淡麗娟，柴少竹，黎桂玉，蘇悅，鄒嘉曦，文莉

慢性乙型肝炎（CHB）指由乙型肝炎病毒（HBV）持續(xù)感染引起的慢性肝臟炎性疾病，其傳染性較強、發(fā)病率較高，可引起多個器官損傷[1]。據(jù)統(tǒng)計，全球范圍內(nèi)約有2.4億HBV感染者[2]，而CHB是全球主要健康負擔(dān)之一[3]。研究表明，中醫(yī)藥治療CHB在改善患者癥狀、減輕肝損傷、延緩病情進展等方面具有一定優(yōu)勢和特色[4-5]，而辨證論治雖是中醫(yī)藥治療疾病的精髓與核心，但由于辨證存在一定主觀性及復(fù)雜性，因此中醫(yī)藥治療優(yōu)勢的發(fā)揮受到一定影響。

濕熱證是CHB的常見證候，但其定位尚存在一定爭議：受現(xiàn)代解剖定位影響，有學(xué)者認為CHB應(yīng)該定位于肝膽[6]；丁然等[7]通過對19 000余份病毒性肝炎患者病位證素進行統(tǒng)計分析認為病毒性肝炎主要病位證素是脾而非肝；蔡行平[8]提出“肝病纏綿當(dāng)以治脾為先”，認為脾虛對于肝組織的病理變化影響深遠。筆者所在課題組前期研究結(jié)果顯示，1 260例CHB患者中184例（占14.6%）為肝膽濕熱證，211例（占16.7%）為脾胃濕熱證，提示脾胃濕熱證是CHB患者最常見證型，而脾胃與肝膽均是CHB常見病變部位[9]。由于缺乏客觀生物學(xué)依據(jù)，因此CHB濕熱證病位是否存在脾胃與肝膽的差異目前仍存在爭議。此外，脾胃濕熱證和肝膽濕熱證同為中焦?jié)駸嶙C，二者均有納差、嘔惡、口干口苦、舌紅、苔膩等濕熱證表現(xiàn)，辨證分型較易混淆，但二者治療處方不盡相同，因此有必要尋找二者證候差異的生物學(xué)本質(zhì)及客觀標(biāo)志物。本研究在前期研究基礎(chǔ)上對通過蛋白組學(xué)分析技術(shù)篩選出來的差異表達蛋白進行了深入分析，旨在從差異表達蛋白及其調(diào)控層面探討CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的證候差異、探尋區(qū)分二者的潛在客觀標(biāo)志物，為CHB的辨證論治提供生物學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2019年1月中國人民解放軍西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院肝病科門診、消化科門診收治的CHB患者30例，其中辨證分型為肝膽濕熱證者15例（肝膽濕熱組）、脾胃濕熱證者15例（脾胃濕熱組）；另選取同期在中國人民解放軍西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院體檢健康者10例作為對照組。對照組受試者中男5例，女5例；年齡26～50歲，平均年齡為（25.0±7.6）歲。肝膽濕熱組患者中男11例，女4例；年齡18～54歲，平均年齡為（39.5±32.0）歲。脾胃濕熱組患者中男10例，女5例；年齡27～50歲，平均年齡為（41.0±38.5）歲。三組受試者性別（χ2=1.47，P=0.48）、年齡（F=0.92，P=0.41）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他肝炎病毒和/或人免疫缺陷病毒（HIV）感染；（2）合并肝硬化、惡性腫瘤；（3）合并藥物性或中毒性肝損傷、自身免疫性肝炎及其他遺傳-代謝性肝臟疾?。唬?）合并嚴(yán)重心、肺及內(nèi)分泌、血液系統(tǒng)等疾?。唬?）合并高血壓、糖尿病、腎臟病；（6）妊娠或哺乳期女性；（7）伴有精神疾病等；（8）存在研究者認為不適合納入研究的其他情況。本研究通過成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查，三組受試者均被告知研究內(nèi)容、目的及相關(guān)注意事項并自愿簽署知情同意書。

1.2 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) CHB的西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》[1]，具體如下：（1）血清HBV表面抗原（HBsAg）和/或HBV脫氧核糖核酸（HBV-DNA）陽性時間＞6個月，可診斷；（2）既往有CHB病史且血清HBsAg陽性，可診斷；（3）血清HBsAg、HBV e抗原（HBeAg）、HBV-DNA均為陽性，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）持續(xù)或反復(fù)升高，或兼肝組織病理學(xué)病變診斷為HBeAg陽性CHB；血清HBsAg陽性、HBeAg陰性、HBV-DNA陽性，ALT持續(xù)或反復(fù)升高，或兼肝組織學(xué)病變診斷為HBeAg陰性CHB。

1.3 中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn) 中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)參照《慢性乙型肝炎中醫(yī)診療指南（2018年版）》[7]。

1.3.1 肝膽濕熱證 主癥：（1）脅肋脹痛；（2）舌苔黃膩，脈弦數(shù)或弦滑數(shù)。次癥：（1）嘔惡納呆，厭油膩；（2）身目發(fā)黃、色澤鮮明；（3）小便黃。具備以上所有主癥、主癥（1）及任意兩項次癥、主癥（2）及次癥（1）（2）者辨證分型為肝膽濕熱證。

1.3.2 脾胃濕熱證 主癥：（1）脘腹痞悶；（2）苔黃膩。次癥：（1）嘔惡納呆，厭油膩；（2）身目發(fā)黃、色澤鮮明，小便黃；（3）大便臭穢黏滯。具備以上所有主癥、主癥（1）及任意兩項次癥、主癥（2）及次癥（1）（2）者辨證分型為脾胃濕熱證。

1.4 差異表達蛋白分析 采集三組受試者清晨空腹肘靜脈血3～5 ml，室溫下靜置1 h，待血清析出后置于離心機并以3 500 r/min的速率離心10 min以進一步分離血清，溫度設(shè)置為4 ℃；離心完成后提取1 ml上清液并置于凍存管及-80 ℃冰箱中保存，之后用干冰密封。結(jié)合筆者所在課題組前期通過蛋白組學(xué)分析技術(shù)篩選出的CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證差異表達蛋白，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測目標(biāo)蛋白，包括人癌胚抗原相關(guān)細胞黏附分子1（CEACAM1）、單核細胞趨化蛋白1（MCP-1）、基質(zhì)細胞衍生因子1（SDF-1）、人類黏蛋白2（ORM2）、人膜突蛋白（MSN）、纖維膠凝蛋白2（FCN2）、血管細胞黏附分子1（VCAM-1）、胰島素樣生長因子1（IGF-1）、人神經(jīng)源性基因座同源缺口蛋白2（NOTCH2）、人β-淀粉樣前體蛋白（β-APP）、人烏頭酸酶（ACO1）、人山梨醇脫氫酶（SORD）、人乙醛脫氫酶1家族成員A1（ALDH1A1），試劑盒均來源于上?；顦飞锟萍加邢薰荆a(chǎn)批號依次為20903C18、20903M03、20903S21、20903R16、20903M42、20903F38、20903K24、20903G15、20903N07、20903A16、20903A67、20903S33、20903A02。按照相應(yīng)試劑盒說明書，采用酶標(biāo)儀在450 nm波長處依序測量各個酶孔光密度（OD）值，并根據(jù)OD值計算目標(biāo)蛋白表達量。

本研究背景:

濕熱證是慢性乙型肝炎的常見證候，而作為慢性乙型肝炎常見證型，肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的辨證分型較易混淆，但二者治療處方不盡相同。目前，關(guān)于慢性乙型肝炎肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異的生物學(xué)本質(zhì)及能夠區(qū)分二者的客觀生物學(xué)標(biāo)志物均鮮有報道。

本研究創(chuàng)新點:

本研究從差異表達蛋白及其調(diào)控層面探討了慢性乙型肝炎肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異的生物學(xué)本質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)了區(qū)分二者的潛在蛋白。

本研究價值:

本研究從現(xiàn)代生物學(xué)角度揭示了慢性乙型肝炎肝膽濕熱證與脾胃濕熱證因病位差異而呈不同證候表現(xiàn)的本質(zhì)，有利于豐富中醫(yī)證候現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵，為慢性乙型肝炎濕熱證的精準(zhǔn)化辨證論治及方藥作用靶點研究提供生物學(xué)依據(jù)。

1.5 生物信息學(xué)分析 通過生物信息學(xué)在線工具STRING數(shù)據(jù)庫對差異表達蛋白進行蛋白相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)分析，同時運用Excel 2016、DAVID Bioinformatics Resources 6.7等對差異表達蛋白進行基因本體論數(shù)據(jù)庫（gene ontology，GO）富集和生物途徑（Kyoto encylopedia of genes and genomes，KEGG）信號通路分析。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，本研究中計量資料均符合正態(tài)分布，以（±s）表示，三組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較采用q檢驗；采用MedCalc18.11.6繪制受試者工作特征（ROC）曲線以分析差異表達蛋白對CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的鑒別診斷價值，一般認為在ROC曲線下面積（AUC）＞0.50的情況下AUC越接近于1則診斷效能越高，本研究以AUC0.50～0.69為診斷準(zhǔn)確性較低，0.70～0.90為診斷準(zhǔn)確性中等，＞0.90為診斷準(zhǔn)確性較高[10]。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 差異表達蛋白分析 三組受試者CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP、ACO1、SORD、ALDH1A1蛋白表達量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；肝膽濕熱組、脾胃濕熱組患者CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP、ACO1、SORD、ALDH1A1蛋白表達量均低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；脾胃濕熱組患者CEACAM1、MCP-1、MSN、VCAM-1蛋白表達量高于肝膽濕熱組，SDF-1、ORM2、FCN2、IGF-1、NOTCH2、β-APP蛋白表達量低于肝膽濕熱組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

以P＜0.01為標(biāo)準(zhǔn)進一步篩選肝膽濕熱證與脾胃濕熱證差異表達蛋白，結(jié)果上述10種差異表達蛋白僅CEACAM1、SDF-1、MSN、IGF-1入選，其中脾胃濕熱組患者CEACAM1、MSN蛋白表達量高于肝膽濕熱組，SDF-1、IGF-1蛋白表達量低于肝膽濕熱組（P＜0.01，見圖1）。

2.2 生物信息學(xué)分析 PPI網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果顯示，CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證之間CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP蛋白存在較緊密的關(guān)聯(lián)（見圖2）；GO富集分析結(jié)果顯示，CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP蛋白的生物學(xué)效應(yīng)主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、細胞黏附分子結(jié)合、G蛋白耦聯(lián)受體結(jié)合、信號受體結(jié)合、胰島素受體結(jié)合等；KEGG信號通路分析結(jié)果顯示，CEACAM1、MCP-1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP蛋白主要參與白細胞跨內(nèi)皮遷移、核因子（NF）-κB信號通路、內(nèi)分泌抵抗、晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGE）-晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）信號通路、腫瘤壞死因子（TNF）信號通路、癌癥相關(guān)通路等。

2.3 ROC曲線分析 CHB肝膽濕熱組與脾胃濕熱組之間差異表達（P＜0.01）蛋白CEACAM1、SDF-1、MSN、IGF-1鑒別診斷CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的ROC曲線進行分析，結(jié)果顯示CEACAM1、SDF-1、MSN的P值均＜0.05，而IGF-1的P值＞0.05，因此分別以CEACAM1、SDF-1、MSN建立單獨鑒別診斷模型，結(jié)果顯示CEACAM1、SDF-1、MSN鑒別診斷CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的AUC分別為0.73〔95%CI（0.54，0.87）〕、0.70〔95%CI（0.51，0.85）〕、0.72〔95%CI（0.53，0.86）〕，靈敏度分別為86.67%、86.67%、80.00%，特異度均為56.25%（見圖3）。

圖1 三組受試者差異表達蛋白表達量比較的散點圖Figure 1 Scatter plots for comparison of expression levels of differentially expressed proteins in two syndrome-based subgroups of chronic hepatitis B and control group

圖2 CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證之間10種差異表達蛋白的PPI網(wǎng)絡(luò)分析Figure 2 PPI network analysis of 10 differentially expressed proteins between liver-gallbladder damp-heat and spleen-stomach dampness-heat syndromes in chronic hepatitis B

表1 三組受試者差異表達蛋白表達量比較（±s）Table 1 Comparison of the levels of differentially expressed proteins in two syndrome-based subgroups of chronic hepatitis B and control group

表1 三組受試者差異表達蛋白表達量比較（±s）Table 1 Comparison of the levels of differentially expressed proteins in two syndrome-based subgroups of chronic hepatitis B and control group

注：CEACAM1=人癌胚抗原相關(guān)細胞黏附分子1，MCP-1=單核細胞趨化蛋白1，SDF-1=基質(zhì)細胞衍生因子1，ORM2=人類黏蛋白2，MSN=人膜突蛋白，F(xiàn)CN2=纖維膠凝蛋白2，VCAM-1=血管細胞黏附分子1，IGF-1=胰島素樣生長因子1，NOTCH2=人神經(jīng)源性基因座同源缺口蛋白2，β-APP=人β-淀粉樣前體蛋白，ACO1=人烏頭酸酶，SORD=人山梨醇脫氫酶，ALDH1A1=人乙醛脫氫酶1家族成員A1；與對照組比較，aP＜0.05；與肝膽濕熱組比較，bP＜0.05

組別 例數(shù) CEACAM1（μg/L） MCP-1（ng/L） SDF-1（ng/L） ORM2（μg/L） MSN（ng/L） FCN2（μg/L）對照組 10 7.87±2.07 240.50±64.33 573.07±129.55 1 347.18±376.61 450.12±120.94 3.24±0.90肝膽濕熱組 15 3.95±0.69a 99.86±21.47a 355.07±75.61a 731.05±164.78a 214.69±33.29a 2.18±0.37a脾胃濕熱組 15 4.95±0.75ab 134.24±21.83ab 257.36±49.26ab 549.35±155.18ab 263.31±36.06ab 1.73±0.35ab F值 33.17 45.24 38.54 33.99 36.18 24.59 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01組別 VCAM-1（μg/L） IGF-1（μg/L） NOTCH2（ng/L） β-APP（μg/L） ACO1（μg/L） SORD（μg/L） ALDH1A1（μg/L）對照組 467.25±112.22 163.56±45.74 178.10±29.17 21.59±6.00 4.68±0.79 7.40±1.99 7.44±1.78肝膽濕熱組 196.48±35.78a 106.46±22.05a 126.31±25.07a 14.64±2.83a 2.32±0.51a 4.18±1.20a 4.17±0.85a脾胃濕熱組 251.59±64.17ab 83.21±17.47ab 108.07±22.64ab 11.60±2.14ab 2.49±0.49a 3.31±0.72a 4.91±0.72a F值 43.19 24.19 21.68 20.38 54.57 28.36 24.80 P 值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 討論

辨證論治是中醫(yī)學(xué)的核心理論，辨證是論治的前提和基礎(chǔ)，而證候的本質(zhì)研究和證候生物學(xué)標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)是實現(xiàn)中醫(yī)臨床與理論突破的核心科學(xué)技術(shù)問題之一[11]。近年來，基于蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)開展的生物學(xué)研究為深入闡釋中醫(yī)證候本質(zhì)提供了新的切入點，多種中醫(yī)證候生物學(xué)標(biāo)志物已在不同疾病研究中被發(fā)現(xiàn)，如WEN等[12]研究發(fā)現(xiàn)纖維連接蛋白1（FN1）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX3）和角蛋白10（KRT10）為艾滋病熱毒蘊結(jié)證特異性表達蛋白，而視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）、載脂蛋白E（ApoE）和激肽原1（KNG1）則為艾滋病脾腎陽虛證特異性表達蛋白；JIANG等[13]研究發(fā)現(xiàn)γ-谷氨酰水解酶（GGH）、免疫球蛋白 G3（IGHG3）、結(jié)合珠蛋白（HPT）分別為肺結(jié)核肺陰虛證、陰虛火旺證、氣陰兩虛證特異性表達蛋白；LIU等[14]研究發(fā)現(xiàn)KNG1、載脂蛋白C3（APOC3）和對氧磷酶1（PON1）可作為中醫(yī)陰虛熱證的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。本研究以CHB兩種最常見的濕熱證肝膽濕熱證和脾胃濕熱證為切入點，在筆者所在課題組前期研究基礎(chǔ)上結(jié)合ELISA、生物信息學(xué)在線工具、ROC曲線等進行了差異表達蛋白分析、生物信息學(xué)分析、鑒別診斷價值分析，并針對既往研究多停留在探索疾病中醫(yī)證候客觀標(biāo)志物層面的局限性，從差異表達蛋白及其調(diào)控層面探討了CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異的生物學(xué)基礎(chǔ)，以期為遷延難愈不易區(qū)分的CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的辨證論治提供生物學(xué)依據(jù)，篩選潛在客觀標(biāo)志物。

圖3 CEACAM1、MSN、SDF-1對CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證鑒別診斷價值的ROC曲線Figure 3 ROC curve for CEACAM1，MSN and SDF-1 in distinguishing liver-gallbladder damp-heat and spleen-stomach damp-heat syndromes in chronic hepatitis B

研究表明，白細胞跨內(nèi)皮遷移作為白細胞募集的最后一步，在感染性疾病及免疫反應(yīng)過程中具有重要作用，而抑制作為炎性反應(yīng)中樞通路的NF-κB信號通路則可減輕腸黏膜上皮損傷和炎性反應(yīng)程度[15-16]，同時AGE與RAGE相互作用可引起氧化應(yīng)激反應(yīng)、激活NF-κB并刺激VCAM-1等炎性細胞因子的表達，進而引發(fā)瀑布式炎性反應(yīng)[17]。本研究結(jié)果顯示，脾胃濕熱組患者CEACAM1、MCP-1、MSN、VCAM-1蛋白表達量高于肝膽濕熱組，SDF-1、ORM2、FCN2、IGF-1、NOTCH2、β-APP蛋白表達量低于肝膽濕熱組，進一步行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證之間CEACAM1、SDF-1、ORM2、MSN、FCN2、VCAM-1、IGF-1、NOTCH2、β-APP存在較緊密的關(guān)聯(lián)，且這10種差異表達蛋白的生物學(xué)效應(yīng)主要涉及蛋白質(zhì)結(jié)合、細胞黏附分子結(jié)合、G蛋白耦聯(lián)受體結(jié)合、信號受體結(jié)合、胰島素受體結(jié)合等，并主要參與白細胞跨內(nèi)皮遷移、NF-κB信號通路、內(nèi)分泌抵抗、AGE-RAGE信號通路、TNF信號通路、癌癥相關(guān)通路等，提示CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異可能與NF-κB信號通路和AGE-RAGE信號通路、氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)，但具體機制尚需進一步研究。

CEACAM1主要參與肝細胞的分化及細胞間通訊，在細胞活化、增殖，分化及凋亡相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中具有重要作用[18-21]。近年研究表明，CEACAM1是特異性CD8+T細胞的重要功能調(diào)節(jié)因子，CD8+T細胞CEACAM1缺陷會導(dǎo)致脾、淋巴結(jié)、肝及血清中抗病毒抗體減少[22]；此外，CEACAM1還可通過多種細胞間黏附、細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)而影響細胞生長和分化，在炎癥調(diào)節(jié)、癌癥相關(guān)免疫反應(yīng)方面具有重要作用[23]。由于CHB濕熱證嚴(yán)重程度在一定程度上可反映肝臟炎癥損傷程度，因此CEACAM1可能通過調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)而參與CHB濕熱證的發(fā)生和發(fā)展[24]。

SDF-1也稱為CXCL12，是一類具有趨化活性的細胞因子，主要在肝臟等組織中廣泛表達，除在包括胚胎發(fā)生、造血、血管生成及炎癥在內(nèi)的生理和病理過程中發(fā)揮著重要作用外，還在多種傳染性疾病、炎性疾病、自身免疫性疾病及惡性疾病中發(fā)揮著重要作用[25]。研究表明，SDF-1可激活并誘導(dǎo)干細胞、內(nèi)皮細胞及大多數(shù)白細胞遷移，同時可通過與其受體CXC趨化因子受體4（CXCR4）和非典型趨化因子受體3（ACKR3）相互作用及與組織、內(nèi)皮中糖胺聚糖（GAGs）結(jié)合而在穩(wěn)態(tài)和病理條件下發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)[26]。

MSN是ERM（ezrin-radixin-moesin）蛋白家族成員，雖然ERM蛋白主要在肝臟組織中特異性表達，但MSN僅在肝星狀細胞中表達；此外，MSN也是內(nèi)皮細胞中唯一的含量豐富的ERM蛋白。研究表明，與正常組織相比，肝癌組織中MSN表達量明顯升高，且MSN的表達與肝癌分化、侵襲密切相關(guān)[27]。

由上述可知，CEACAM1、SDF-1、MSN的生物學(xué)效應(yīng)可能與CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異存在一定關(guān)聯(lián)性，這也為其作為區(qū)分CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的潛在客觀標(biāo)志物奠定了基礎(chǔ)。本研究以P＜0.01為標(biāo)準(zhǔn)進一步篩選肝膽濕熱證與脾胃濕熱證差異表達蛋白，結(jié)合筆者前期研究發(fā)現(xiàn)的16種（筆者前期研究共發(fā)現(xiàn)16種，本研究初始納入13種）差異表達蛋白僅CEACAM1、SDF-1、MSN、IGF-1入選，進一步繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)CEACAM1、SDF-1、MSN的P值均＜0.05，而IGF-1的P值＞0.05，因此分別以CEACAM1、SDF-1、MSN建立的單獨鑒別診斷模型結(jié)果顯示，CEACAM1、SDF-1、MSN鑒別診斷CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的AUC分別為0.73、0.72、0.70，表明CEACAM1、SDF-1、MSN對CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的鑒別診斷準(zhǔn)確性為中等，可作為區(qū)分CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的潛在客觀標(biāo)志物。

綜上所述，CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證之間存在客觀差異，CEACAM1、SDF-1、MSN、IGF-1是二者主要差異表達蛋白，CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異的生物學(xué)機制可能與NF-κB信號通路、AGE-RAGE信號通路介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)等有關(guān)，而CEACAM1、SDF-1、MSN可作為區(qū)分CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證的潛在客觀標(biāo)志物；但本研究樣本量有限、相關(guān)差異表達蛋白在CHB濕熱證中的具體作用尚不明確，后期有待擴大樣本量進一步驗證并深入探討導(dǎo)致CHB肝膽濕熱證與脾胃濕熱證證候差異的生物學(xué)機制。

志謝:中國人民解放軍西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院為筆者所在課題組合作醫(yī)院，在此感謝肝病科門診和消化科門診相關(guān)工作人員及指導(dǎo)老師的支持與幫助！

作者貢獻:淡麗娟、柴少竹進行研究的構(gòu)思與設(shè)計及可行性分析，進行資料收集、整理及論文撰寫；黎桂玉、蘇悅進行論文及英文的修訂；鄒嘉曦、文莉負責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對文章整理負責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。