李曼姝，柯銀鉛，張紫琴，劉呈雄，鄒 坤

小花清風(fēng)藤莖葉化學(xué)成分及其保肝活性研究

李曼姝，柯銀鉛#，張紫琴，劉呈雄*，鄒 坤*

三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院，天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 宜昌 443002

研究小花清風(fēng)藤莖葉的化學(xué)成分及其保肝護(hù)肝活性。采用正相、反相硅膠柱色譜、凝膠柱色譜和半制備液相色譜等方法分離純化，通過NMR、MS等技術(shù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。從小花清風(fēng)藤莖葉中分離得到22個(gè)化合物，分別鑒定為-反式-阿魏酰酪胺（1）、油酸（2）、()-1,8-heptadeca diene（3）、-反式-對(duì)香豆酰基去甲辛弗（4）、()--formyl-nornuciferin（5）、-demethyl--formyldehydronuciferine（6）、--cinnamoyltyramine（7）、油酸酰胺（8）、1,2,4-trimethoxybenzene（9）、2-(3-methoxyphenyl) isoindoline-1,3-dione（10）、景洪哥納香胺酮（11）、squamolone（12）、樺木酸甲酯（13）、白樺脂酸（14）、3-氧代齊墩果酸（15）、牛蒡子苷（16）、2-(3′′,4′′-dimethoxybenzyl)-3-(3′-methoxy- 4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone（17）、matairesinol（18）、lappaol F（19）、山柰酚（20）、lappaol A（21）和lappaol B（22）?；衔?、3、5～8、10～12和16～19為首次從清風(fēng)藤屬植物中分離得到。其中化合物8、11、13、14、16、20和22有顯著的保肝護(hù)肝活性。

小花清風(fēng)藤；保肝護(hù)肝；油酸酰胺；景洪哥納香胺酮；白樺脂酸；牛蒡子苷

小花清風(fēng)藤Wall. ex Roxb.是清風(fēng)藤科清風(fēng)藤屬的雙子葉植物，主要分布于喀斯特地貌區(qū)[1]。藥材收錄于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版，主要功效為清熱利濕、利膽、止血。用于黃疸濕熱癥，外傷出血[2]。胡祚俊等[3]用小花清風(fēng)藤治療84例病毒性肝炎甲型（甲肝）和病毒性肝炎乙型（乙肝）患者，療效顯著。小花清風(fēng)藤具有豐富的藥理活性，如保肝護(hù)肝[4-9]、抗流感病毒[10]、治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[11-12]、調(diào)脂[13]和抗氧化[14]等。近年來(lái)，貴州省先后以小花清風(fēng)藤為主要配方開發(fā)了系列治療肝膽疾病的藥物：如龍華清肝沖劑[15]、膽炎康膠囊[16]、小花清風(fēng)藤膠囊[17]、復(fù)方小花清風(fēng)藤[4]等。胡建忠等[18]制備出小花清風(fēng)藤金銀花復(fù)配花茶，具有抗菌、抗病毒、降糖、調(diào)脂、明目清肝等作用。目前已從小花清風(fēng)藤中分離得到多種化合物，主要為五環(huán)三萜類[19-24]、生物堿類[13,22,24-29]、苯丙素類[13,26-28]、黃酮類[27,30-31]等。為了進(jìn)一步研究藥材的化學(xué)成分，探究其保肝護(hù)肝活性，對(duì)小花清風(fēng)藤莖葉進(jìn)行分離，從中分離得到22個(gè)化合物，分別鑒定為-反式-阿魏酰酪胺（-- feruloyltyramine，1）、油酸（oleic acid，2）、()-1,8- heptadeca diene（3）、-反式-對(duì)香豆?；ゼ仔粮()-1,8-heptadeca diene，4]、()--formyl-nornuciferin（5）、-demethyl--formyldehydronuciferine（6）、--cinnamoyltyramine（7）、油酸酰胺（oleamide，8）、1,2,4-trimethoxybenzene（9）、2-(3-methoxyphenyl) isoindoline-1,3-dione（10）、景洪哥納香胺酮（cheliensisaminone，11）、squamolone（12）、樺木酸甲酯（betulinic acid methyl ester，13）、白樺脂酸（betulinic acid，14）、3-氧代齊墩果酸（3-oxooleanolic acid，15）、牛蒡子苷（arctiin，16）、2-(3′′,4′′-dimethoxy- benzyl)-3-(3′-methoxy-4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone（17）、matairesinol（18）、lappaol F（19）、山柰酚（kaempferol，20）、lappaol A（21）和lappaol B（22）。其中化合物2、3、5～8、10～12和16～19為首次從清風(fēng)藤屬植物中分離得到。以MTT比色法測(cè)試藥物對(duì)被CCl4損傷的人正常肝細(xì)胞LO2的保護(hù)作用，結(jié)果化合物8、11、13、14、16、20和22能顯著提高CCl4損傷的LO2細(xì)胞的存活率，說明化合物8、11、13、14、16、20和22有顯著的保肝護(hù)肝活性。

1 儀器與材料

1.1 材料

小花清風(fēng)藤莖和葉采自貴州省黔西南布依族苗族自治州興義市冊(cè)亨縣，經(jīng)三峽大學(xué)天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室王玉兵教授鑒定為小花清風(fēng)藤Wall. ex Roxb.，其標(biāo)本（201700227）現(xiàn)存于該實(shí)驗(yàn)室。LO2細(xì)胞購(gòu)于北納生物科技有限公司。

1.2 儀器與試劑

Dionex Ultimate 3000高效液相色譜儀（美國(guó)戴安公司）；LC-6AD半制備液相色譜儀（日本島津公司）；色譜柱（YMC-Pack ODA-A，250 mm×10 mm，10 μm，半制備型；250 mm×4.6 mm，5 μm，分析型，日本YMC公司）；Bruker AV 400核磁共振波譜儀（瑞士布魯克公司）；Thermo Scientific ISQ LT單四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）；低溫冷凍干燥機(jī)（美國(guó)Labconco公司）；AL204-IC電子天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；3111型CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)賽默飛世爾Thermo公司）；潔凈工作臺(tái)（天津市泰斯特儀器有限公司）；Vortex-Genie 2渦旋振蕩器（美國(guó)Scientific Industries）；高壓滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠）。

正相硅膠（100～200、200～300目，青島海洋所化工廠）；分析純石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇等（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）；色譜純甲醇、乙腈（美國(guó)TEDIA公司）；1640培養(yǎng)基 [賽默飛世爾（蘇州）儀器有限公司]；青鏈霉素混合液（北京索萊寶科技有限公司）；胎牛血清（蘭州百靈生物技術(shù)有限公司）；胰蛋白酶（武漢科瑞生物技術(shù)有限公司）；二甲基噻唑二苯基四嘩溴鹽（MTT，Sigma公司）。

2 方法

2.1 提取與分離

取干燥粉碎后的小花清風(fēng)藤莖葉5.4 kg，用工業(yè)甲醇加熱回流（55 ℃）提取4次（15 h/次）。減壓濃縮為浸膏。加水懸浮，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取。得到各部位浸膏，分別為石油醚部位浸膏70 g、氯仿部位浸膏33 g、醋酸乙酯部位浸膏28 g、正丁醇部位浸膏24 g。

取27 g石油醚部位浸膏，正相硅膠以石油醚-醋酸乙酯（100∶0→0∶1），醋酸乙酯-甲醇（100∶0→0∶1）進(jìn)行梯度洗脫，將餾份合并為23個(gè)組分（Fr. 1～23）。Fr. 3析出晶體，經(jīng)過多次重結(jié)晶，得到化合物13（3.2 mg）；Fr. 5通過Sephadex LH-20以石油醚-氯仿-甲醇（1∶1∶1）洗脫，得到化合物14（1.4 mg）、15（2.5 mg）。

取26 g氯仿部位浸膏，通過正相硅膠柱以氯仿- 甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，將餾份合并為14個(gè)組分（Fr. 24～38）。將Fr. 32與Fr. 33合并后，通過正相硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇（100∶0→0∶100）梯度洗脫，得到Fr. 32.1～32.12；將Fr. 32.2通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到化合物1（2.0 mg）、2（2.7 mg）、3（2.1 mg）；Fr. 32.3通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到化合物4（6.2 mg）；將Fr. 27通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]分為Fr. 27.1～27.6；Fr. 27.5通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到Fr. 27.5.1～27.5.6；將Fr. 27.5.1通過薄層板制備[二氯甲烷-甲醇（11∶1）]，得到化合物5（3.2 mg）；將Fr. 27.5.3通過薄層板制備[二氯甲烷-甲醇（8∶1）]得到化合物6（1.2 mg）；將Fr. 27.4通過半制備高效液相色譜（乙腈-水30∶70）分為Fr. 27.4.1～27.4.6；將Fr. 27.4.2通過薄層板制備后，用Sephadex LH-20以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，再通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（53∶47）]得到化合物7（3.4 mg）、8（5.7 mg）；將Fr. 27.1用Sephadex LH-20以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物9（2.2 mg）；將Fr. 27.1.12通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（10∶90→100∶0）]得到化合物10（1.8 mg）、11（7.5 mg）、12（2.1 mg）。

取粉碎后的小花清風(fēng)藤莖葉13 kg，用工業(yè)甲醇加熱回流（55 ℃）提取2次（4 h/次）。減壓濃縮為浸膏。加水懸浮，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。得到各部位浸膏，分別為石油醚部位浸膏145.8 g、醋酸乙酯部位浸膏140.1 g、正丁醇部位浸膏76.7 g。

取60 g正丁醇浸膏，通過大孔樹脂以乙醇-水（0∶100→100∶0）梯度洗脫，得到81個(gè)餾份（z1～z81），通過高效液相色譜分析，將z56～z71合并為Fr.39；將Fr. 39通過反相硅膠柱色譜，以甲醇-水（10∶90→100∶0）梯度洗脫，得到Fr. 39.1～39.24；將Fr. 39.13通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（45∶55）]得到化合物16（14.7 mg）；將Fr. 39.17通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（57∶43）]得到化合物17（34.0 mg）；將Fr. 39.15通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（42∶58）]得到化合物18（1.8 mg）；將Fr. 39.18通過半制備高效液相色譜（甲醇-水48∶52）得到化合物19（25.1 mg）；將Fr. 39.20通過Toyopearl HW-40F，以二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物20（1.3 mg）；將Fr. 39.17.1通過半制備高效液相色譜[乙腈-水（38∶62）]得到Fr. 39.17.1.1～39.17.1.3；將Fr. 39.17.1.1通過半制備高效液相色譜[甲醇-水（58∶42）]得到化合物21（12.5 mg）、22（23.8 mg）。

2.2 LO2細(xì)胞評(píng)價(jià)藥物的保護(hù)作用

2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與藥物處理 參考文獻(xiàn)方法[32-34]，選用CCl4肝損傷模型。實(shí)驗(yàn)分為調(diào)零組、對(duì)照組、模型組和給藥組（化合物低、中、高質(zhì)量濃度分別為25、50、100 μg/mL）。加入10 mL CCl4于100 mL含10% FBS的1640培養(yǎng)基中，制成飽和的CCl4培養(yǎng)基溶液。將待測(cè)化合物溶于飽和的CCl4培養(yǎng)基溶液中制成藥品溶液，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組加入含10% FBS的1640培養(yǎng)基100 μL/孔，模型組加入含CCl4飽和的培養(yǎng)基溶液100 μL/孔，給藥組加入樣品溶液100 μL/孔，將培養(yǎng)板置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

2.2.2 LO2細(xì)胞存活率測(cè)定 采用MTT比色法，測(cè)定前4 h，每孔加入20 μL的MTT溶液（5 mg/mL），終止培養(yǎng)，吸出上清液，再加入DMSO 150 μL/孔，待結(jié)晶溶解后，測(cè)定每孔492 nm的吸光度（）值，計(jì)算LO2細(xì)胞的存活率。

細(xì)胞存活率=(實(shí)驗(yàn)—調(diào)零)/(對(duì)照—調(diào)零)

2.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過SPSS13.0軟件分析，以單因素方差分析（one-way ANOVA）進(jìn)行多組間差異的比較，以Dunnett-檢驗(yàn)比較兩組間均數(shù)的差異；＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。EI-MS/: 313 [M]+；C18H19NO4。1H-NMR (400 MHz, Methanol-4): 2.79 (2H, t,= 7.3 Hz, H-2′′), 3.49 (2H, dd,= 8.0, 6.7 Hz, H-1′′), 3.92 (3H, s, -OCH3), 4.63 (2H, s, -OH), 6.43 (1H, d,= 15.7 Hz, H-2), 6.72 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′′′, 5′′′), 6.75 (1H, d,= 8.5 Hz, H-6′), 6.82 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′), 7.02～7.15 (3H, m, H-2′, 2′′′, 6′′′), 7.46 (1H, d,= 15.7 Hz, H-3), 8.56 (1H, brs, -NH)；13C-NMR (100 MHz, Methanol-4): 34.4 (C-2′′), 41.1 (C-1′′), 55.0 (3′-OMe), 110.2 (C-2′), 114.9 (C-3′′′), 114.9 (C-5′′′), 115.1 (C-5′), 117.4 (C-3), 121.8 (C-6′), 129.3 (C-2′′′), 130.0 (C-6′′′), 140.6 (C-2)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[35]對(duì)比，鑒定化合物1為-反式-阿魏酰酪胺。

化合物2：白色粉末。EI-MS/: 254 [M]+；C16H30O2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 0.86 (3H, t,= 6.9 Hz, H-18), 1.30～1.50 (20H, m, H-4～7, 12～17), 1.48 (2H, m, H-3), 2.00 (4H, m, H-8, 11), 5.34 (2H, m, H-9, 10)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 14.4 (C-18), 22.6 (C-17), 25.6 (C-3), 27.0 (C-12), 27.0 (C-13), 29.0 (C-4), 29.2 (C-16), 29.2 (C-15), 29.3 (C-14), 29.4 (C-13), 29.5 (C-5), 29.6 (C-12), 31.8 (C-16), 35.6 (C-2), 130.1 (C-9), 130.1 (C-10), 174.9 (C-1)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[36]對(duì)比，鑒定化合物2為油酸。

化合物3：白色粉末。EI-MS/: 236 [M]+；C17H32。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 0.87 (3H, m, H-17), 1.15～1.35 (18H, m, H-4～6, 11～16), 1.95～2.05 (6H, m, H-3, 7, 10), 5.31～5.38 (2H, m, H-1), 5.76～5.85 (1H, m, H-2)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 14.4 (C-17), 22.5 (C-16), 25.6 (C-14), 27.0 (C-13), 29.0 (C-12), 29.1 (C-11), 29.2 (C-4), 29.3 (C-5), 29.4 (C-6), 29.5 (C-15), 29.5 (C-7), 31.7 (C-3), 35.6 (C-10), 115.3 (C-1), 127.6 (C-8), 130.1 (C-9), 138.2 (C-2)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[37]對(duì)比，鑒定化合物3為()-1,8-heptadeca diene。

化合物4：白色粉末。EI-MS/: 299 [M]+；C17H17NO4。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.19 (2H, m, H-8′), 4.55 (1H, dd,= 7.9 Hz, 4.6 Hz, H-7′), 6.49 (1H, d,= 16.0 Hz, H-8), 6.73 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 6.78 ( 2H, d,= 8.5 Hz, H-3, 5), 7.15 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 7.31 (2H, d,= 15.7 Hz, H-7), 7.38 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2, 6), 8.02 (1H, t,= 5.8 Hz, H-2′, 6′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 47.6 (C-8′), 71.7 (C-7′), 115.2 (C-3′, 5′), 116.3 (C-3, 5), 119.0 (C-8), 125.1 (C-1), 127.6 (C-2, 6), 129.7 (C-2′, 6′), 134.5 (C-1′), 139.2 (C-7), 156.5 (C-4′), 156.9 (C-4), 166.1 (C-9)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[38]對(duì)比，鑒定化合物4為-反式-對(duì)香豆?；ゼ仔粮ァ?/p>

化合物5：白色粉末。EI-MS/: 325 [M]+；C19H19NO4。1H-NMR (400 MHz, Methanol-4): 2.64～3.12 (2H, m, H-4ax, 4eq), 3.60 (1H, m, H-5ax), 3.84 (1H, m, H-5eq), 7.22～7.46 (3H, m, H-8～10), 8.28 (1H, s, -CHO), 8.37 (1H, dd,= 8.1, 1.2 Hz, H-11)；13C-NMR (100 MHz, Methanol-4): 30.2 (C-4), 33.8 (C-7), 41.9 (C-5), 49.4 (C-6a), 55.1 (2-OMe), 59.0 (1-OMe), 111.8 (C-3), 126.7 (C-3a), 127.5 (C-9, 10), 128.1 (C-8, 11, 11b, 11c), 129.2 (C-11a), 136.1 (C-7a), 145.8 (C-1), 152.5 (C-2), 163.3 (C-12)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[39]對(duì)比，鑒定化合物5為()--formyl-nornuciferin。

化合物6：白色粉末。EI-MS/: 323 [M]+；C19H17NO4。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.28 (2H, t,= 6.1 Hz, H-4), 3.92 (3H, s, H-14), 4.05 (3H, s, H-13), 4.14 (2H, t,= 6.1 Hz, H-5), 7.35 (1H, s, H-3), 7.48 (1H, s, H-7), 7.59 (2H, dt,= 8.2, 4.7 Hz, H-9, 10), 7.88 (1H, m, H-8), 8.95 (1H, s, H-12), 9.58 (1H, m, H-11)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 29.9 (C-4), 38.3 (C-5), 55.6 (C-13), 58.8 (C-14), 112.0 (C-7), 113.0 (C-3), 118.5 (C-11c), 125.2 (C-11b), 125.7 (C-10), 126.9 (C-9), 127.4 (C-8), 127.8 (C-11), 128.1 (C-3a), 128.7 (C-6a), 132.6 (C-7a), 132.8 (C-11a), 145.7 (C-1), 151.9 (C-2), 161.5 (C-12)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[40]對(duì)比，鑒定化合物6為-demethyl-- formyldehydronuciferine。

化合物7：白色粉末。EI-MS/: 267 [M]+；C17H17NO2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.67 (2H, m, H-7′), 3.75 (2H, m, H-8′), 6.63 (1H, d,= 15.8 Hz, H-8), 6.70 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 7.03 (3H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 7.41 (3H, m, H-2, 4, 6), 7.57 (2H, d,= 6.5 Hz, H-3, 5), 8.17 (1H, d,= 11.1 Hz, H-7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.8 (C-7′), 41.2 (C-8′), 115.6 (C-3′, 5′), 122.8 (C-8), 127.9 (C-3, 5), 129.4 (C-2, 6), 129.8 (C-4), 129.9 (C-2′, 6′), 135.4 (C-1), 138.9 (C-7), 156.1 (C-4′), 165.3 (C-9)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[41]對(duì)比，鑒定化合物7為-- cinnamoyltyramine。

化合物8：白色粉末。EI-MS/: 281 [M]+；C18H35NO。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 0.86 (3H, t,= 6.7 Hz, -CH3), 1.17～1.30 (20H, m), 1.65 (2H, m, CH2CH2CONH2), 2.00 (4H, m, CH2CH= CHCH2), 2.14 (2H, t,= 6.3 Hz, CH2CONH2), 5.33 (2H, m, CH=CH), 5.51 (1H, brs, CONH), 5.83 (1H, brs, CONH)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 175.9 (C=O), 130.1 (C=C), 129.7 (C=C), 35.6, 31.7, 29.5, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 29.1, 29.0, 28.0, 27.4, 27.0, 25.6, 22.5, 14.1。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[42]對(duì)比，鑒定化合物8為油酸酰胺。

化合物9：無(wú)色結(jié)晶[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 168 [M]+；C9H12O3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.92 (9H, s, -OCH3), 6.86 (1H, d,= 8.0 Hz, H-6), 7.36 (1H, s, H-2), 7.58 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 55.0 (4-OMe), 56.1 (1, 2-OMe), 112.5 (C-2), 114.4 (C-6), 123.7 (C-5), 147.2 (C-4), 147.4 (C-3), 150.9 (C-1)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[43]對(duì)比，鑒定化合物9為1,2,4- trimethoxybenzene。

化合物10：白色粉末。EI-MS/: 254 [M]+；C15H12NO3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 3.38 (3H, s, H-7′), 6.84 (1H, d,= 8.3 Hz, H-4′), 7.35 (1H, s, H-2′), 7.55 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6′), 7.60 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 7.65 (2H, dd,= 5.7, 3.3 Hz, H-5, 6), 7.75 (2H, dd,= 5.7, 3.3 Hz, H-4, 7)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 57.7 (C-7′), 106.1 (C-2′), 110.3 (C-6′), 114.9 (C-4′), 123.8 (C-4, 7), 128.3 (C-5, 6), 131.0 (C-3a, 7a), 159.6 (C-3′), 168.9 (C-1, 3)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[44]對(duì)比，鑒定化合物10為2-(3-methoxy- phenyl)isoindoline-1,3-dione。

化合物11：無(wú)色油狀物。EI-MS/: 155 [M]+；C7H9NO3。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 1.53 (1H, m, H-5b), 1.79 (1H, m, H-6b), 1.95 (1H, m, H-6a), 2.13 (1H, m, H-5a), 2.43 (1H, dd,= 16.1, 13.0 Hz, H-3b), 2.57 (1H, dd,= 16.1, 4.2 Hz, H-3a), 3.28 (1H, m, H-7b), 3.32 (1H, m, H-7a), 3.70 (1H, m, H-4)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 23.1 (C-6), 32.8 (C-5), 37.4 (C-3), 44.7 (C-7), 53.1 (C-4), 151.4 (C-1), 171.3 (C-2)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[45]對(duì)比，鑒定化合物11為景洪哥納香胺酮。

化合物12：白色粉末。EI-MS/: 128 [M]+；C5H8N2O2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 1.92 (2H, tt,= 7.1, 7.9 Hz, H-4), 2.52 (2H, t,= 7.9 Hz, H-3), 3.67 (2H, t,= 7.1 Hz, H-5), 7.36 (1H, br, NH2), 7.81 (1H, br, NH2)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 16.8 (C-4), 33.3 (C-3), 45.5 (C-5), 153.3 (C-6), 177.4 (C-2)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[46]對(duì)比，鑒定化合物12為squamolone。

化合物13：無(wú)色針狀結(jié)晶 [氯仿-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 470 [M]+；C31H50O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.79 (3H, s, H-23), 0.86 (3H, s, H-24), 0.95 (3H, s, H-25), 1.00 (3H, s, H-26), 1.64 (3H, s, H-27), 1.72 (3H, s, H-30), 3.04 (1H, td,= 4.5, 11.0 Hz, H-19), 3.22 (1H, td,= 5.5, 11.1 Hz, H-3), 3.71 (3H, s, -OCH3), 4.64 (1H, dd,= 1.4, 2.4 Hz, H-29b), 4.78 (1H, d,= 2.3 Hz, H-29a)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 14.7 (C-27), 15.4 (C-24), 16.0 (C-26), 16.1 (C-25), 18.3 (C-6), 19.4 (C-30), 20.9 (C-11), 25.5 (C-12), 27.4 (C-2), 28.0 (C-23), 29.7 (C-15), 30.6 (C-21), 32.2 (C-16), 34.3 (C-7), 37.0 (C-10), 37.2 (C-22), 38.3 (C-13), 38.7 (C-1), 38.9 (C-4), 40.7 (C-8), 42.4 (C-14), 47.0 (C-19), 49.5 (-OCH3), 50.6 (C-18), 51.3 (C-9), 55.4 (C-5), 56.6 (C-17), 79.0 (C-3), 109.6 (C-29), 150.6 (C-20), 176.7 (C-28)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[47-48]對(duì)比，鑒定化合物13為樺木酸甲酯。

化合物14：無(wú)色針狀結(jié)晶[氯仿-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 456 [M]+；C30H48O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.79, 0.86, 0.98, 1.01, 1.02, 1.73 (18H, s, 3×-CH3), 4.65 (1H, dd,= 2.4, 1.4 Hz, H-30a), 4.78 (1H, d,= 2.2 Hz, H-30b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 14.2 (C-27), 15.4 (C-24), 16.1 (C-25), 16.2 (C-26), 17.4 (C-6), 18.6 (C-30), 20.3 (C-11), 24.9 (C-12), 26.8 (C-2), 27.6 (C-23), 29.0 (C-21), 29.7 (C-15), 31.2 (C-16), 33.5 (C-7), 35.7 (C-22), 36.2 (C-10), 37.5 (C-13), 38.1 (C-4), 38.2 (C-1), 39.8 (C-8), 41.6 (C-14), 45.7 (C-19), 47.9 (C-18), 49.3 (C-9), 54.3 (C-5), 55.1 (C-17), 76.2 (C-3), 109.1 (C-29), 149.7 (C-20), 176.6 (C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[49]，故鑒定化合物14為白樺脂酸。

化合物15：白色針狀晶體 [氯仿-甲醇（1∶1）]。EI-MS: 454 [M]+；C30H46O3。1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 0.85 (3H, s, H-26), 0.95 (3H, s, H-30), 0.97 (3H, s, H-29), 1.07 (3H, s, H-25), 1.09 (3H, s, H-24), 1.12 (3H, s, H-23), 1.18 (3H, s, H-27), 2.40 (1H, ddd,= 15.9, 6.8, 3.6 Hz, H-2α), 2.59 (1H, ddd,= 15.9, 11.1, 7.3 Hz, H-2β), 2.88 (1H, dd,= 13.8, 4.6 Hz, H-18), 5.34 (1H, t,= 3.6 Hz, H-12)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 15.0 (C-25), 17.0 (C-26), 19.6 (C-24), 21.5 (C-10), 22.9 (C-11), 23.5 (C-16), 23.6 (C-30), 25.9 (C-27), 26.5 (C-2), 27.7 (C-15), 30.7 (C-20), 32.2 (C-29), 32.4 (C-23), 33.1 (C-22), 33.8 (C-9), 34.2 (C-21), 36.8 (C-6), 39.1 (C-1), 39.3 (C-8), 41.1 (C-18), 41.8 (C-14), 45.8 (C-19), 46.6 (C-17), 46.9 (C-4), 47.5 (C-7), 55.3 (C-5), 122.4 (C-12), 143.7 (C-13), 183.8 (C-28), 217.8 (C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[50]，故鑒定化合物15為3-氧代齊墩果酸。

化合物16：白色粉末。EI-MS/: 534 [M]+；C27H34O11。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.44 (1H, m, H-8a), 2.49 (1H, m, H-7′b), 2.52 (1H, m, H-8b), 2.57 (1H, m, H-7′a), 2.77 (1H, dd,= 9.0, 3.1 Hz, H-7b), 2.83 (1H, dd,= 6.0, 4.1 Hz, H-7a), 3.72 (6H, s, 3, 3′-OCH3), 3.73 (3H, s, 4′-OCH3), 3.90 (1H, t,= 8.5 Hz, H-9′b), 4.11 (1H, dd,= 8.1, 7.2 Hz, H-9′a), 4.86 (1H, d,= 7.0 Hz, Glu-H-1′′), 6.62 (1H, dd,= 8.1, 1.8 Hz, H-6), 6.68 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.70 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.80 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2′), 6.85 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5), 7.00 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.0 (C-7), 37.3 (C-7′), 41.2 (C-8′), 46.0 (C-8), 55.9 (3-OCH3), 55.9 (3′-OCH3), 56.1 (4′-OCH3), 61.1 (C-6′′), 70.1 (C-4′′), 71.2 (C-9′), 73.7 (C-2′′), 77.3 (C-5′′), 77.5 (C-3′′), 100.6 (Glu-C-1′′), 112.3 (C-5), 112.8 (C-2), 114.3 (C-2′), 115.5 (C-5′), 120.9 (C-6′), 121.8 (C-6), 131.7 (C-1), 132.2 (C-1′), 145.7 (C-4), 147.8 (C-4′), 149.1 (C-3, 3′), 178.9 (C-9)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[51]對(duì)比，鑒定化合物16為牛蒡子苷。

化合物17：白色粉末。EI-MS/: 372 [M]+；C21H24O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.42 (1H, m, H-3), 2.49～2.44 (1H, m, H-5a), 2.52 (1H, m, H-5b), 2.70～2.64 (1H, m, H-2), 2.73 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-6a), 2.81 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-6b), 3.72 (9H, s, 3×OCH3), 3.86 (1H, t,= 8.1 Hz, H-4a), 4.07 (1H, t,= 8.1 Hz, H-4b), 6.59 (1H, dd,= 7.9, 2.0 Hz, H-6′), 6.60 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.64 (1H, dd,= 8.3, 2.0 Hz, H-6′′), 6.70 (1H, d,= 8.0 Hz, H-2′′), 6.75 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5′′), 6.83 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.2 (C-6), 37.4 (C-5), 41.3 (C-3), 46.1 (C-2), 55.8 (3×CH3), 71.2 (C-4), 112.3 (C-5′′), 112.8 (C-2), 113.9 (C-2′′), 115.8 (C-5′), 120.8 (C-6′), 122.0 (C-6′′), 129.3 (C-l′), 131.7 (C-l′′), 145.6 (C-4′), 147.8 (C-3′), 147.9 (C-4′′), 149.1 (C-3′′), 179.0 (C-1)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[52]對(duì)比，鑒定化合物17為2-(3′′,4′′- dimethoxybenzyl)-3-(3′-methoxy-4′-hydroxybenzyl)-- butyrolactone。

化合物18：淡黃色粉末。EI-MS/: 358 [M]+；C20H22O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.49 (4H, m, H-7, 8, 8′), 2.74 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-7′a), 2.81 (1H, dd,= 13.5, 5.4 Hz, H-7′b), 3.72 (6H, s, 2×OCH3), 3.86 (1H, dd,= 8.6, 7.1 Hz, H-9a), 4.07 (1H, dd,= 8.6, 7.0 Hz, H-9b), 5.82 (2H, brs, 2×OH), 6.48 (1H, dd,= 7.9, 2.0 Hz, H-6), 6.58 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 6.61 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.65 (1H, brs, H-2′), 6.67 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5), 6.73 (1H, d,= 1.9 Hz, H-5′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.1 (C-7′), 37.3 (C-7), 41.4 (C-8), 46.1 (C-8′), 56.0 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 71.2 (C-9), 113.1 (C-2), 113.9 (C-2′), 115.7 (C-5), 115.8 (C-5′), 121.2 (C-6), 122.0 (C-6′), 129.4 (C-1′), 130.1 (C-1), 145.3 (C-4), 145.5 (C-4′), 147.8 (C-3), 147.9 (C-3′), 179.1 (C-9′)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[53]對(duì)比，鑒定化合物18為matairesinol。

化合物19：淡黃色無(wú)定形粉末。EI-MS/: 714 [M]+；C40H42O12。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.47 (1H, m, H-8′), 2.52 (1H, m, H-8), 2.74 (1H, dd,= 16.7, 7.6 Hz, H-7), 2.90 (1H, dd,= 16.7, 4.2 Hz, H-7), 3.72 (2H, dt,= 9.4, 6.3 Hz, H-8′′, 8′′′), 3.91 (1H, dd,= 7.9, 6.3 Hz, H-9′a), 4.15 (1H, dd,= 7.9, 6.3 Hz, H-9′b), 5.42 (1H, d,= 6.3 Hz, H-7′′), 5.43 (1H, d,= 6.3 Hz, H-7′′′), 6.56 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2′), 6.61 (1H, d,= 1.5 Hz, H-6), 6.70 (1H, d,= 1.5 Hz, H-6′), 6.72 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2), 6.74 (2H, d,= 1.5 Hz, H-5′′, 5′′′), 6.75 (2H, dd,= 3.4, 1.5 Hz, H-5′′, 5′′′), 6.90 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′′), 6.92 (1H, d,= 1.5 Hz, H-2′′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.6 (C-7), 37.7 (C-7′), 41.6 (C-8), 46.2 (C-8), 53.5 (C-8′′′), 53.6 (C-8′′), 56.0 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 56.1 (-OCH3), 63.3 (C-9′′), 63.6 (C-9′′′), 71.2 (C-9′), 87.5 (C-7′′), 87.5 (C-7′′′), 110.6 (C-2′′), 110.7 (C-2′′′), 113.0 (C-2), 113.8 (C-2′), 115.7 (C-6), 115.7 (C-6′), 115.7 (C-5′′), 117.3 (C-5′′′), 118.0 (C- 6′′), 119.1 (C-6′′′), 129.6 (C-1), 129.7 (C-1′), 131.5 (C-1′′), 132.0 (C-1′′′), 132.8 (C-5), 132.9 (C-5′), 143.8 (C-4′′′), 143.9 (C-4′′), 146.5 (C-4), 146.6 (C-4′), 146.8 (C-3′′), 146.8 (C-3′′′), 148.0 (C-3), 148.0 (C-3′), 179.0 (C-9)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[54]對(duì)比，鑒定化合物19為lappaol F。

化合物20：黃色針狀結(jié)晶[二氯甲烷-甲醇（1∶1）]。EI-MS/: 286 [M]+；C15H10O6。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 6.21 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 6.43 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 6.94 (2H, d,= 8.9 Hz, H-3′, 5′), 8.12 (2H, d,= 8.9 Hz, H-2′, 6′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 93.1 (C-8), 97.9 (C-6), 103.1 (C-10), 114.9 (C-3′, 5′), 122.3 (C-1′), 129.3 (C-2′, 6′), 135.8 (C-3), 146.7 (C-2), 156.9 (C-9), 159.2 (C-4′), 161.1 (C-5), 164.2 (C-7), 176.0 (C-4)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[55]對(duì)比，鑒定化合物20為山柰酚。

化合物21：黃色無(wú)定形粉末。EI-MS/: 536 [M]+；C30H32O9。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.45 (1H, m, H-8′), 2.48 (1H, s, H-7′), 2.72 (1H, m, H-8), 2.80 (1H, m, H-7), 3.73 (1H, m, H-8′′), 3.88 (1H, t,= 8.4 Hz, H-9′a), 4.12 (1H, dd,= 10.5, 5.1 Hz, H-9′b), 5.42 (1H, d,= 6.7 Hz, H-7′′), 6.55 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.57 (1H, d,= 1.6 Hz, H-6′), 6.60 (1H, brs, H-6), 6.66 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, s, H-5), 6.73 (1H, d,= 2.0 Hz, H-5′′), 6.75 (1H, brs, H-6′′), 6.90 (1H, brs, H-2′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.1 (C-7), 37.6 (C-7′), 41.3 (C-8′), 46.1 (C-8), 53.6 (C-8′′), 56.0, 56.1, 56.1 (3×-OMe), 63.4 (C-9′′), 71.2 (C-9′), 87.4 (C-7′′), 110.7 (C-2′′), 113.1 (C-2), 113.9 (C-2′), 115.7 (C-5), 115.8 (C-5′′), 117.3 (C-6′), 119.0 (C-6′′), 122.1 (C-6), 129.3 (C-1′), 129.7 (C-1), 132.1 (C-1′′), 132.9 (C-5′), 143.9 (C-4), 145.5 (C-4′′), 146.5 (C-4′), 146.8 (C-3), 147.8 (C-3′′), 148.0 (C-3′), 179.0 (C-9)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[56]對(duì)比，鑒定化合物21為lappaol A。

化合物22：黃色無(wú)定形粉末。EI-MS/: 536 [M]+；C30H32O9。1H-NMR (400 MHz, DMSO-6): 2.73 (1H, m, H-7′), 2.87 (1H, d,= 4.3 Hz, H-7a), 2.90 (1H, d,= 4.6 Hz, H-7), 3.56 (1H, dd,= 10.8, 7.2 Hz, H-8′′), 3.88 (1H, t,= 8.6 Hz, H-9′a), 4.09 (1H, t,= 8.1 Hz, H-9′b), 5.44 (1H, d,= 6.4 Hz, H-7′′), 6.47 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.49 (1H, d,= 1.9 Hz, H-6), 6.62 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6′), 6.65 (1H, s, H-2), 6.68 (1H, d,= 6.9 Hz, H-5′), 6.73( 1H, d,= 1.5 Hz, H-5′′), 6.74 (1H, m, H-6′′), 6.89 (1H, d,= 1.6 Hz, H-2′′)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-6): 34.6 (C-7), 37.4 (C-7′), 41.7 (C-8′), 46.2 (C-8), 53.7 (C-8′′), 55.8, 55.9, 56.1 (3×-OMe), 63.7 (C-9′′), 71.2 (C-9′), 87.5 (C-7′′), 110.5 (C-2′′), 113.0 (C-2), 113.7 (C-2′), 115.7 (C-5′′), 115.8 (C-5′), 118.1 (C-6), 118.9 (C-6′′), 121.2 (C-6′), 129.5 (C-1), 130.0 (C-1′), 131.5 (C-1′′), 132.9 (C-5), 143.8 (C-4), 145.4 (C-4′′), 146.5 (C-4′), 146.8 (C-3), 147.9 (C-3′′), 148.0 (C-3′), 179.0 (C-9)。與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[54]對(duì)比，鑒定化合物22為lappaol B。

3.2 保肝護(hù)肝活性測(cè)試結(jié)果

活性測(cè)試結(jié)果（圖1）顯示，化合物8、11、13、14、16、20和22給藥組細(xì)胞存活率與模型組相比，有明顯的增高，表明化合物8、11、13、14、16、20和22有顯著的保肝護(hù)肝活性。

4 討論

小花清風(fēng)藤是布依族、苗族民間用藥，用其根莖入藥，可用于醫(yī)治急性黃疸型肝炎。在臨床上該藥材也可用于治療病毒性肝炎[34]。近年來(lái)，貴州省先后以小花清風(fēng)藤為主要配方開發(fā)了系列治療肝膽疾病的藥物。因此，本實(shí)驗(yàn)研究了小花清風(fēng)藤莖葉的化學(xué)成分及其保肝護(hù)肝活性，分離鑒定了22個(gè)化合物，主要有五環(huán)三萜類、生物堿、黃酮類、木脂素類等化合物。其中五環(huán)三萜類化合物有3個(gè)，分別為樺木酸甲酯（13）、白樺脂酸（14）和3-氧代齊墩果酸（15），生物堿類化合物有10個(gè)，黃酮類有1個(gè)，為山柰酚（20）；木脂素類有6個(gè)，分別為牛蒡子苷（16）、2-(3′′,4′′-dimethoxybenzyl)-3-(3′- methoxy-4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone（17）、matairesinol（18）、lappaol F（19）、lappaol A（21）和lappaol B（22），其他類化合物有2個(gè)，分別為油酸（2）和1,2,4-trimethoxybenzene（9）。其中化合物2、3、5～8、10～12和16～19為首次從清風(fēng)藤屬植物中分離得到。

與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01

本實(shí)驗(yàn)對(duì)化合物4、8、11、13、14和16～22進(jìn)行了活性測(cè)試。模型組的LO2細(xì)胞用CCl4損傷，測(cè)定藥物對(duì)被CCl4損傷的LO2細(xì)胞的保護(hù)作用。結(jié)果化合物8、11、13、14、16、20和22顯著提高了被CCl4損傷的LO2細(xì)胞的存活率，表明藥物有顯著的保肝護(hù)肝作用。

本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究了小花清風(fēng)藤的化學(xué)成分，為其物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了依據(jù)。此前，小花清風(fēng)藤藥理研究多限于粗提物，少有學(xué)者對(duì)其化合物進(jìn)行活性評(píng)價(jià)。因此，本實(shí)驗(yàn)豐富了小花清風(fēng)藤化合物藥理活性的研究，小花清風(fēng)藤具有開發(fā)成保肝護(hù)肝藥物的前景。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on chemical constituents from tems and leaves ofand their hepatoprotective activity

LI Man-shu, KE Yin-qian, ZHANG Zi-qin, LIU Cheng-xiong, ZOU Kun

Hubei Key Laboratory of Natural Products Research and Development, College of Biological and Pharmaceutical Sciences, Three Gorges University, Yichang 443002, China

To study the chemical composition from the stems and leaves ofand their liver-protecting activity.Normal phase, reverse phase silica gel column chromatography, gel column chromatography and semi-preparative liquid chromatography were used for separation and purification, and the structures of the isolated compounds were identified by NMR and MS.Twenty-two compounds were isolated from the stems and leaves of, including-trans-feruloyl tyramine (1), oleic acid (2), ()-1, 8-Heptadeca diene (3),---coumaroyl octopamine (4), ()--formyl- nornuciferin() (5),-demethyl--formyldehydronuciferine (6),--cinnamoyltyramine (7), oleamide (8), 1,2,4- trimethoxybenzene (9), 2-(3-methoxyphenyl)isoindoline-1,3-dione (10), cheliensisaminone (11), squamolone (12), betulinic acid methyl ester (13), betulinic acid (14), 3-oxooleanolic acid (15), arctiin (16), 2-(3′′,4′′-dimethoxybenzyl)-3-(3′-methoxy- 4′-hydroxybenzyl)--butyrolactone (17), matairesinol (18), lappaol F (19), kaempferol (20), lappaol A (21), and lappaol B (22).Compounds 2, 3, 5—8, 10—12, and 16—19 are isolated fromgenus for the first time. Among them, compounds 8, 11, 13, 14, 16, 20, and 22 have showed significant hepatoprotective activities.

Wall. ex Roxb.; liver protection activity; oleamide; cheliensisaminone; betulinic acid; arctiin

R284.1

A

0253 - 2670(2021)23 - 7096 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.23.003

2021-03-10

國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81803383）；水利部水土保持植物開發(fā)管理中心合作項(xiàng)目（SDHZ2019030）

李曼姝（1996—），碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。E-mail: limanshu168@126.com

劉呈雄（1986—），副教授，博士，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。E-mail: liuchengxiong666@126.com

鄒 坤（1962—），教授，博士，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。E-mail: kzou@ctgu.edu.cn

#共同第一作者：柯銀鉛（1997—），碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊凰幬锘瘜W(xué)。E-mail: 1135070919@qq.com

[責(zé)任編輯 王文倩]