)，與PRR34-AS1 呈顯著正相關(guān)；同時(shí)JAK1 表達(dá)受PRR34-AS1 調(diào)控，敲低JAK1 表達(dá)明顯抑制了肝癌細(xì)胞增殖速率；細(xì)胞回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在敲低PRR34-AS1 表達(dá)的肝癌細(xì)胞中回補(bǔ)JAK1后肝癌細(xì)胞增殖、遷移速率恢復(fù)到正常水平，由此初步證明了PRR34-AS1 促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖和遷移是通過(guò)正調(diào)控JAK1 表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。然而癌基因參與調(diào)控腫瘤發(fā)生的機(jī)制及信號(hào)通路復(fù)雜，研究對(duì)PRR34-AS1 調(diào)控JAK/STAT 信號(hào)通路發(fā)揮作用參與肝癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制較表淺，因此后期還需通過(guò)體內(nèi)體外試驗(yàn)進(jìn)一步深入探討兩者間的調(diào)控作用關(guān)系，以期得出更精確結(jié)論用于臨床指導(dǎo)。

綜上所述，肝癌中PRR34-AS1 顯著高表達(dá)，敲低PRR34-AS1 則顯著抑制了肝癌細(xì)胞的增殖和遷移，其可能通過(guò)正向調(diào)控JAK1 表達(dá)影響JAK/STAT信號(hào)通路，進(jìn)而發(fā)揮作用參與肝癌的惡性進(jìn)展。