崔詩遙,朗明紫,但彩云,劉 雪,李文樂,李有貴,時連根*
(1.浙江大學 動物科學學院,浙江 杭州 310058; 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學院 蠶桑研究所,浙江 杭州 310021)
在自然界中,可用來食、藥用的真菌多達2000多種,如今已經(jīng)證明了其中的200多種真菌具有抗癌藥效,然而真正被應(yīng)用到臨床和生活中的僅有20多種[1,2]。桑黃(Phellinusbaumii)屬擔子菌亞門(Ba?sidiomyeotina)、層菌綱(Hymenomyeetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、銹革孔菌科(Hymenochaetace?ae)、針層孔菌屬(Phellinus),因寄生于桑樹(Morus alba)而得名,是一種傳統(tǒng)的珍貴藥用真菌,有“森林黃金”之美稱[1]。桑黃在我國已有2000多年的藥用價值,有關(guān)其活性成分的藥理作用研究已成為近年熱點。
桑黃古代亦被稱為“桑耳、桑臣、桑雞、胡孫眼”等,首次被命名來自于唐代甄權(quán)撰寫的《藥性論》,但一直來在本草古籍記載的名稱與來源未曾統(tǒng)一,關(guān)于其性味歸經(jīng)及功效應(yīng)用的描述也各不相同[3]。桑黃除寄生于桑樹的鮑氏針層孔菌(Phellinusbau?mii)外,還有寄生于柳、楊、樺、山楂、花揪等闊葉樹的火木針層孔菌(Phellinusigniarius)以及寄生于丁香、楊、棟、忍冬、女貞、樺槭等樹的裂蹄針層孔菌(Phellinuslinteus),其分布具有明顯的區(qū)域性,在我國境內(nèi)主要分布于東北、華北、西北及四川、云南等地,少量分布在中美洲、非洲和東亞等地[4~6]。桑黃含有黃酮類化合物、多糖類化合物、萜類化合物等活性成分,在古代本草醫(yī)書中記錄有醫(yī)治帶下、延年、閉經(jīng)、血崩、血淋、痢疾、出汗、脫肛瀉血、止瀉以及臍腹?jié)吹?,現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤、抗炎癥、抗氧化、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、護肝等功效,在中國、韓國、日本等東亞地區(qū)被廣泛應(yīng)用于保健品與藥物制劑產(chǎn)品中[3,7,8]。
關(guān)于桑黃活性成分及藥理作用研究,受到國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注,近年來取得很多成果。本文對其主要研究進展進行綜述,以供桑黃的多元化深度開發(fā)研究所參考。
桑黃的化學成分有黃酮類、多糖類、萜類、甾體類、落葉松覃酸、脂肪酸、芳香酸、氨基酸、酶類等,其中多糖類、萜類、黃酮類、甾體類是其重要的活性成分[8,9]。
桑黃子實體的粗多糖主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、樹膠醛醣和木糖等單糖構(gòu)成[10]。王汲通過熱水浸提法提取桑黃粗多糖,提取得率為3.99%,并初步確定含有D-半乳糖、D-乳糖、D-葡萄糖和L-阿拉伯糖[11]。葛青等研究發(fā)現(xiàn),桑黃子實體活性多糖P1F1由甘露糖、葡萄糖及半乳糖組成,其摩爾比為0.64∶1∶1.94,此外還存在一種特殊的單糖:3(4)-O-甲基-己糖[12]。竇茜茜等對桑黃子實體多糖進行分離純化,獲得相對分子質(zhì)量為1.42×104的多糖PL-A和相對分子質(zhì)量為2.22×104的蛋白聚糖PLB,PL-A和PL-B中含有少量甘露糖和多量葡萄糖,PL-B中還存在有鼠李糖[13]。Wang等對桑黃發(fā)酵菌絲體多糖進行分離純化,得到PIP1均一多糖,其分子量為17 kDa,由半乳糖、甘露糖和葡萄糖按4.06∶1.00∶3.70比例組成,經(jīng)鑒定其糖苷鍵為β構(gòu)型,由(1→4)-甘露糖和(1→3)-葡萄糖組成其主鏈,由(1→4,6)-甘露糖和(1→3,6)-葡萄糖組成其側(cè)鏈[14]。
從桑黃中分離得到的黃酮類化合物有桑黃黃酮A(5,7,4’-三羥基-6,2’-二羥基芐基二氫黃酮)、櫻花亭(4’,5-二羥基-7-甲氧基二氫黃酮)、甲基桑黃黃酮A(methylphelligrin A)、柚皮素(4’,5,7-三羥基二氫黃酮)、異甲基桑黃黃酮A(epi-methylphelli?grin A)、7-甲基圣草素(5,3’,4’-三羥基-7-甲氧基二氫黃酮)、異甲基桑黃黃酮B(epi-methylphelligrin B)、芫花素(5,4’-二羥基-7-甲氧基黃酮)、山奈素(5,7,3’,4’-四羥基黃酮醇)、甲基桑黃黃酮B(methylphelligrin B)等[15]。
萜類化合物是由甲戊二羥酸衍生、分子骨架以異戊二烯單元(C5單元)為基本結(jié)構(gòu)單元的化合物及其衍生物。從桑黃中分離得到的萜類化合物有倍半萜、二萜和三萜,其中三萜為主要藥理活性成分[10]。目前分離得到的三萜有羊毛甾醇、羊毛甾-8,25-二烯-3-醇、苯四酸、幼葉酸、羊毛甾-8,23,25-三烯-3,22-二酮-23,26-環(huán)氧、natalic、孕甾-8-烯-20-羧酸-4,4,14-三甲基-3-氧代、阿爾貝酸、松針酸、羊毛甾-30-羥基-8,24-二烯-21-酸、gilvsins A、gilvsins B、gilvsins C、gilvsins D、24-亞甲基 La?nost-8-ene-3β-22-二醇、原人參二醇、白樺脂醇、烏蘇酸、β-乳香酸等[16]。
目前從桑黃中分離得到的甾體類化合物主要有麥角甾烷-7,22-二烯-3-酮、麥角甾烷-3界羥基-7,22-二燦、麥角留烷-4,6,8,22四烯-3-酮、麥角留醇、麥角留烷-(22E)4,7,22-三烯-3-酮、麥角甾烷-5α,8α-環(huán)過氧化物、麥角甾烷-3β,5α,6β-三羥基-7,22-二烯、麥角甾烷-4,6,8(14),22-四烯-3-酮、麥角甾烷-4,6,22-三烯-3-酮(22E)、膽甾烷-3α,12α-二羥基-7-烯-24-酸、啤酒酵母甾醇、膽固醇等[10]。
《本草綱目》記載:桑黃可治腹痛金瘡、癖飲積累。《中藥大辭典》記錄:桑黃用于多種內(nèi)科疾病治療。桑黃子實體入藥,味微苦,具有止瀉、排腸氣、止血、利五臟、排毒等藥效,傳統(tǒng)主要用于醫(yī)治帶下、崩漏、淋病、疵瘕、脾虛泄瀉、癖軟、積聚等癥狀,在日本亦作為利尿劑使用[17]。桑黃的藥理作用主要有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化、抗菌、保肝與抗肝硬化、抗腫瘤等。
溫克等將5種真菌類藥在2個不同種類的移植性腫瘤細胞小鼠模型上進行抗腫瘤試驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn)PL-2、靈芝、阿加里斯茸、桑黃、PL-5對S180腫瘤、胃癌的生長均具有抑制作用,其中桑黃的抗腫瘤效果最為明顯;桑黃的抗腫瘤機理是明顯提高單核-吞噬細胞的吞噬系數(shù)α與吞噬指數(shù)k以及免疫器官指數(shù)(脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)),同時促進T淋巴細胞增殖[18]。張敏等通過實驗發(fā)現(xiàn),桑黃多糖對Lewis肺癌、H22、S180瘤細胞均具有顯著抑制作用,其抑制作用主要是通過激活巨噬細胞并提高其吞噬作用、誘使巨噬細胞產(chǎn)生、分泌腫瘤壞死因子等方式來實現(xiàn)的[19]。Liu等研究發(fā)現(xiàn),桑黃多糖(PBPP)能顯著抑制HELA和SGC-7901細胞的增殖,其體外抗癌作用是通過將細胞分裂阻滯在G2期或S期來實現(xiàn)的[20]。
肝纖維化發(fā)展過程是慢性的,是由慢性肝損傷引起而產(chǎn)生的機體病理反應(yīng),致使肝臟內(nèi)大量膠原纖維增生,以此破壞肝臟的結(jié)構(gòu)與功能。肝纖維化產(chǎn)生原因十分復雜,影響因子也較多,具有多病因、多病變、易漸變、病變可逆、難以治療等特點。近年來國內(nèi)學者研究發(fā)現(xiàn),在藥用真菌中,桑黃、茯苓及冬蟲夏草等均有抗肝纖維化的藥理作用[21]。
張萬國等研究發(fā)現(xiàn),桑黃熱水提取物對于肝損傷、肝纖維化等具有良好的治療效果[22]。用四氯化碳誘發(fā)肝損傷的大鼠模型,研究桑黃對模型大鼠肝臟的保護作用及其作用機理,發(fā)現(xiàn)桑黃治療組大鼠的肝細胞變性程度明顯下降,肝組織結(jié)構(gòu)保持完整,血清中氨基酸轉(zhuǎn)移酶量和活性氧含量明顯降低,合成蛋白質(zhì)能力變強,白細胞介素-4釋放量降低,超氧化物酶活性明顯提升,γ-干擾素量明顯增高;桑黃護肝功效的主要機理:一是調(diào)節(jié)炎癥因子釋放量和抗脂質(zhì)過氧化,其中抗脂質(zhì)過氧化作用是通過提高肝區(qū)微循環(huán)和超氧化物歧化酶(SOD)活性來達到改善血液動力學性能以及清除自由基的目的;二是誘導γ-干擾素生成,γ-干擾素作為肝纖維化的抑制因子,通過調(diào)節(jié)其他細胞因子來間接抑制肝星狀細胞(HSC)的激活或直接抑制肝星狀細胞增殖,同時抑制膠原基因mRNA表達,降低膠原合成[23]。Wang等從蛋白質(zhì)組學方面評價桑黃多糖對肝纖維化模型大鼠的影響,發(fā)現(xiàn)有包括肌動蛋白在內(nèi)的13種蛋白質(zhì)表達量發(fā)生了明顯變化,這些蛋白分別參與氧化應(yīng)激反應(yīng)、亞鐵血紅素和鐵代謝、半胱氨酸代謝、支鏈氨基酸代謝、能量代謝以及谷胱甘肽代謝等,表明桑黃多糖通過減少鐵相關(guān)自由基的產(chǎn)生來抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)、調(diào)節(jié)氨基酸和核酸代謝來增加谷胱甘肽分泌,達到抗肝纖維化的作用[14]。
Kim等免疫學試驗發(fā)現(xiàn),桑黃菌絲體胞外多糖能促進T淋巴細胞增殖,并增強毒性T淋巴細胞的毒性[24]。傅海慶等用桑黃口服液飼喂小鼠,發(fā)現(xiàn)高劑量組小鼠的脾臟和胸腺重量顯著增加,吞噬細胞吞噬能力增強,Th1細胞活性提高,在正向細胞免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[25]。Liu等研究發(fā)現(xiàn),桑黃多糖(PBPP)能促進RAW264.7細胞增殖,增強其吞噬能力,促進其分泌IL-6和TNF-α細胞因子,并增強細胞周期中的S期,顯示出明顯的免疫調(diào)節(jié)活性[20]。Park等研究發(fā)現(xiàn),桑黃多糖通過抑制絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路并提高細胞抗氧化能力,使得LPS誘導的RAW264.7細胞減少炎性因子和趨化因子的分泌,從而發(fā)揮出抗炎活性[26]。孟慶龍等研宄發(fā)現(xiàn),桑黃胞內(nèi)多糖PIP和胞外多糖PIE對二甲苯致小鼠耳腫脹均具有非常高的抑制作用,能抑制由角叉菜誘導產(chǎn)生小鼠足跖腫脹和棉球引發(fā)小鼠肉芽腫脹和炎癥反應(yīng),并且提高小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)[27]。
Hur等分別以正丁醇、氯仿、水和甲醇作為溶劑,使用浸提法提取桑黃子實體,其提取得率分別為0.026%、0.008%、0.016%和0.06%,采用二倍稀釋法計算各提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌效果,結(jié)果顯示抗菌效果最好的是桑黃子實體正丁醇浸提物(MIC=63~125 μg/mL)[28]。
Liu等從桑黃中提取純化出多糖(PBPP),測定其抗DPPH、抗羥自由基和還原能力,結(jié)果顯示出顯著的體外抗氧化性[20]。Yuan等研究發(fā)現(xiàn)桑黃多糖能降低血液丙二醛含量,并提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性[29]。祝子坪等采用化學模擬體系檢測桑黃胞內(nèi)和胞外多糖體外抗氧化能力,發(fā)現(xiàn)桑黃多糖抗氧化作用具有明顯的量效關(guān)系,且胞外與胞內(nèi)多糖在清除羥自由基、DPPH等的能力上存在差異[30]。Kozarski等通過測定桑黃多糖的還原能力來研究其抗氧化性,發(fā)現(xiàn)其還原能力隨濃度升高而明顯增加,隨后保持穩(wěn)定不變[31]。
桑黃在我國分布廣泛,如黑龍江、吉林、華北、西北及四川、云南、西藏、臺灣、廣東等地,它作為傳統(tǒng)的寶貴中藥材,其藥理學作用廣泛并且有效安全,已吸引國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注和研究。桑黃含有多糖、黃酮、甾體類、吡喃酮類、呋喃類、萜類等活性成分,這些活性成分將被用于醫(yī)藥保健開發(fā)中,在抗腫瘤、提高機體免疫力、抗氧化、消炎等方面發(fā)揮重大作用。
近年來有關(guān)桑黃活性成分的藥理作用及作用機制研究的報道較多,但其研究多集中于體外,同時有關(guān)桑黃活性成分間是否存在相互與協(xié)同效應(yīng),桑黃藥效成分的分子結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)修飾、構(gòu)效關(guān)系與臨床評價,桑黃菌種及培養(yǎng)條件對其藥效的影響,桑黃真?zhèn)萎a(chǎn)品檢測、代表性成分與產(chǎn)品等級標準等方面的研究較為落后。今后隨著對這些方面深入研究后取得成果,將會大力推動桑黃開發(fā)利用的進程。
天然桑黃在我國數(shù)量較少,伴隨著近年來全國各地地對天然桑黃開啟掠奪性開采,天然桑黃資源近乎枯竭。但隨著我國經(jīng)濟快速發(fā)展,人們健康保健意識也逐漸提高,對享有“森林黃金”美稱的桑黃的需求量不斷增加。解決這一資源與需求之間的矛盾,除加強天然桑黃資源保護外,還需要加大桑黃人工栽培開發(fā)。日本和韓國早期對桑黃進行人工栽培試驗已經(jīng)達到了批量生產(chǎn)規(guī)模,并主要用于制造抗癌產(chǎn)品和高檔美容養(yǎng)顏保健品等,目前也開發(fā)為抑制艾滋病的新型藥物。桑黃人工栽培的研究在國內(nèi)起步相對較遲,桑黃副產(chǎn)品種類也較少。研究桑黃的液體及固體培養(yǎng)基配方、高效人工培養(yǎng)桑黃子實體技術(shù)以及高效提取純化桑黃菌絲體和子實體活性成分工藝,探明桑黃活性成分抗癌、免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗疲勞等作用及其機理,研發(fā)桑黃藥用活性成分副產(chǎn)品以及保健食品,是未來桑黃開發(fā)與應(yīng)用的重點與方向。